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文檔簡介

第五節(jié)免疫標(biāo)記技術(shù)免疫標(biāo)記技術(shù)是將某一特定的易于檢測的分子或原子聯(lián)結(jié)在抗體或抗原上，從而檢測相應(yīng)抗體或抗原的存在及所在部位的一種技術(shù)，主要有熒光抗體、酶標(biāo)記抗體、放射免疫（同位素技術(shù)）、免疫電鏡及核酸探針等技術(shù)。

一、熒光抗體直接法和間接法兩種。1.定義：用熒光物標(biāo)記抗體來檢測細(xì)胞或組織中相應(yīng)抗原或抗體的技術(shù)，又稱熒光抗體技術(shù)。2.熒光物種類：異硫氰酸熒光素、羅丹明熒光素、二氯三嗪基氨基熒光素等3.種類：包括直接法和間接法

免疫熒光例：直接法：將待測標(biāo)本固定于玻片表面，滴加已知熒光抗體后再以緩沖液沖洗，干燥后于熒光顯微鏡下觀察。

(1)過程：

+待測抗原

熒光素+抗體

熒光抗體(一段時(shí)間后沖洗)熒光鏡檢測結(jié)果：

(2)結(jié)果：陽性

—可見帶熒光的抗原抗體復(fù)合物；

陰性

—無熒光(因?yàn)閹晒獾目贵w不能與抗原結(jié)合，被沖洗掉)

(3)用途：用以檢測病毒感染細(xì)胞、細(xì)菌和沉積于組織中的免疫復(fù)合物等。

(4)特點(diǎn)：簡單、特異性高；敏感性低、同時(shí)檢測多種抗原時(shí)較復(fù)雜。

二、酶標(biāo)記抗體（一）酶標(biāo)記抗體的原理：

通過化學(xué)方法將酶與抗體結(jié)合起來，標(biāo)記后的抗體仍具備與相應(yīng)抗原結(jié)合的免疫學(xué)活性以及酶的催化活性。酶標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物上的酶在遇到相應(yīng)底物時(shí)，能催化底物分解，并使底物中的供氫體呈現(xiàn)顏色反應(yīng)。標(biāo)記酶：辣根過氧化物酶（HRP）和堿性磷酸酶；它們與抗原或抗體結(jié)合后活性不受影響。底物：過氧化氫、鄰苯二胺、對硝基苯磷酸酯。特點(diǎn)：敏感性高、特異性強(qiáng)，既可定性又可定量。

（二）酶標(biāo)記抗體的分類

1、組化法

用于檢測組織細(xì)胞中抗原、抗體及其它成分。（1）直接法（2）間接法

2、測定法

用于抗原或抗體的定量測定。常用的是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法（ELISA)。（1）雙抗夾心法：用于測定抗原（2）間接法(動畫演示)：常用于測定抗體。將已知抗原吸附于固相載體上，加待檢標(biāo)本（可能含相應(yīng)抗體）與之結(jié)合（3）競爭法（動畫演示）：常用于

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