動物血清學檢驗技術(shù)（動物疫病檢驗課件）

血清學檢驗技術(shù)概述1血清學反應(yīng)的概念、類型2血清學反應(yīng)的一般特點3血清學反應(yīng)的影響因素4血清學反應(yīng)的應(yīng)用、發(fā)展趨向血清學反應(yīng)的概念、類型血清學反應(yīng)的概念什么是血清學反應(yīng)？血清學反應(yīng)的類型一級血清學試驗二級血清學試驗三級血清學試驗01Ag-Ab結(jié)合后借助理化測試技術(shù)使不可見的反應(yīng)，轉(zhuǎn)化為可見反應(yīng)或可檢測的數(shù)據(jù)；對Ag-Ab要求不限。02Ag-Ab結(jié)合后經(jīng)過一定階段出現(xiàn)凝集、沉淀、細胞溶解等現(xiàn)象；不能用于單價抗原單價抗體的檢測。03在活細胞或活體內(nèi)進行的Ag-Ab反應(yīng)；專門用于檢測中和抗體和過敏性抗體。血清學反應(yīng)的類型血清學反應(yīng)的類型血清學反應(yīng)的一般特點(一)特異性與交叉性血清學反應(yīng)的一般特點血清學反應(yīng)的一般特點親合性與解離性Ag-Ab的結(jié)合就像酶與底物、激素與其受體的結(jié)合一樣不是化學的反應(yīng)，而是非共價鍵的可逆的結(jié)合，既具有親和性，也具有解離性。血清學反應(yīng)的一般特點血清學反應(yīng)的一般特點血清學反應(yīng)的一般特點抗原與抗體最適比例與帶現(xiàn)象血清學反應(yīng)的一般特點血清學反應(yīng)的影響因素血清學反應(yīng)的影響因素血清學反應(yīng)的應(yīng)用和發(fā)展趨向血清學反應(yīng)的應(yīng)用

1

2

3

4

5

確切診斷快速檢測生物活性物質(zhì)的微量檢測微生物的鑒定和分型基因分離、克隆篩選，表達產(chǎn)物的定性、定量分析和純化血清學反應(yīng)的發(fā)展趨勢A反應(yīng)的微量化和自動化BC方法的標準化和試劑的商品化技術(shù)的敏感化、特異化和精密化DE檢測技術(shù)的系列化方法的快速簡易化和家庭化凝集反應(yīng)概述1凝集反應(yīng)的概念2凝集反應(yīng)的原理3凝集反應(yīng)的分類凝集反應(yīng)的概念凝集反應(yīng)的概念細菌、紅細胞或表面帶有抗原的乳膠顆粒等不溶性的顆粒抗原，當與相應(yīng)的抗體結(jié)合，在有電解質(zhì)存在時，抗原與抗體結(jié)合形成凝集團塊，即稱為凝集反應(yīng)。凝集反應(yīng)中：抗原稱為凝集原，抗體稱為凝集素。凝集反應(yīng)的原理通常細菌和紅細胞等顆粒性抗原在懸液中帶弱負電荷，周圍吸引一層與之牢固結(jié)合的正離子，外面又排列一層松散的負離子層，構(gòu)成一個雙離子層，使顆粒相互排斥。在有電介質(zhì)存在的條件下，當特異抗體與相應(yīng)抗原顆粒互補結(jié)合時，抗體的交聯(lián)作用克服了抗原顆粒表面的電位，而使顆粒凝集在一起。凝集反應(yīng)的原理凝集反應(yīng)的發(fā)生分兩階段抗原抗體的特異結(jié)合。在電解質(zhì)的參與下，出現(xiàn)可見的凝集顆粒。凝集反應(yīng)的原理凝集反應(yīng)的分類直接凝集試驗

細菌、螺旋體和紅細胞等顆粒抗原，在適當電解質(zhì)參與下可直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集。凝集反應(yīng)的分類試管凝集試驗玻板凝集試驗?zāi)磻?yīng)的分類試管凝集試驗

方法：在試管中進行。特點：準確、耗時。用途：定量試驗，如診斷布病，測定抗體的凝集價。玻板凝集試驗

方法：玻璃板或瓷片上進行。特點：簡單、快速。用途：定性試驗，如細菌鑒定、血型鑒定等。乳膠凝集反應(yīng)

將可溶性抗原（或抗體）先吸附于適當大小的顆粒性載體的表面，然后與相應(yīng)抗體（或抗原）作用，在適宜電解質(zhì)存在的條件下，出現(xiàn)的特異性凝集現(xiàn)象。凝集反應(yīng)的分類正向間接凝集反應(yīng)

