動(dòng)物血清學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)（動(dòng)物疫病檢驗(yàn)課件）

血清學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)概述1血清學(xué)反應(yīng)的概念、類型2血清學(xué)反應(yīng)的一般特點(diǎn)3血清學(xué)反應(yīng)的影響因素4血清學(xué)反應(yīng)的應(yīng)用、發(fā)展趨向血清學(xué)反應(yīng)的概念、類型血清學(xué)反應(yīng)的概念什么是血清學(xué)反應(yīng)？血清學(xué)反應(yīng)的類型一級(jí)血清學(xué)試驗(yàn)二級(jí)血清學(xué)試驗(yàn)三級(jí)血清學(xué)試驗(yàn)01Ag-Ab結(jié)合后借助理化測(cè)試技術(shù)使不可見(jiàn)的反應(yīng)，轉(zhuǎn)化為可見(jiàn)反應(yīng)或可檢測(cè)的數(shù)據(jù)；對(duì)Ag-Ab要求不限。02Ag-Ab結(jié)合后經(jīng)過(guò)一定階段出現(xiàn)凝集、沉淀、細(xì)胞溶解等現(xiàn)象；不能用于單價(jià)抗原單價(jià)抗體的檢測(cè)。03在活細(xì)胞或活體內(nèi)進(jìn)行的Ag-Ab反應(yīng)；專門(mén)用于檢測(cè)中和抗體和過(guò)敏性抗體。血清學(xué)反應(yīng)的類型血清學(xué)反應(yīng)的類型血清學(xué)反應(yīng)的一般特點(diǎn)(一)特異性與交叉性血清學(xué)反應(yīng)的一般特點(diǎn)血清學(xué)反應(yīng)的一般特點(diǎn)親合性與解離性Ag-Ab的結(jié)合就像酶與底物、激素與其受體的結(jié)合一樣不是化學(xué)的反應(yīng)，而是非共價(jià)鍵的可逆的結(jié)合，既具有親和性，也具有解離性。血清學(xué)反應(yīng)的一般特點(diǎn)血清學(xué)反應(yīng)的一般特點(diǎn)血清學(xué)反應(yīng)的一般特點(diǎn)抗原與抗體最適比例與帶現(xiàn)象血清學(xué)反應(yīng)的一般特點(diǎn)血清學(xué)反應(yīng)的影響因素血清學(xué)反應(yīng)的影響因素血清學(xué)反應(yīng)的應(yīng)用和發(fā)展趨向血清學(xué)反應(yīng)的應(yīng)用

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確切診斷快速檢測(cè)生物活性物質(zhì)的微量檢測(cè)微生物的鑒定和分型基因分離、克隆篩選，表達(dá)產(chǎn)物的定性、定量分析和純化血清學(xué)反應(yīng)的發(fā)展趨勢(shì)A反應(yīng)的微量化和自動(dòng)化BC方法的標(biāo)準(zhǔn)化和試劑的商品化技術(shù)的敏感化、特異化和精密化DE檢測(cè)技術(shù)的系列化方法的快速簡(jiǎn)易化和家庭化凝集反應(yīng)概述1凝集反應(yīng)的概念2凝集反應(yīng)的原理3凝集反應(yīng)的分類凝集反應(yīng)的概念凝集反應(yīng)的概念細(xì)菌、紅細(xì)胞或表面帶有抗原的乳膠顆粒等不溶性的顆粒抗原，當(dāng)與相應(yīng)的抗體結(jié)合，在有電解質(zhì)存在時(shí)，抗原與抗體結(jié)合形成凝集團(tuán)塊，即稱為凝集反應(yīng)。凝集反應(yīng)中：抗原稱為凝集原，抗體稱為凝集素。凝集反應(yīng)的原理通常細(xì)菌和紅細(xì)胞等顆粒性抗原在懸液中帶弱負(fù)電荷，周?chē)粚优c之牢固結(jié)合的正離子，外面又排列一層松散的負(fù)離子層，構(gòu)成一個(gè)雙離子層，使顆粒相互排斥。在有電介質(zhì)存在的條件下，當(dāng)特異抗體與相應(yīng)抗原顆?；パa(bǔ)結(jié)合時(shí)，抗體的交聯(lián)作用克服了抗原顆粒表面的電位，而使顆粒凝集在一起。凝集反應(yīng)的原理凝集反應(yīng)的發(fā)生分兩階段抗原抗體的特異結(jié)合。在電解質(zhì)的參與下，出現(xiàn)可見(jiàn)的凝集顆粒。凝集反應(yīng)的原理凝集反應(yīng)的分類直接凝集試驗(yàn)

