(高清版)GBT 41683-2022 化妝品中禁用物質秋水仙堿及其衍生物秋水仙胺的測定 液相色譜-串聯(lián)質譜法

化妝品中禁用物質秋水仙堿及其衍生物秋水仙胺的測定液相色譜-串聯(lián)質譜法2022-10-12發(fā)布I本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由中國輕工業(yè)聯(lián)合會提出。本文件由全國香料香精化妝品標準化技術委員會(SAC/TC257)歸口。本文件起草單位：深圳海關食品檢驗檢疫技術中心、深圳市檢驗檢疫科學研究院。本文件主要起草人：康海寧、沈金燦、趙鳳娟、林偉堅、徐婷婷、華紅慧、羅耀、陳沛金、謝志榕、Ⅱ本文件的被測物質是我國《化妝品安全技術規(guī)范(2015年版)》規(guī)定的禁用原料。禁用原料是指不得作為化妝品原料使用的物質。《化妝品安全技術規(guī)范(2015年版)》規(guī)定：若技術上無法避免禁用物質作為雜質帶入化妝品時，國家有限量規(guī)定的應符合其規(guī)定；未規(guī)定限量的，應進行安全性風險評估，確保在正常、合理及可預見的使用條件下不得對人體健康產(chǎn)生危害。目前我國尚未規(guī)定這些物質的限量值，本文件的制定，僅對化妝品中測定這些物質提供檢測方法。1化妝品中禁用物質秋水仙堿及其衍生物秋水仙胺的測定液相色譜-串聯(lián)質譜法警示——使用本文件的人員應有正規(guī)實驗室工作的實踐經(jīng)驗。本文件并未指出所有可能的安全問題。使用者有責任采取適當?shù)陌踩徒】荡胧⒈ＷC符合國家有關規(guī)定的條件。本文件描述了化妝品中禁用物質秋水仙堿及其衍生物秋水仙胺的液相色譜-串聯(lián)質譜測定方法的本文件適用于水基、乳液、膏霜、凝膠、蠟基、粉基類等化妝品中秋水仙堿及其衍生物秋水仙胺的測定。本文件的方法檢出限和定量限：秋水仙堿和秋水仙胺的檢出限均為5.0μg/kg,定量限均為2規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。4試驗方法樣品經(jīng)提取液超聲提取、離心后，用液相色譜-串聯(lián)質譜法測定和定性，外標法定量。4.2試劑和材料24.2.9甲醇乙腈溶液：移取500mL甲醇(4.2.2)至1000mL容量瓶中，用乙腈(4.2.3)定容至刻度，混勻備用。4.2.10正己烷飽和甲醇乙腈溶液：用量筒分別量取100mL正己烷(4.2.5)和400mL甲醇乙腈溶液(4.2.9)置于試劑瓶中振搖，靜置分層，除去上層正己烷，下層即為正己烷飽和甲醇乙腈溶液。4.2.115mmol/L乙酸銨溶液(含0.1%甲酸):準確稱取0.3854g乙酸銨(4.2.6),加入800mL水溶解，加入1mL甲酸(4.2.8),轉移至1000mL容量瓶中，用水定容至刻度。表A.1,純度不小于95%。4.2.13標準儲備液：準確稱取適量各標準物質(4.2.12)分別置于50mL容量瓶中，用無水乙醇(4.2.4)溶解并定容至刻度，分別配制成質量濃度為100mg/L的標準儲備液，于一18℃下保存，有效期6個月。4.3儀器設備4.3.1液相色譜-串聯(lián)質譜儀(LC-MS/MS):配有電噴霧離子源(ESI)。4.3.2離心機：轉速不低于9500r/min。4.3.3電子天平：精度為0.0001g和0.001g。4.3.4渦旋混合器。4.3.5超聲波清洗器。4.3.6有機系微孔濾膜：0.22μm。4.4試驗步驟4.4.1樣品溶液制備稱取1g(精確至0.001g)樣品于10mL容量瓶中，用正己烷飽和甲醇乙腈溶液(4.2.10)定容至刻度，渦旋混勻，超聲提取15min;轉移至15mL具塞離心管中，以9500r/min離心5min,取上清液5.0mL于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，混勻；取5.0mL至15mL離心管中，加入5.0mL正己烷(4.2.5),渦旋，以9500r/min離心5min,棄去上層正己烷后，移取1.0mL下層清液，過微孔濾膜稱取1g(精確至0.001g)樣品于10mL容量瓶中，加入0.2g乙酸銨(4.2.7),用正己烷飽和甲醇乙腈溶液(4.2.10)定容至刻度，渦旋混勻，超聲提取15min;轉移至15mL具塞離心管中，以9500r/