DB32T3889-2020河灘冬青組織培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.20

B61

DB32

江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB32/T3889—2020

河灘冬青組織培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程

TechnicalregulationfortissuecultureofIlexmetabaptista

2020-10-13發(fā)布2020-11-13實(shí)施

江蘇省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB32/T3899—2020

河灘冬青組織培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了河灘冬青組織培養(yǎng)的母株選擇、外植體選擇與處理、初代培養(yǎng)、繼代增殖、瓶外生根

培養(yǎng)、增殖苗扦插、插后管理和記錄。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于河灘冬青的組培快繁。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的

修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用

于本標(biāo)準(zhǔn)。

LY/T1882—2010林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程

3母株選擇

選擇河灘冬青優(yōu)樹株系或無性系分株。

4外植體選擇與處理

4.1選擇

在4月~6月，選擇連續(xù)3d以上的晴天，從母株上剪取生長健壯無病蟲害的當(dāng)年生萌芽條作為外

植體，截取部位以萌芽條的中、下部為宜，規(guī)格以長度10cm~15cm、直徑3mm左右為宜。

4.2滅菌

用中性洗潔精洗凈外植體，并用自來水沖洗10min~15min。在超凈工作臺(tái)上，用75%乙醇溶液消

毒外植體30s，無菌水沖洗2次；再用10%次氯酸鈉溶液浸泡外植體8min~10min，無菌水漂洗2次，

每次5min，隨后置于滅菌處理過的濾紙上吸去表面水分。

5初代培養(yǎng)

5.1培養(yǎng)基

誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+0.2mg/LZT+2.0mg/L6-BA+0.5g/L活性炭，pH5.7。培養(yǎng)基制備按照LY/T

1882—2010的規(guī)定進(jìn)行。

5.2誘導(dǎo)培養(yǎng)

將經(jīng)滅菌處理的外植體剪去接觸滅菌液的傷口部位，切成約1.0cm帶芽莖段，接種在含有誘導(dǎo)培

1

DB32/T3899—2020

養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)溫度為24℃~26℃，光照強(qiáng)度為1500lx~3000lx，光照時(shí)間為12h~15h。培養(yǎng)

30d，長成6cm~8cm高的無菌試管苗。

6繼代增殖

6.1培養(yǎng)基

繼代培養(yǎng)基：MS+4.0mg/LZT+0.2mg/LIBA+活性碳0.5g/L，pH5.7。培養(yǎng)基制備按照LY/T

1882—2010的規(guī)定進(jìn)行。

6.2繼代培養(yǎng)

將誘導(dǎo)培養(yǎng)的試管苗剪成1cm~2cm帶芽莖段垂直接種于繼代培養(yǎng)基。培養(yǎng)溫度為24℃~26℃，

光照強(qiáng)度為1500lx~3000lx，光照時(shí)間為12h~15h。每隔50d繼代1次。

7瓶外生根培養(yǎng)

7.1設(shè)施

宜在溫室進(jìn)行培養(yǎng)。

7.2容器

宜采用塑料穴盤，穴孔呈倒錐形，口徑約4.5cm，高約5cm。舊穴盤需清洗消毒后才可使用。

7.3基質(zhì)

基質(zhì)選用pH6.2~pH6.8的草炭。

7.4基質(zhì)的消毒處理

用0.2%高錳酸鉀和0.2%多菌靈交替噴灑扦插基質(zhì)至完全濕潤，用薄膜覆蓋堆捂，待使用前2d~3d

揭膜晾曬，裝入容器后即可扦插。

8增殖苗扦插

8.1插條處理

選擇生長健壯的增殖苗，剪去芽苗根部膨大部分，清水清洗根部，按單株剪下，每株剪成3cm~4cm

帶芽莖段作為插條。

8.2扦插

插條基部采用500mg/LIBA浸泡30min，處理后用鑷子將組培苗基部插入基質(zhì)，深度為0.8cm~1.0

cm。

8.3覆膜

扦插后澆透水，在穴盤上覆蓋保鮮膜，保溫保濕。

2

DB32/T3899—2020

9插后管理

9.1環(huán)境控制

置于溫度20℃~30℃、光照2000lx~2500lx、光周期16h/d、濕度80%的環(huán)境條件下培養(yǎng)，2周~

3周后揭膜。

9.2水肥管理

每隔3d澆一次水，每兩周噴一次葉面肥，噴施濃度為0.1%~0.3%的尿素溶液。

9.3病害防治

每月噴一次殺菌劑，宜采用0.1%的多菌靈和百菌清混合藥劑。

9.4出苗

苗高10cm~15cm，根系發(fā)達(dá)，無病蟲害，即可出苗。

10記錄

根據(jù)組織培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程內(nèi)容進(jìn)行記錄，按時(shí)填寫，做到準(zhǔn)確無誤，記錄保存2年以上。

