高效液相色譜法測定碳酸氫鈉注射液中依地酸二鈉的限量

摘

要：為控制碳酸氫鈉注射液中依地酸二鈉的限量，采用高效液相色譜法對依地酸二鈉的含量進行檢測，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以0.3%四丁基氫氧化銨（用甲酸調(diào)節(jié)pH值至4.0）-乙腈（70:30）為流動相，檢測波長為254nm。經(jīng)試驗證明，高效液相色譜法可作為碳酸氫鈉注射液中依地酸二鈉限量控制的方法，具有便捷、準確、重現(xiàn)性好等特點。關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；碳酸氫鈉注射液；依地酸二鈉；限量控制

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引言碳酸氫鈉注射液是調(diào)節(jié)水鹽、電解質(zhì)及酸堿平衡的藥物，多用于代謝性酸中毒治療。本品主要成分為碳酸氫鈉，輔料為依地酸二鈉、注射用水。依地酸二鈉是金屬離子絡合劑，在藥品生產(chǎn)中加入依地酸二鈉是為了控制金屬離子對藥品（特別是液體制劑）質(zhì)量的影響，即依地酸二鈉作為藥用輔料經(jīng)過審批是允許在藥品處方中存在的。隨著國家對藥品審評標準的提高，對藥品中輔料的控制也提出了更嚴格的要求。依地酸二鈉作為金屬離子絡合劑，在靜脈給藥輸液中的參考用量為0.01%～0.075%。靜脈制劑中過多使用依地酸二鈉會引起人體血鈣濃度下降，所以對其限度的控制已經(jīng)成為提高藥品質(zhì)量的一種手段以及質(zhì)量評價的一項指標。本文以碳酸氫鈉注射液（規(guī)格為250mL：12.5g）為樣品，在參考現(xiàn)有依地酸二鈉檢測方法的基礎(chǔ)上，建立了一種堿性注射液采用高效液相色譜法對依地酸二鈉含量進行測定的方法，從而控制依地酸二鈉限量。

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儀器與試藥1.1

儀器LC-10ATVP和LC-10ATVPpius高效液相色譜儀；C18色譜柱（250mm×4.6mm，5

μm）；AUW120D電子天平。1.2

試藥鹽酸、三氯化鐵、四丁基氫氧化銨（10%水溶液）、乙腈等均為分析純；依地酸二鈉對照品符合美國藥典標準；碳酸氫鈉原料，批號：150109；碳酸氫鈉注射液（規(guī)格為250mL：12.5g）批號分別為：2016050811、2016050812、2016050813、2016050911、2016050912、2016050913。

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方法與結(jié)果2.1

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以0.3%四丁基氫氧化銨（用甲酸調(diào)節(jié)pH值至4.0）-乙腈（70:30）為流動相，檢測波長為254nm。理論板數(shù)按依地酸二鈉峰計算不低于2000。2.2

測定法取樣品溶液5mL置于10mL量瓶中，加入1mol/L鹽酸1.8mL，超聲5～10min，加入0.2%三氯化鐵溶液2.5mL，加水定容至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液；另取依地酸二鈉對照品10mg，精密稱定，置于100mL量瓶中，加入5%碳酸氫鈉溶液溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL，置于10mL量瓶中，加入1mol/L鹽酸1.8mL，超聲5～10min，加入0.2%三氯化鐵溶液2.5mL，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為對照品溶液；精密量取上述對照品溶液和供試品溶液各10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標法規(guī)定，以峰面積計算，依地酸二鈉含量不得超過0.11mg/mL。2.3

方法學驗證2.3.1

專屬性檢測對照品溶液：取依地酸二鈉對照品，用5%碳酸氫鈉溶液溶解。空白溶液：取5%碳酸氫鈉溶液，不加入依地酸二鈉。衍生試劑：取0.2%三氯化鐵溶液2.5mL，加水至10mL。樣品溶液：取碳酸氫鈉注射液。取以上各溶液按2.2實驗方法檢測，分別取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。圖1為碳酸氫鈉空白圖譜，圖2為對照品圖譜，圖3為樣品圖譜。結(jié)果顯示：空白溶液加衍生試劑沒有明顯色譜峰，對主峰無干擾；對照品溶液和樣品溶液有明顯單一的色譜峰，且理論板數(shù)為17802。由此可見，用此方法檢測依地酸二鈉專屬性較好。2.3.2

