食品中獸藥殘留分析

食品中獸藥殘留檢驗

學習文檔（一）獸藥和獸藥殘留的概念典型的獸藥：是指用于預防和治療畜禽疾病的藥物。一些具有某些功效的動物保健品或飼料添加劑，也屬于獸藥的范疇。

一、概述學習文檔獸藥大致可歸納為四類：防病治病、促進生長、提高生產(chǎn)性能、改善動物性食品的品質等。其中除防治傳染病的生化免疫制品(菌苗、疫苗、血清、抗毒素和類毒素等)，以及畜禽特殊寄生蟲病藥和促生長藥等專用獸藥外，其余均與人用相同，只是劑量、劑型和規(guī)格有所區(qū)別。早就廣泛用于防治畜禽疾病。學習文檔獸藥殘留：是指食品動物用藥后，動物性食品中含有的某種獸藥的原形或其代謝物以及與獸藥相關的雜質的殘留。獸藥殘留的來源：治病用藥飼料中加入的添加劑動物性食品保鮮休藥期(是指自停止給藥到動物獲準屠宰或其動物性產(chǎn)品獲準上市的間隔時間)過短，是造成動物性食品獸藥殘留過量的另一個重要原因。學習文檔(二)常見獸藥殘留的種類1.抗生素類藥物這類藥物多為天然發(fā)酵產(chǎn)物，是臨床應用最多的一類抗菌藥物，如青霉素類、氨基糖苷類、大環(huán)內酯類、四環(huán)素類、螺旋霉素、鏈霉素、土霉素、金霉素等。青霉素類引起過敏反應，輕度時，短時間內出現(xiàn)血壓下降、皮疹、身體發(fā)熱、血管神經(jīng)性水腫、血清病樣反應等，嚴重者可能導致過敏性休克甚至死亡。長期攝入含氨基糖苷類殘留超標的動物性食品，可損害聽力及腎臟功能。學習文檔2.磺胺類藥物

主要用于抗菌消炎，如磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺瞇、菌得清、新諾明等。后果：長期攝入含磺胺類藥物殘留的動物性食品后，藥物可不斷在體內蓄積，造成泌尿系統(tǒng)損傷，引起結晶尿、血尿、管型尿。學習文檔

3.硝基呋喃類藥物

主要用于抗菌消炎，如呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等。

危害：主要是胃腸反應和過敏反應。

學習文檔4.抗寄生蟲類藥物

主要用于驅蟲或殺蟲，如苯并咪唑、左旋咪唑、克球酚、吡喹酮等。

危害：致畸和致突變學習文檔5.激素類藥物主要用于提高動物的繁殖和加快生長發(fā)育速度，使用于動物的激素有性激素和皮質激素，而以性激素最常用，如孕酮、睪酮、雌二醇等。超標的話，可能會影響消費者的正常生理機能，并具有一定的致癌性，可能導致兒童早熟、兒童發(fā)育異常、兒童異性趨向等。學習文檔（三）獸藥殘留的危害毒性作用急性中毒、慢性中毒、“三致”（致癌、致畸、致突變）耐藥性動物體內耐藥性菌株通過食品傳遞給人，給治療帶來困難。過敏反應激素作用潛在致癌、兒童性早熟等污染環(huán)境影響生態(tài)獸藥排入環(huán)境后，仍然有活性，對土壤微生物、水生生物等造成影響。學習文檔（四）獸藥殘留限量標準和檢驗獸藥最高殘留限量(MRLVD)：是指某種獸藥在食物中或食物表面產(chǎn)生的最高允許獸藥殘留量(單位μg／kg，以鮮重計)。獸藥最高殘留限量標準

2002年農(nóng)業(yè)部頒布最新《動物性食品中最高殘留限量》

不需要制定最高殘留限量的藥物：88種需要制定最高殘留限量的藥物：94種可以使用，但不得在食品中檢出的藥物：9種禁止使用，且不得在食品中檢出的藥物有：31種學習文檔