_________________________________

3

DB32/T3889—2020

前??言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。

本標(biāo)準(zhǔn)由江蘇省林業(yè)局提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)由江蘇省林業(yè)科學(xué)研究院起草。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：張敏、陳慶生、周鵬、黃婧、郝明灼、李飛。

I

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河灘冬青組織培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了河灘冬青組織培養(yǎng)的母株選擇、外植體選擇與處理、初代培養(yǎng)、繼代增殖、瓶外生根

培養(yǎng)、增殖苗扦插、插后管理和記錄。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于河灘冬青的組培快繁。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的

修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用

于本標(biāo)準(zhǔn)。

LY/T1882—2010林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程

3母株選擇

選擇河灘冬青優(yōu)樹株系或無性系分株。

4外植體選擇與處理

4.1選擇

在4月~6月，選擇連續(xù)3d以上的晴天，從母株上剪取生長健壯無病蟲害的當(dāng)年生萌芽條作為外

植體，截取部位以萌芽條的中、下部為宜，規(guī)格以長度10cm~15cm、直徑3mm左右為宜。

4.2滅菌

用中性洗潔精洗凈外植體，并用自來水沖洗10min~15min。在超凈工作臺(tái)上，用75%乙醇溶液消

毒外植體30s，無菌水沖洗2次；再用10%次氯酸鈉溶液浸泡外植體8min~10min，無菌水漂洗2次，

每次5min，隨后置于滅菌處理過的濾紙上吸去表面水分。

5初代培養(yǎng)

5.1培養(yǎng)基

誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+0.2mg/LZT+2.0mg/L6-BA+0.5g/L活性炭，pH5.7。培養(yǎng)基制備按照LY/T

1882—2010的規(guī)定進(jìn)行。

5.2誘導(dǎo)培養(yǎng)

將經(jīng)滅菌處理的外植體剪去接觸滅菌液的傷口部位，切成約1.0cm帶芽莖段，接種在含有誘導(dǎo)培

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DB32/T3899—2020

養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)溫度為24℃~26℃，光照強(qiáng)度為1500lx~3000lx，光照時(shí)間為12h~15h。培養(yǎng)

30d，長成6cm~8cm高的無菌試管苗。

6繼代增殖

6.1培養(yǎng)基

繼代培養(yǎng)基：MS+4.0mg/LZT+0.2mg/LIBA+活性碳0.5g/L，pH5.7。培養(yǎng)基制備按照LY/T

1882—2010的規(guī)定進(jìn)行。

6.2繼代培養(yǎng)

將誘導(dǎo)培養(yǎng)的試管苗剪成1cm~2cm帶芽莖段垂直接種于繼代培養(yǎng)基。培養(yǎng)溫度為24℃~26℃，

光照強(qiáng)度為1500lx~3000lx，光照時(shí)間為12h~15h。每隔50d繼代1次。

7瓶外生根培養(yǎng)

7.1設(shè)施

宜在溫室進(jìn)行培養(yǎng)。

7.2容器

宜采用塑料穴盤，穴孔呈倒錐形，口徑約4.5cm，高約5cm。舊穴盤需清洗消毒后才可使用。

7.3基質(zhì)

基質(zhì)選用pH6.2~pH6.8的草炭。

7.4基質(zhì)的消毒處理

用0.2%高錳酸鉀和0.2%多菌靈交替噴灑扦插基質(zhì)至完全濕潤，用薄膜覆蓋堆捂，待使用前2d~3d

揭膜晾曬，裝入容器后即可扦插。

8增殖苗扦插

8.1插條處理

選擇生長健壯的增殖苗，剪去芽苗根部膨大部分，清水清洗根部，按單株剪下，每株剪成3cm~4cm

帶芽莖段作為插條。

8.2扦插

插條基部采用500mg/LIBA浸泡30min，處理后用鑷子將組培苗基部插入基質(zhì)，深度為0.8cm~1.0

cm。

8.3覆膜

扦插后澆透水，在穴盤上覆蓋保鮮膜，保溫保濕。