凝集反應(yīng)的分類反向間接凝集反應(yīng)用特異性抗體致敏載體以檢測標本中的相應(yīng)抗原。

凝集反應(yīng)的分類間接血凝協(xié)同凝集乳膠凝集橋梁凝集凝集反應(yīng)的分類間接凝集反應(yīng)的分類凝集反應(yīng)的分類乳膠凝集試驗乳膠又稱膠乳，是聚苯乙烯聚合的高分子乳狀液，乳膠微球直徑約0.8um，對蛋白質(zhì)、核酸等大分子物質(zhì)具有良好的吸附性能。用它作載體吸附抗原（或抗體），可用以檢測相應(yīng)的抗體（或抗原）。本法具有快速簡便、保存方便、比較準確等優(yōu)點。凝集反應(yīng)的分類協(xié)同凝集試驗?zāi)磻?yīng)的分類橋梁凝集試驗?zāi)磻?yīng)的分類沉淀試驗概述1沉淀試驗的概念2沉淀試驗的類型沉淀試驗概念沉淀試驗概念沉淀試驗是指可溶性抗原（如細菌的外毒素、內(nèi)毒素、菌體裂解液、病毒的可溶性抗原、血清、組織滲出液等）與相應(yīng)抗體結(jié)合，在適當量電解質(zhì)存在下，經(jīng)過一段時間，形成肉眼可見的白色沉淀。試驗反應(yīng)中的抗原稱為沉淀原，抗體為沉淀素。沉淀試驗的分類沉淀試驗的類型

沉淀反應(yīng)液相沉淀試驗固相沉淀試驗環(huán)狀沉淀試驗絮狀沉淀試驗瓊脂擴散試驗免疫電泳試驗

沉淀反應(yīng)液相沉淀試驗固相沉淀試驗環(huán)狀沉淀試驗絮狀沉淀試驗瓊脂擴散試驗免疫電泳試驗環(huán)狀沉淀試驗方法：在小口徑試管中進行。原理：試管內(nèi)，下層沉淀素和上層沉淀原在液界面應(yīng)形成白色沉淀環(huán)。本試驗常用做抗原定性，如炭疽的診斷（Ascoli氏試驗）、鑒別血跡等。沉淀試驗的類型絮狀沉淀試驗方法：試管或凹玻片中進行。原理：將抗原與相應(yīng)抗體在試管內(nèi)或凹玻片上混勻，在電解質(zhì)存在的情況下，抗原抗體復(fù)合物形成肉眼可見的絮狀沉淀物。本試驗常用毒素與抗毒素的滴定，如診斷梅毒的康氏反應(yīng)。沉淀試驗的類型利用可溶性抗原與抗體在半固體瓊脂內(nèi)進行擴散，若抗原與抗體對應(yīng)，并且比例適當，就會出現(xiàn)白色沉淀線，此為陽性反應(yīng)。分為單向瓊脂擴散試驗和雙向瓊脂擴散試驗兩類。瓊脂擴散試驗沉淀試驗的類型單向瓊脂擴散試驗本試驗主要用于檢測標本中各種免疫球蛋白和血清中各種補體成分的含量，敏感性很高。沉淀試驗的類型雙向瓊脂擴散試驗本法主要是用于檢測血清中各種免疫球蛋白、甲胎蛋白、乙肝表面抗原等。缺點是需要時間過長，靈敏度不高。沉淀試驗的類型將瓊脂內(nèi)電泳和凝膠內(nèi)沉淀反應(yīng)相結(jié)合。具有分辨率高，靈敏度高，時間短，是很理想的分離和鑒定蛋白質(zhì)混合物的方法。用于抗原、抗體定性及純度的測定。臨床上常見的是對流免疫電泳和火箭免疫電泳。免疫電泳技術(shù)沉淀試驗的類型對流免疫電泳本法比瓊脂擴散法的靈敏度要高10～16倍，而且反應(yīng)時間短，可用于各種蛋白的定性和半定量測定。沉淀試驗的類型火箭免疫電泳當抗原與抗體分子達到適當比例時，形成一個形狀如火箭的不溶性免疫復(fù)合物沉淀峰，峰的高度與撿樣中的抗原濃度呈正相關(guān)。1、2、3、4為標準抗原；5、6為標本抗原沉淀試驗的類型補體結(jié)合試驗概述1認識補體系統(tǒng)2補體的激活3補體結(jié)合試驗的系統(tǒng)4補體結(jié)合試驗的原理5補體結(jié)合試驗的應(yīng)用認識補體系統(tǒng)認識補體系統(tǒng)補體又稱補體系統(tǒng)、簡稱C，是存在于正常人和動物血清與組織液中的一種不耐熱，經(jīng)活化后具有酶活性的血清蛋白質(zhì)?？山閷?dǎo)免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)；可被抗原-抗體復(fù)合物或微生物所激活，導(dǎo)致病原微生物裂解或被吞噬。補體的激活補體的激活補體結(jié)合試驗的系統(tǒng)補體結(jié)合試驗的原理補體結(jié)合試驗具有高度的特異性和一定的敏感性，是診斷人畜傳染病常用的血清學診斷方法之一。補體結(jié)合試驗的應(yīng)用中和試驗概述1中和試驗的概念2中和試驗的分類中和試驗的概念中和試驗的概念中和試驗指病毒或毒素與相應(yīng)的抗體結(jié)合后，失去對易感動物的致病力的試驗方法。中和試驗的概念優(yōu)點：敏感性和特異性高，中和抗體在體內(nèi)存在時間長，大多數(shù)病毒的中和抗體與免疫力有直接關(guān)系。缺點：要使用活的宿主系統(tǒng)，病毒對宿主系統(tǒng)產(chǎn)生作用需要一定的時間。01診斷病毒性傳染病02檢查材料中的毒素或鑒定細菌的毒素類型03測定抗病毒血清或抗毒素效價04新分離病毒的鑒定和分型中和試驗的概念中和試驗的分類中和試驗的分類簡單定性中和試驗固定血清稀釋病毒法固定病毒稀釋血清法空斑減少法用于檢出病料中的病毒，亦可進行初步鑒定或定型。先根據(jù)病毒易感性選定試驗動物及接種途徑。將病料研磨，并稀釋成一定濃度。污染的病料需加抗生素，或用細菌濾器過濾，與已知的抗血清等量混合，并用正常血清加稀釋病料作對照?；旌虾笾?7℃1h，分別接種實驗動物，每組至少3只。分別隔離飼喂，觀察發(fā)病和死亡情況。對照動物死亡，而中和組動物不死，即證實該病料中含有與該抗血清相應(yīng)的病毒。本法亦可用于毒素的鑒定和分型。