細(xì)菌、螺旋體和紅細(xì)胞等顆?？乖?，在適當(dāng)電解質(zhì)參與下可直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集。凝集反應(yīng)的分類試管凝集試驗(yàn)玻板凝集試驗(yàn)?zāi)磻?yīng)的分類試管凝集試驗(yàn)

方法：在試管中進(jìn)行。特點(diǎn)：準(zhǔn)確、耗時(shí)。用途：定量試驗(yàn)，如診斷布病，測(cè)定抗體的凝集價(jià)。玻板凝集試驗(yàn)

方法：玻璃板或瓷片上進(jìn)行。特點(diǎn)：簡(jiǎn)單、快速。用途：定性試驗(yàn)，如細(xì)菌鑒定、血型鑒定等。乳膠凝集反應(yīng)

將可溶性抗原（或抗體）先吸附于適當(dāng)大小的顆粒性載體的表面，然后與相應(yīng)抗體（或抗原）作用，在適宜電解質(zhì)存在的條件下，出現(xiàn)的特異性凝集現(xiàn)象。凝集反應(yīng)的分類正向間接凝集反應(yīng)

凝集反應(yīng)的分類反向間接凝集反應(yīng)用特異性抗體致敏載體以檢測(cè)標(biāo)本中的相應(yīng)抗原。

凝集反應(yīng)的分類間接血凝協(xié)同凝集乳膠凝集橋梁凝集凝集反應(yīng)的分類間接凝集反應(yīng)的分類凝集反應(yīng)的分類乳膠凝集試驗(yàn)乳膠又稱膠乳，是聚苯乙烯聚合的高分子乳狀液，乳膠微球直徑約0.8um，對(duì)蛋白質(zhì)、核酸等大分子物質(zhì)具有良好的吸附性能。用它作載體吸附抗原（或抗體），可用以檢測(cè)相應(yīng)的抗體（或抗原）。本法具有快速簡(jiǎn)便、保存方便、比較準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。凝集反應(yīng)的分類協(xié)同凝集試驗(yàn)?zāi)磻?yīng)的分類橋梁凝集試驗(yàn)?zāi)磻?yīng)的分類沉淀試驗(yàn)概述1沉淀試驗(yàn)的概念2沉淀試驗(yàn)的類型沉淀試驗(yàn)概念沉淀試驗(yàn)概念沉淀試驗(yàn)是指可溶性抗原（如細(xì)菌的外毒素、內(nèi)毒素、菌體裂解液、病毒的可溶性抗原、血清、組織滲出液等）與相應(yīng)抗體結(jié)合，在適當(dāng)量電解質(zhì)存在下，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間，形成肉眼可見(jiàn)的白色沉淀。試驗(yàn)反應(yīng)中的抗原稱為沉淀原，抗體為沉淀素。沉淀試驗(yàn)的分類沉淀試驗(yàn)的類型

沉淀反應(yīng)液相沉淀試驗(yàn)固相沉淀試驗(yàn)環(huán)狀沉淀試驗(yàn)絮狀沉淀試驗(yàn)瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)免疫電泳試驗(yàn)