二、獸藥殘留的檢驗

（一）檢驗方法簡介

（二）常見獸藥殘留的檢驗（三）檢驗方法開發(fā)舉例學習文檔（一）檢驗方法簡介常用方法氣相色譜法（GC):常規(guī)分析法高效液相色譜法（HPLC)：常規(guī)分析法，最多采用酶聯(lián)免疫法（ELISA)：選擇性強、靈敏度高、簡單、快速儀器聯(lián)用法（GC-MS,LC-MS,TLC-MS等)未來趨勢實現(xiàn)高通量多殘留同時定性定量分析GC-MS-MS,LC-MS-MS學習文檔

殘留分析的樣品可食性組織及產(chǎn)品肝、腎、肌肉、脂肪、皮膚、血液奶、蛋其他加工食品其他毛發(fā)、尿、糞便等學習文檔取樣方法代表性原則、隨機采樣各種標準規(guī)定活體檢測一般采集毛發(fā)、血液、尿液和糞便屠宰場取樣其他高濃度的樣本：肝、腎、膽汁、注射部位排泄物：尿液樣本的收集學習文檔樣本的貯存容器材料一般為玻璃或塑料硅烷化處理防止器皿壁對痕量殘留組分的吸附塑料吸附脂溶性物質玻璃表面吸附堿性物質硅烷化處理是以有機硅烷水溶液為主要成分對金屬或非金屬材料進行表面處理的過程。

學習文檔預處理

均一、粉碎或研磨、提取、凈化、濃縮等

新的方法、手段：1.粉碎/研磨OmniPrep多樣品均質儀質檢藥檢農(nóng)檢食檢系統(tǒng)樣品預處理經(jīng)典產(chǎn)品_標清.flv2.固相微萃??；樣品制備-固相萃取流程_標清.flv

德國Gerstel樣品前處理平臺-德祥科技有限公司獨家代理_標清.flv3.凝膠凈化GPC凝膠色譜法.flvECOGPC樣品凈化系統(tǒng)_標清.flv學習文檔（二）常見獸藥殘留的檢測

1.磺胺類獸藥殘留的檢測

2.四環(huán)素類獸藥殘留的檢測

3.硝基呋喃類獸藥殘留的檢測

4.鹽酸克倫特羅殘留的檢測

5.激素類獸藥的檢測

學習文檔磺胺類藥物磺胺類藥物的基本結構為對氨苯磺酰胺，簡稱磺胺的衍生物,具有芳氨基和磺酰胺基，多為兩性化合物。常用的有：磺胺嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶等。

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（二）測定方法測定方法高效液相色譜法（HPLC法）：最常用氣相色譜法（GC)TLC（薄層色譜法）ELISA（酶聯(lián)免疫法）分光光度法學習文檔

HPLC法測定磺胺類藥物殘留1、原理

動物性食品樣品經(jīng)過預處理后，用流動相溶解，所得樣液用HPLC-紫外檢測器檢測。與標準比較，用保留時間定性、標準曲線法定量。

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2、樣品的預處理

提取凈化濃縮提?。夯前奉愃幬锊灰兹苡诜菢O性溶劑，而在極性較大的溶劑中溶解性較好，一般常用乙腈等提取；凈化：在乙腈提取的上清液中，加入適量正己烷振蕩除去樣品中的脂溶性雜質，離心，棄去正己烷；下層液體加入正丙醇適量，于50℃下減壓干燥，加一定量95%乙腈溶解殘留物，并過過氧化鋁B小柱凈化；用95%乙腈洗脫雜質，再用適量70%乙腈洗脫，收集洗脫液；濃縮：在洗脫液中加入適量正丙醇，50℃下減壓干燥，然后再準確加入一定量的流動相溶解，得到樣品處理液。學習文檔3、色譜條件色譜柱：ODS-C18(4.6mm×250mm)柱；檢測器：紫外檢測器；波長：270nm；進樣量：20μL；柱溫：35℃；流動相：乙腈+甲醇+水+乙酸=2:2:9:0.2；流速：1.0ml/min學習文檔4、標準曲線的繪制