簡單定性中和試驗本法多將病毒作10倍遞增稀釋，分置2列試管，第一列加正常血清(對照組)，第二列加待檢血清(試驗組)?；旌虾?，置37℃作用1h，將各管混合液分別接種選定的試驗動物，每一稀釋度用3-5只動物。接種后，逐日觀察，并記錄其死亡數(shù)，觀察結(jié)束后，計算LD50和中和指數(shù)，本法適用于大量樣本的檢測。對病毒而言，通常中和指數(shù)大于50者判為陽性，10-49為可疑，小于10為陰性。

固定血清稀釋病毒法本法用以測定抗病毒血清的中和價.將待檢血清2倍遞增稀釋，加等量已知毒價的病毒液(與血清混合后，每一接種劑量含病毒100LD50)，搖勻后，置37℃作用1h，接種實驗動物后觀察。固定病毒稀釋血清法先將病毒稀釋成適當濃度，使每0.2ml含80個-100個PFU(空斑形成單位)，與不同稀釋度的待檢血清等量混合，置37℃作用1h-2h；分別測定PFU，使空斑減少50%血清稀釋度即為該血清的中和價?？瞻邷p少法免疫標記技術(shù)概述1免疫標記技術(shù)的概念2免疫標記技術(shù)的類型免疫標記技術(shù)的概念免疫標記技術(shù)用熒光素、放射性同位素、酶、鐵蛋白、膠體金及化學（或生物）發(fā)光劑作為示蹤物，標記抗體或抗原進行的抗原抗體反應(yīng)，借助于熒光顯微鏡、酶標檢測儀等儀器，對實驗結(jié)果直接鏡檢觀察或進行自動化測定。免疫標記技術(shù)的概念免疫標記技術(shù)的分類免疫標記技術(shù)的類型免疫標記技術(shù)酶標記熒光標記發(fā)光標記放射物標記金標記放射物標記分析用放射物標記抗原或抗體發(fā)展的放射免疫分析，該技術(shù)利用核素標記物的放大效應(yīng)，改善了待測物的檢測下限，同時以抗體或抗原作為結(jié)合試劑，大大提高了檢測方法的特異性，缺點是對環(huán)境造成污染。免疫標記技術(shù)的類型熒光標記分析所用標記物是熒光素和熒光染料，是將抗原或抗體標記以熒光物質(zhì)與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合，在熒光顯微鏡或紫外線照射下，檢測熒光強度和熒光現(xiàn)象的一種檢測方法。熒光標記免疫法靈敏度高，但熒光素常會產(chǎn)生生物學毒性，導(dǎo)致抗體或抗原的靈敏度和選擇性下降。免疫標記技術(shù)的類型熒光標記分類直接免疫熒光技術(shù)，具有操作簡單、時程短、特異性高的優(yōu)點，但也存在缺點如不能檢查抗體，敏感性較差。間接免疫熒光技術(shù)，可以用已知的抗原檢測未知的抗體，也可用已知的抗體測出未知抗原。免疫標記技術(shù)的類型酶標記分析技術(shù)用酶代替熒光素標記抗體，建立了酶標抗體技術(shù)，用于生物組織中抗原的定位和鑒定。免疫標記技術(shù)的類型酶標記分析技術(shù)免疫酶組織化學染色技術(shù)指帶顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位，通過抗原抗體反應(yīng)和組織化學的呈色反應(yīng)，對相應(yīng)抗原進行定性、定位、定量測定的一項技術(shù)。免疫標記技術(shù)的類型酶標記分析技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附試驗是將抗原抗體