沉淀反應(yīng)液相沉淀試驗(yàn)固相沉淀試驗(yàn)環(huán)狀沉淀試驗(yàn)絮狀沉淀試驗(yàn)瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)免疫電泳試驗(yàn)環(huán)狀沉淀試驗(yàn)方法：在小口徑試管中進(jìn)行。原理：試管內(nèi)，下層沉淀素和上層沉淀原在液界面應(yīng)形成白色沉淀環(huán)。本試驗(yàn)常用做抗原定性，如炭疽的診斷（Ascoli氏試驗(yàn)）、鑒別血跡等。沉淀試驗(yàn)的類型絮狀沉淀試驗(yàn)方法：試管或凹玻片中進(jìn)行。原理：將抗原與相應(yīng)抗體在試管內(nèi)或凹玻片上混勻，在電解質(zhì)存在的情況下，抗原抗體復(fù)合物形成肉眼可見(jiàn)的絮狀沉淀物。本試驗(yàn)常用毒素與抗毒素的滴定，如診斷梅毒的康氏反應(yīng)。沉淀試驗(yàn)的類型利用可溶性抗原與抗體在半固體瓊脂內(nèi)進(jìn)行擴(kuò)散，若抗原與抗體對(duì)應(yīng)，并且比例適當(dāng)，就會(huì)出現(xiàn)白色沉淀線，此為陽(yáng)性反應(yīng)。分為單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)和雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)兩類。瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)沉淀試驗(yàn)的類型單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)本試驗(yàn)主要用于檢測(cè)標(biāo)本中各種免疫球蛋白和血清中各種補(bǔ)體成分的含量，敏感性很高。沉淀試驗(yàn)的類型雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)本法主要是用于檢測(cè)血清中各種免疫球蛋白、甲胎蛋白、乙肝表面抗原等。缺點(diǎn)是需要時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，靈敏度不高。沉淀試驗(yàn)的類型將瓊脂內(nèi)電泳和凝膠內(nèi)沉淀反應(yīng)相結(jié)合。具有分辨率高，靈敏度高，時(shí)間短，是很理想的分離和鑒定蛋白質(zhì)混合物的方法。用于抗原、抗體定性及純度的測(cè)定。臨床上常見(jiàn)的是對(duì)流免疫電泳和火箭免疫電泳。免疫電泳技術(shù)沉淀試驗(yàn)的類型對(duì)流免疫電泳本法比瓊脂擴(kuò)散法的靈敏度要高10～16倍，而且反應(yīng)時(shí)間短，可用于各種蛋白的定性和半定量測(cè)定。沉淀試驗(yàn)的類型火箭免疫電泳當(dāng)抗原與抗體分子達(dá)到適當(dāng)比例時(shí)，形成一個(gè)形狀如火箭的不溶性免疫復(fù)合物沉淀峰，峰的高度與撿樣中的抗原濃度呈正相關(guān)。1、2、3、4為標(biāo)準(zhǔn)抗原；5、6為標(biāo)本抗原沉淀試驗(yàn)的類型補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)概述1認(rèn)識(shí)補(bǔ)體系統(tǒng)2補(bǔ)體的激活3補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)的系統(tǒng)4補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)的原理5補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)的應(yīng)用認(rèn)識(shí)補(bǔ)體系統(tǒng)認(rèn)識(shí)補(bǔ)體系統(tǒng)補(bǔ)體又稱補(bǔ)體系統(tǒng)、簡(jiǎn)稱C，是存在于正常人和動(dòng)物血清與組織液中的一種不耐熱，經(jīng)活化后具有酶活性的血清蛋白質(zhì)。可介導(dǎo)免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)；可被抗原-抗體復(fù)合物或微生物所激活，導(dǎo)致病原微生物裂解或被吞噬。補(bǔ)體的激活補(bǔ)體的激活補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)的系統(tǒng)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)的原理補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)具有高度的特異性和一定的敏感性，是診斷人畜傳染病常用的血清學(xué)診斷方法之一。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)的應(yīng)用中和試驗(yàn)概述1中和試驗(yàn)的概念2中和試驗(yàn)的分類中和試驗(yàn)的概念中和試驗(yàn)的概念中和試驗(yàn)指病毒或毒素與相應(yīng)的抗體結(jié)合后，失去對(duì)易感動(dòng)物的致病力的試驗(yàn)方法。中和試驗(yàn)的概念優(yōu)點(diǎn)：敏感性和特異性高，中和抗體在體內(nèi)存在時(shí)間長(zhǎng)，大多數(shù)病毒的中和抗體與免疫力有直接關(guān)系。缺點(diǎn)：要使用活的宿主系統(tǒng)，病毒對(duì)宿主系統(tǒng)產(chǎn)生作用需要一定的時(shí)間。01診斷病毒性傳染病02檢查材料中的毒素或鑒定細(xì)菌的毒素類型03測(cè)定抗病毒血清或抗毒素效價(jià)04新分離病毒的鑒定和分型中和試驗(yàn)的概念中和試驗(yàn)的分類中和試驗(yàn)的分類簡(jiǎn)單定性中和試驗(yàn)固定血清稀釋病毒法固定病毒稀釋血清法空斑減少法用于檢出病料中的病毒，亦可進(jìn)行初步鑒定或定型。先根據(jù)病毒易感性選定試驗(yàn)動(dòng)物及接種途徑。將病料研磨，并稀釋成一定濃度。污染的病料需加抗生素，或用細(xì)菌濾器過(guò)濾，與已知的抗血清等量混合，并用正常血清加稀釋病料作對(duì)照?；旌虾笾?7℃1h，分別接種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，每組至少3只。分別隔離飼喂，觀察發(fā)病和死亡情況。對(duì)照動(dòng)物死亡，而中和組動(dòng)物不死，即證實(shí)該病料中含有與該抗血清相應(yīng)的病毒。本法亦可用于毒素的鑒定和分型。