準確稱取各磺胺類獸藥對照品于容量瓶中，以甲醇定容作為標準儲備液；

取各標準貯備液，以甲醇稀釋至質量濃度為0-2.0mg/L

的標準系列；

各取20μL進樣分析；

根據(jù)峰面積與相應的質量濃度進行線性回歸；

繪制標準曲線。學習文檔5、樣品的測定

將處理好的待測樣品，在3所述的色譜條件下，用HPLC-紫外檢測器檢測，與標準比較，用保留時間定性、標準曲線法定量。學習文檔

四環(huán)素類藥物殘留的檢驗常用四環(huán)素類藥物有：四環(huán)素、土霉素、金霉素測定方法

GB/T5009.116-2003(HPLC法)

畜、禽肉中土霉素、四環(huán)素、金霉素殘留量的測定

HPLC（高效液相色譜法）TLC（薄層色譜法）ELISA（酶聯(lián)免疫法）學習文檔四環(huán)素類藥物殘留的檢驗(HPLC）(一)原理

樣品經(jīng)提取，微孔濾膜過濾后直接進樣，用反相色譜分離，紫外檢測器檢測，以保留時間定性，標準曲線法定量，也可以用標準加入法定量。配置四環(huán)素類藥物的混合標準溶液，繪制標準曲線，根據(jù)標準曲線計算樣品中各殘留藥物的含量。學習文檔

標準曲線法定量：配置四環(huán)素類藥物的混合標準溶液，繪制標準曲線，根據(jù)標準曲線計算樣品中各殘留藥物的含量。標準加入法定量：在待測食品的樣品中，加入配置好的四環(huán)素類藥物的混合標準溶液后，經(jīng)過提取、離心等前處理后，繪制工作曲線，根據(jù)工作曲線計算樣品中各殘留藥物的含量。

國標采用：標準加入法定量（準確度高）

學習文檔（二）樣品處理

取5.00g切碎的肉樣食品，置于50ml的錐形瓶中，加入25ml的5%高氯酸振蕩提取10min，提取液經(jīng)離心后，取上清液經(jīng)0.45μm濾膜過濾.（三）分析步驟（1）色譜條件

色譜柱：ODS-C18

柱(6.2mm×15cm,5μm)

；檢測器：紫外檢測器；波長：355nm；流動相：乙腈+0.01mol/LNaH2PO44（pH2.5）=35:65柱溫：室溫；流速：1.0ml/min學習文檔（2）混合標準溶液的配置①土霉素(OTC)標準溶液：稱取土霉素0.0100g（精確到±0.0001g），用0.1mol/L的鹽酸溶液溶解，并定容到10mL；②四環(huán)素（TC)標準溶液：稱取四環(huán)素0.0100g（精確到±0.001g），用0.01mol/L的鹽酸溶液溶解，并定容到10mL；③金霉素（CTC)標準溶液：稱取金霉素0.0100g（精確到±0.001g），溶于蒸餾水中并定容到10mL。

混合標準溶液：?、佗跇藴嗜芤焊?.00ml，③標準溶液2.00ml,置于10ml容量瓶中，加蒸餾水至刻度。此溶液每毫升含土霉素、四環(huán)素各0.1mg，金霉素0.2mg，臨用時現(xiàn)配。學習文檔（3）工作曲線取7份切碎的肉樣食品，每份5.00g，分別加入混合標準溶液25,50,100,150,200,250μg（含土霉素、四環(huán)素各為2.5,5.0,10.0,15.0,20.0,25.0μg)；含金霉素

0,5.0,10.0,20.0,30.0,40.0,50.0μg)，按（二）樣品處理的方法操作，峰高為縱坐標，以抗生素含量為橫坐標，繪制工作曲線。(4）試樣測定

取經(jīng)0.45μm濾膜過濾的待測液10μL進樣，記錄峰高，從工作曲線上查含量。學習文檔(四)結果計算式中：X－試樣中抗生素含量，單位為mg/kgA－試樣溶液測得抗生素質量，單位為μgm－試樣質量，單位為g學習文檔（五）方法說明（1）流動相中加NaH2PO4及調節(jié)pH值目的：改善四環(huán)素類藥物在C18柱上的分離度和峰形；（2）用5%高氯酸處理樣品時，當PH值低于蛋白質等電點時，蛋白質以陽離子形式存在，高氯酸可與蛋白質陽離子形成不溶性鹽而沉淀，通過離心除去；（3）本方法測定四環(huán)素類藥物的加標回收率分別為：OTC：82%-93%，TC:80%-90%,CTC:80%-95%;(4）出峰順序為土霉素（OTC)、四環(huán)素（TC)、金霉素（CTC)學習文檔

