蜂膠軟膠囊中總黃酮測定方法

蜂膠是由蜜蜂，特別是工蜂，從植物的樹膠、樹脂中采集，并與上顎腺、蠟腺等分泌物混合形成的具有黏性的固體膠狀物?，F(xiàn)代研究結(jié)果表明，蜂膠含有維生素、酚類、蓓烯類、黃酮類化合物等多種營養(yǎng)保健成分。在蜂膠的眾多活性物質(zhì)中，黃酮類物質(zhì)是最為關(guān)鍵的成分之一，它具有抗菌、殺毒、消炎止痛、降血脂、促進(jìn)機(jī)體組織再生和增強(qiáng)機(jī)體免疫能力等功效。近年來，蜂膠產(chǎn)品在市場上受到了廣泛的關(guān)注和認(rèn)可，其種類也日益豐富，主要以膠囊形式呈現(xiàn)。蜂膠中主要活性成分為黃酮類化合物，已成為研究熱點(diǎn)，且市售的蜂膠膠囊類產(chǎn)品均以總黃酮含量作為評價(jià)指標(biāo)。黃酮類化合物的測定有多種方法，如液相色譜法﹑分光光度法等，液相色譜法可以測定單一的黃酮成分，分光光度比色法可以測定黃酮成分的總量。紫外分光光度法被廣泛應(yīng)用于測定蜂膠制品中的總黃酮含量，因?yàn)樗哂胁僮骱啽?、?zhǔn)確度高且易于實(shí)施的特點(diǎn)，因此深受廣大研究者的青睞。實(shí)驗(yàn)方法：根據(jù)《蜂膠中總黃酮含量的測定方法分光光度比色法》（GB/T20574—2006利用分光光度比色法對蜂膠軟膠囊中的總黃酮進(jìn)行定量分析。試劑蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（含量95.5%，上海安譜璀世標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司，批號2251131無水乙醇、硝酸鋁、95%乙醇、醋酸鉀（分析純，南京化學(xué)試劑有限公司）儀器UV-1800紫外可見分光光度計(jì)（上海美析儀器有限公司超聲波清洗儀；高速臺式離心機(jī)；BT25S十萬分之一電子天平、BSA224S-CW電子天平。試樣的制備稱取蜂膠軟膠囊內(nèi)容物0.5g（精確至1mg）于燒杯中，加入95%乙醇約30mL，室溫下超聲提取20min，將溶液轉(zhuǎn)移至50mL的容量瓶中，加入95%乙醇至刻度線，混合均勻后進(jìn)行過濾，棄去初濾液，收集濾液待測。準(zhǔn)確吸取1.0mL待測溶液于50mL容量瓶中，分別加入1.0mL硝酸鋁溶液和1.0mL醋酸鉀溶液，加95%乙醇至刻度，搖勻，靜置10min，3000r·min-1離心3min，取上清液待測?？瞻讓?shí)驗(yàn)精密吸取1.0mL待測溶液于50mL容量瓶中，加95%乙醇至刻度，搖勻。用1cm比色皿，在415nm以空白試液作參比，測定樣品吸光度。標(biāo)準(zhǔn)溶液制備稱取10.50mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（含量95.5%）于50mL容量瓶中，用無水乙醇溶解，并定容至刻度，搖勻，溶液濃度為0.2g·L-1。吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL和6.00mL（相當(dāng)于蘆丁含量0mg、0.2mg、0.4mg、0.6mg、0.8mg、1.0mg和1.2mg分別置于50mL容量瓶中，向容量瓶中加入1.0mL硝酸鋁溶液和1.0mL醋酸鉀溶液，用95%乙醇定容至刻度，搖勻，靜置10min后測定。結(jié)果計(jì)算總黃酮計(jì)算公式為式中