色譜定性定量分析方法課件

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色譜定性定量分析方法1可編輯課件PPT色譜分析方法驗證色譜定量分析方法聯(lián)用技術(shù)定性方法色譜定性分析方法2可編輯課件PPT一、色譜定性分析方法

保留時間tr相對保留時間RRT，t/tr相對保留值α,(t-t0)/(tr-t0）保留指數(shù)I

3可編輯課件PPT

色譜

高分離能力，但鑒別結(jié)構(gòu)的能力較弱。光譜

能提供豐富的結(jié)構(gòu)信息，但是對分析物純度較高。二、色譜-光譜聯(lián)用技術(shù)定性廣泛用于藥物中的雜質(zhì)、體內(nèi)外代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)鑒定4可編輯課件PPT氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用多用于分離易揮發(fā)、熱穩(wěn)定、極性小的化合物GC-MS：采用EI離子源。EI：獲得分子離子峰及豐富的分子結(jié)構(gòu)信息；5可編輯課件PPT分離對象較廣LC-MS：采用API離子源;一級質(zhì)譜獲得分子量信息；高裂解電壓（CID）或二級質(zhì)譜（MS/MS）獲得分子結(jié)構(gòu)信息。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用6可編輯課件PPT例：鹽酸乙哌立松片主要降解產(chǎn)物的定性鑒別

7可編輯課件PPT鑒定要點：1、利用LC-UV選擇最佳LC分離條件，并確定主峰與降解產(chǎn)物的峰位；供試品溶液的LC-UV圖

8可編輯課件PPT2、選擇合適的離子源，利用LC-MS獲得雜質(zhì)的準(zhǔn)分子離子峰。

LC-ESI-MS的總離子流色譜圖

LC-APCI-MS的總離子流色譜圖

9可編輯課件PPT3.獲得降解產(chǎn)物準(zhǔn)分子離子峰的裂解信息。方式一：在APCI條件下采用較高的CID電壓或二級質(zhì)譜裂解m/z175.3，獲得碎片信息；方式二：在GC-MS(EI)質(zhì)譜獲得分子離子峰及其裂解途徑；10可編輯課件PPT4、利用原藥的質(zhì)譜裂解途徑確定降解產(chǎn)物的可能結(jié)構(gòu)；雜質(zhì)YJ的結(jié)構(gòu)11可編輯課件PPTAPCIEI12可編輯課件PPT聯(lián)用技術(shù)定性鑒定規(guī)律

1、分析物質(zhì)結(jié)構(gòu)，確定色譜分離模式；2、以常用檢測器（GC:FID/LC:UV）為手段，優(yōu)化色譜分離條件，確定待鑒定組份峰位；13可編輯課件PPT3、根據(jù)化合物結(jié)構(gòu)，選用合適的光譜技術(shù)鑒定；4、依據(jù)光譜信息進行結(jié)構(gòu)鑒定：根據(jù)質(zhì)譜提供的分子量和分子碎片信息，結(jié)合原藥的光譜信息初步推斷未知物結(jié)構(gòu)；14可編輯課件PPT三、色譜定量分析方法1、色譜信號的測量:色譜峰峰高與峰面積反映檢測器對樣品的響應(yīng)值，定量分析中峰面積更為常用；2、定量分析的方法面積歸一化法；外標(biāo)法；內(nèi)標(biāo)法；標(biāo)準(zhǔn)曲線法

15可編輯課件PPT三、不同檢測器的色譜信號與物質(zhì)濃度關(guān)系

FID、ECD、UV檢測器的響應(yīng)（峰面積）與樣品的濃度呈線性關(guān)系；ELSD響應(yīng)的自然對數(shù)與樣品的濃度或質(zhì)量呈線性關(guān)系；質(zhì)譜（MS-ESI）檢測器高濃度時的響應(yīng)與樣品的質(zhì)量可能呈二次或更復(fù)雜的方式。16可編輯課件PPT四、色譜分析方法驗證

目的：

證明所采用的色譜分析方法適合于相應(yīng)的檢驗要求，判斷能否用于藥品分析。

效能指標(biāo)：評價分析方法的尺度效能指標(biāo)包括:

精密度、準(zhǔn)確度、專屬性、檢測限、定量限、線性與范圍、耐用性、穩(wěn)定性、系統(tǒng)適用性等17可編輯課件PPT

藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗證藥物制劑人體生物利用度和生物等效性試驗指導(dǎo)原則藥物穩(wěn)定性試驗指導(dǎo)原則緩釋、控釋制劑指導(dǎo)原則不同分析測定方法的要求18可編輯課件PPT①專屬性（specificity）:

意義：指有其他成分可能存在情況下，采用的方法能準(zhǔn)確測定出被測物的特性。內(nèi)容：藥物制劑含量測定時的專屬性考察內(nèi)容：A、雜質(zhì)中間體與主成份的分離情況；B、破壞性試驗產(chǎn)生的降解產(chǎn)物與主成份的分離情況：酸、堿、熱、氧化、光破壞C、輔料是否干擾測定。19可編輯課件PPT②準(zhǔn)確度（accuracy）：

意義：測量值與真實值接近的程度。藥物制劑的含量測定以回收率表示。

內(nèi)容：即通過在空白基質(zhì)中加入已知量不同濃度的對照品，比較測定值和加入值確定。一般在期望濃度的80%、100%、120%三個水平量，各測定三次，回收率均值在98-102%。

20可編輯課件PPT③線性范圍（linearityrange）：

意義：

待測物濃度與響應(yīng)值成線性關(guān)系的濃度范圍；

內(nèi)容：用不同濃度對照品溶液分析測定（至少5種），以峰面積與濃度進行線性回歸。制劑分析時方法要求r不小于0.999；生物樣品分析要求r不小于0.99，與準(zhǔn)確度的要求有關(guān)系。注意：與定量方法中標(biāo)準(zhǔn)曲線法的異同。21可編輯課件PPT④精密度（precision）：意義：同一樣品多次測量值之間相互接近的程度。內(nèi)容：重復(fù)性:同一實驗室,同一人多次測定的精密度中間精密度:同一實驗室，不同人，不同儀器測定的精密度

重現(xiàn)性:不同實驗室，不同人測定的精密度制劑分析時精密度RSD應(yīng)不小于2%。22可編輯課件PPT⑤檢測限和定量限（LODandLOQ）：意義：LOD是能檢測到的最低量，S:N=3:1。LOQ是能定量測定的最低量，S:N=10:1。內(nèi)容：生物樣品分析時定量下限即為標(biāo)準(zhǔn)曲線最低濃度點，定量上限即位標(biāo)準(zhǔn)曲線最高濃度點。23可編輯課件PPT⑥穩(wěn)定性（stability）：意義：考察分析樣品與試劑在一定時間內(nèi)穩(wěn)定性。內(nèi)容：根據(jù)樣品與試劑測定時實際可能所處的環(huán)境進行考察。

24可編輯課件PPT⑦耐用性（robustness）：意義：考察測定條件發(fā)生小變動時測定結(jié)果的變化。內(nèi)容：流動相的組成和pH、商品柱的品牌尺寸、柱溫等25可編輯課件PPT⑧系統(tǒng)適用性（systemsuita