二、磺胺類藥物殘留的測定

（一）概述

（二）測定方法學習文檔硝基呋喃類獸藥殘留的測定

（一）概述

（二）測定方法學習文檔一、概述硝基呋喃類藥物包括：呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等。國際法典委員會、中國和歐美等大多數(shù)國家禁止使用此類藥物，在動物性食品和飼料中不得檢出：硝基呋喃類藥物和代謝物能使實驗動物發(fā)生癌變和基因突變。學習文檔測定方法高效液相色譜法（HPLC法）：最常用ELISA（酶聯(lián)免疫法）：快速篩選檢驗LC-MS法（液質連用）學習文檔一、原理

動物性食品樣品經(jīng)過預處理后，用流動相溶解，過氧化鋁小柱后供HPLC檢測。與標準比較，用保留時間定性、標準曲線法定量。HPLC法測定畜禽肉中呋喃唑酮殘留學習文檔①稱取適量畜禽肉樣品，按1：1.5的比例加入C18，混勻后裝入玻璃層析柱中；②用正己烷淋洗，去除脂肪；③再用乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液，在55~60℃下減壓干燥濃縮至干；④加少量流動相溶解殘渣，過氧化鋁小柱凈化，洗脫液供HPLC測定。二、樣品的預處理學習文檔（1）色譜條件

色譜柱：ODS-C18柱(250mm×4.6cm,5μm)；檢測器：紫外檢測器；波長：367nm；流動相：乙腈+0.015mol/LH3PO4=2:8流速：0.7~1.0ml/min（2）樣品測定用流動相稀釋標準系列，經(jīng)氧化鋁小柱凈化，分別測定標準和樣品凈化液，繪制標準曲線，根據(jù)標準曲線定量。三、樣品的測定學習文檔四、方法說明①本法適用于雞的肌肉、肝、腎組織和魚肉組織中呋喃唑酮殘留檢測；②呋喃唑酮的檢出限和回收率：雞的肌肉組織10μg/kg；加標回收率為80%~110%，魚肉組織25μg/kg，70%~120%。③C18的去垢效應和巨大的表面積，濃縮了傳統(tǒng)的樣品前處理中所需的樣品勻化、組織細胞裂解、提取、凈化等過程，避免了樣品在上述處理中待測物的損失。學習文檔

鹽酸克倫特羅殘留的檢驗

（一）概述

（二）測定方法學習文檔（一）概述鹽酸克倫特羅，俗稱“瘦肉精”。它曾經(jīng)作為藥物用于治療支氣管哮喘，在飼料中添加可以促進動物生長、提高瘦肉率，后由于其副作用太大而遭禁用。分子式：C12H18Cl2N2O-HCl，白色或類白色的結晶粉末，無臭、味苦，熔點161℃，溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。化學性質穩(wěn)定，一般方法不能將其破壞，含有瘦肉精的肉制品在加工過程中經(jīng)100℃沸水煮、燒烤和微波處理等過程，其殘留并不減少。

學習文檔瘦肉精的發(fā)現(xiàn)和應用

發(fā)現(xiàn)：上世紀80年代初，美國脂胺公司的研究人員意外地發(fā)現(xiàn)，將一定量的鹽酸克倫特羅添加在飼料中，能夠改變營養(yǎng)物質的代謝途徑，促進動物肌肉特別是骨胳肌蛋白質的合成，同時對脂肪合成有一定的抑制作用，從而可以促進動物生長，增加瘦肉率，并根據(jù)一定試驗得出，如果在飼料中添加適量的鹽酸克倫特羅，可以提高飼料轉化率、生長速率、胴體瘦肉率10％以上。學習文檔應用：所以，當時認為這是一種不可多得的飼料藥物添加劑，并在世界各地進行推廣應用;我國也于80年代后期，在一些大專院校、科研院所進行了研發(fā)試驗和推廣試驗，經(jīng)過證明其作用效果十分明顯，并把鹽酸克倫特羅簡稱瘦肉精。雖然這種飼料添加劑一直沒有得到國家主管部門的認可，但是在利益的驅使下，我國許多地區(qū)的飼料加工企業(yè)和養(yǎng)殖戶都開始推廣應用。學習文檔作用：