min離心5min,取上清液5.0mL于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，混勻；取5.0mL至15mL離心管中，加入5.0mL正己烷(4.2.5),渦旋，以9500r/min離心5min,棄去上層正己烷后，移取1.0mL下層稱取1g(精確至0.001g)樣品于50mL具塞離心管中，準確加入5mL正己烷(4.2.5),渦旋均勻后準確加入10mL正己烷飽和甲醇乙腈溶液(4.2.10),渦旋混勻，超聲提取15min;以9500r/min離心5min,取下層清液5.0mL于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，混勻；轉移至15mL具塞離心管中，以39500r/min離心5min,移取1.0mL清液，過微孔濾膜(4.3.6),上機測定。平行做兩份試驗。液相色譜參考條件如下：b)流動相：A:5mmol/L乙酸銨溶液(含0.1%甲酸)(4.2.11),B:甲醇(4.2.2);f)梯度洗脫條件見表1。表1液相色譜流動相及參考分離條件時間/minA/%B/%065串聯(lián)質譜參考條件如下：b)數(shù)據(jù)采集：多反應監(jiān)測(MRM),質譜參數(shù)見表2;4GB/T41683—2022表2化合物的母離子及定量定性離子、碰撞電壓和射頻電壓化合物名稱母離子m/z子離子m/z碰撞電壓V射頻電壓V秋水仙胺372.21310.04"341.11秋水仙堿400.21358.11?310.04“定量離子。4.4.4標準曲線的繪制混合標準溶液的配制：分別準確移取1mL標準儲備液(4.2.13)至100mL的容量瓶中，用甲醇溶液(4.2.2)定容至刻度，配制成質量濃度為1mg/L的混合標準溶液，于一18℃下保存，有效期1個月。取相近的空白樣品，按照4.4.1步驟進行處理，用得到的空白樣品提取液將混合標準溶液逐級稀釋得到質量濃度為0.500pg/L、1.00pg/L、3.00pg/L、5.00μg/L、10.0μg/L的秋水仙堿、秋水仙胺系列混合標準工作溶液，質量濃度由低到高進行檢測，以定量離子峰面積對質量濃度作圖，繪制標準工作曲線。秋水仙堿及其衍生物秋水仙胺標準物質選擇離子質量色譜圖見附錄B中圖B.1和圖B.2。4.4.5試樣測定按照液相色譜和串聯(lián)質譜參考條件(4.4.2和4.4.3)測定試樣溶液(4.4.1)。如果試樣中待測物質的色譜峰保留時間與標準溶液的一致(變化范圍在±2.5%),在扣除背景后的試樣質譜圖中所選擇的離子均出現(xiàn)，而且選擇離子的相對豐度與標準物質的進行比較，最大允許偏差不超過表3規(guī)定的范圍，可判定為試樣中含有對應的待測物。記錄目標化合物定量離子色譜峰的峰面積，以外標法定量。試樣溶液中被測物的響應值均應在標準曲線的線性范圍之內，超過線性范圍則應稀釋后再進樣測定。表3定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差K≤104.5空白試驗除不稱取樣品外，均按4.4.1～4.4.5步驟進行測定。5試驗數(shù)據(jù)處理樣品中待測組分含量按式(1)計算。 (1)式中：X;——樣品中待測組分含量，單位為微克每千克(μg/kg);5c;——由標準曲線得出的樣品溶液中待測組分的質量濃度，單位為微克每升(μg/L)V——定容體積，單位為毫升(mL);f——前處理過程中的稀釋倍數(shù)，取值為2;1000——單位換算系數(shù)；m——樣品質量，單位為克(g);k——超出線性范圍時的稀釋倍數(shù)。計算結果保留三位有效數(shù)字。在添加濃度10.0μg/kg～100μg/kg的范圍內，回收率在71.6%～106%之間。7精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不應超過算術平均值的10%。6(資料性)秋水仙堿及其衍生物秋水仙胺標準物質的信息秋水仙堿及其衍生物秋水仙胺的英文名稱、CAS號、分子式、結構式及相對分子質量見表A.1。表A.1秋水仙堿及其衍生物秋水仙胺標準物質的信息序號中文名稱英文名稱CAS號分子式結構式相對分子質量1秋水仙堿ColchicineC??H??NO?2秋水仙胺Demecolcine477-30-5C??H