線性關(guān)系精密稱取依地酸二鈉2mg、5mg、8mg、10mg、12mg、15mg各1份，置于100mL量瓶中，加入5%碳酸氫鈉溶液溶解，并稀釋至刻度，作為系列標準溶液。按2.2實驗方法檢測，以濃度與峰面積做標準曲線。表1為線性關(guān)系的考察數(shù)據(jù)，圖4為線性關(guān)系。結(jié)果表明：依地酸二鈉在10～75μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，線性方程為y=180625x+7402.7（r2=0.9991）。2.3.3

精密度取樣品（批號：2016050811）按2.2實驗方法進行檢測，重復進樣6次，精密度檢測結(jié)果如表2所示。結(jié)果表明：采用同一批號的樣品重復進樣6次，相對標準偏差RSD=0.08%，說明使用本方法檢測依地酸二鈉精密度較好。2.3.4

回收率取依地酸二鈉8mg、10mg、12mg各3份，精密稱定，置于100mL量瓶中，加入5%碳酸氫鈉溶液溶解，并稀釋至刻度，分別制成含依地酸二鈉80%、100%、120%的供試品溶液。按2.2實驗方法進行檢測，結(jié)果用回收率表示，如表3所示。結(jié)果表明：使用本法測定依地酸二鈉的回收率良好。2.3.5

定量限精密稱取依地酸二鈉10mg，加入5%碳酸氫鈉溶液，溶解并稀釋成100mL，再從中取5mL，置于10mL量瓶中，加入1mol/L鹽酸1.8mL，超聲5～10min，加入0.2%三氯化鐵溶液2.5mL，加水定容至刻度，搖勻，濾過，作為對照品溶液。在此濃度下稀釋10倍、100倍、200倍。按2.2實驗方法進行檢測，進樣，記錄色譜圖。結(jié)果：經(jīng)檢測，當濃度為50μg/mL的依地酸二鈉稀釋至100倍時，依地酸二鈉峰高約為基線噪聲的16倍，其檢驗量約為0.5μg/mL；當稀釋至200倍時，依地酸二鈉峰高約為基線噪聲的10倍，其檢驗量約為0.25μg/mL。所以，該檢測方法的定量限為0.25μg/mL。2.3.6

耐用性檢測取樣品（批號：2016050811、2016050812、2016050813、2016050911），在同一臺高效液相色譜儀上，使用不同的色譜柱（按標準要求為C18柱，十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑），分別按2.2實驗方法進行檢測，耐用性檢測結(jié)果如表4所示。取樣品（批號：2016050811、2016050812、2016050813、2016050911），用同一根C18色譜柱（柱子編號為H15-111041），不同型號的高效液相色譜儀，按2.2實驗方法進行檢測，耐用性檢測結(jié)果如表5所示。果表明：使用不同色譜柱和不同高效液相色譜儀對樣品進行檢測，結(jié)果比較接近。由此可見，使用該方法檢測碳酸氫鈉注射液中依地酸二鈉的耐用性良好。2.4

樣品檢測取樣品（批號：2016050811、2016050812、2016050813、2016050911、2016050912、2016050913），按2.2實驗方法進行檢測，結(jié)果如表6所示。按規(guī)定，碳酸氫鈉注射液中依地酸二鈉含量不得超過0.11mg/mL。根據(jù)表6結(jié)果顯示，樣品檢測全部合格，符合標準限量規(guī)定。

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結(jié)語本次實驗研究表明，高效液相色譜法測定碳酸氫鈉注射液中依地酸二鈉限量的方法學驗證符合2015版《中國藥典》要求，具有便捷、準確、重現(xiàn)性好等特點，可作為碳酸氫鈉注射液中依地酸二鈉限量控制的方法，適用于碳酸氫鈉注射液的生產(chǎn)和質(zhì)量控制。需要注意的是，本實驗中用到的流動相0.3%四丁基氫氧化銨溶液是使用四丁基氫氧化銨（10%水溶液）配制的，對比了兩個生產(chǎn)試劑廠商的兩種包裝形式。一家是上海展云化工有限公司，包裝形式為塑料瓶；另一家是成都市科龍化工試劑廠，包裝形式為玻璃瓶。不同包裝形式的