簡(jiǎn)單定性中和試驗(yàn)本法多將病毒作10倍遞增稀釋，分置2列試管，第一列加正常血清(對(duì)照組)，第二列加待檢血清(試驗(yàn)組)?；旌虾?，置37℃作用1h，將各管混合液分別接種選定的試驗(yàn)動(dòng)物，每一稀釋度用3-5只動(dòng)物。接種后，逐日觀察，并記錄其死亡數(shù)，觀察結(jié)束后，計(jì)算LD50和中和指數(shù)，本法適用于大量樣本的檢測(cè)。對(duì)病毒而言，通常中和指數(shù)大于50者判為陽(yáng)性，10-49為可疑，小于10為陰性。

固定血清稀釋病毒法本法用以測(cè)定抗病毒血清的中和價(jià).將待檢血清2倍遞增稀釋，加等量已知毒價(jià)的病毒液(與血清混合后，每一接種劑量含病毒100LD50)，搖勻后，置37℃作用1h，接種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物后觀察。固定病毒稀釋血清法先將病毒稀釋成適當(dāng)濃度，使每0.2ml含80個(gè)-100個(gè)PFU(空斑形成單位)，與不同稀釋度的待檢血清等量混合，置37℃作用1h-2h；分別測(cè)定PFU，使空斑減少50%血清稀釋度即為該血清的中和價(jià)?？瞻邷p少法免疫標(biāo)記技術(shù)概述1免疫標(biāo)記技術(shù)的概念2免疫標(biāo)記技術(shù)的類型免疫標(biāo)記技術(shù)的概念免疫標(biāo)記技術(shù)用熒光素、放射性同位素、酶、鐵蛋白、膠體金及化學(xué)（或生物）發(fā)光劑作為示蹤物，標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)，借助于熒光顯微鏡、酶標(biāo)檢測(cè)儀等儀器，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果直接鏡檢觀察或進(jìn)行自動(dòng)化測(cè)定。免疫標(biāo)記技術(shù)的概念免疫標(biāo)記技術(shù)的分類免疫標(biāo)記技術(shù)的類型免疫標(biāo)記技術(shù)酶標(biāo)記熒光標(biāo)記發(fā)光標(biāo)記放射物標(biāo)記金標(biāo)記放射物標(biāo)記分析用放射物標(biāo)記抗原或抗體發(fā)展的放射免疫分析，該技術(shù)利用核素標(biāo)記物的放大效應(yīng)，改善了待測(cè)物的檢測(cè)下限，同時(shí)以抗體或抗原作為結(jié)合試劑，大大提高了檢測(cè)方法的特異性，缺點(diǎn)是對(duì)環(huán)境造成污染。免疫標(biāo)記技術(shù)的類型熒光標(biāo)記分析所用標(biāo)記物是熒光素和熒光染料，是將抗原或抗體標(biāo)記以熒光物質(zhì)與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合，在熒光顯微鏡或紫外線照射下，檢測(cè)熒光強(qiáng)度和熒光現(xiàn)象的一種檢測(cè)方法。熒光標(biāo)記免疫法靈敏度高，但熒光素常會(huì)產(chǎn)生生物學(xué)毒性，導(dǎo)致抗體或抗原的靈敏度和選擇性下降。免疫標(biāo)記技術(shù)的類型熒光標(biāo)記分類直接免疫熒光技術(shù)，具有操作簡(jiǎn)單、時(shí)程短、特異性高的優(yōu)點(diǎn)，但也存在缺點(diǎn)如不能檢查抗體，敏感性較差。間接免疫熒光技術(shù)，可以用已知的抗原檢測(cè)未知的抗體，也可用已知的抗體測(cè)出未知抗原。免疫標(biāo)記技術(shù)的類型酶標(biāo)記分析技術(shù)用酶代替熒光素標(biāo)記抗體，建立了酶標(biāo)抗體技術(shù)，用于生物組織中抗原的定位和鑒定。免疫標(biāo)記技術(shù)的類型酶標(biāo)記分析技術(shù)免疫酶組織化學(xué)染色技術(shù)指帶顯色劑標(biāo)記的特異性抗體在組織細(xì)胞原位，通過(guò)抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng)，對(duì)相應(yīng)抗原進(jìn)行定性、定位、定量測(cè)定的一項(xiàng)技術(shù)。免疫標(biāo)記技術(shù)的類型酶標(biāo)記分析技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是將抗原抗體