能使豬提高生長速度，增加瘦肉率，豬毛色紅潤光亮，收腹，賣相好；屠宰后，肉色鮮紅，脂肪層極薄，往往是皮貼著瘦肉，瘦肉豐滿。肥豬飼喂瘦肉精后，逐漸發(fā)生四肢震顫無力，心肌肥大心力衰竭等毒副作用。學習文檔中毒的臨床表現(xiàn)急性中毒有心悸，面頸、四肢肌肉顫動，手抖甚至不能站立，頭暈，乏力，原有心律失常的患者更容易發(fā)生反應，心動過速，室性早搏；含“瘦肉精”的食品對心臟病、高血壓患者、老年人的危害更大。學習文檔測定方法GC-MS法（氣質連用）（國標第一法）高效液相色譜法（HPLC法）：第二法（自學）ELISA（酶聯(lián)免疫法）：第三法檢測方法

GB/T5009.192-2003

動物性食品中克倫特羅殘留量的測定學習文檔（第一法）GC-MS法

一、原理

將肉類樣品剪碎，經(jīng)過提取、凈化處理后，經(jīng)N,O-雙三甲基硅烷三氟乙酰胺（BSTFA)衍生后用GC-MS測定。以美托洛爾為內標物，用內標法定量。

學習文檔二、樣品處理（1）提?。?/p>

準確稱取適量肉樣，加一定量0.1mol/L高氯酸勻漿，超聲波提取后置于80℃水浴中加熱，冷卻后離心。取上清液，沉淀用0.1mol/L高氯酸溶液洗滌，再離心，合并上層清液，調節(jié)PH=9.5±0.1，若有沉淀，再離心。在上清液中加入NaCl，混勻，加入異丙醇-乙酸乙酯（40+60），振蕩提取。取上層有機相，下層水相用異丙醇-乙酸乙酯（40+60）再提取一次，合并有機相，于60℃水浴中旋轉蒸發(fā)至近干。用少量0.1mol/LNaH2PO4緩沖液（PH6.0)溶解殘留物，經(jīng)微孔過濾膜過濾，并用緩沖液定容。學習文檔（2）凈化：

用乙醇、水、NaH2PO4緩沖液（PH6.0)、水依次淋洗弱陽離子交換柱，然后取適量提取液過陽離子交換柱，再分別用水、乙醇淋洗去除雜質。最后用乙醇+濃氨水（98+2）洗脫，收集洗脫液，吹氮氣濃縮至干。（3）衍生化

于凈化后的試樣殘渣中加入甲醇和內標，濃縮至干，迅速加入衍生劑（BSTFA),密閉，混勻，于75℃下衍生化。蒸干后加入適量甲苯，混勻待用。克倫特羅標準系列同時衍生化。學習文檔三、測定測定條件GC條件：色譜柱：DB-5（30m*0.25mm，0.25μm)載氣：氦氣，柱前壓：8psi進樣口溫度：240℃，進樣量：1μlMS條件：EI源電子轟擊能：70eV,接口溫度：285℃，溶劑延遲：12min。學習文檔測定方法美托洛爾內標標準溶液：準確稱取美托洛爾標準品，用甲醇溶解配制成2.4mg/L的內標使用液；克侖特羅標準溶液：準確稱取克侖特羅標準品，用甲醇溶解配制成0.5mg/L的標準使用液。

取適量樣品衍生物或標準系列衍生液注入GC-MS儀中，以試樣峰與內標物峰的相對保留時間定性。以試樣峰與內標峰的峰面積比值單點或多點標準定量。學習文檔四、方法說明肉樣應先絞成肉糜，然后取樣檢驗；本方法的檢出限為0.5μg/kg,線性范圍為0.025ng-2.5ng，回收率為92-98.7％；本法采用高氯酸勻漿、超聲波萃取、離心和液-液萃取等樣品處理方法，效果較好；液-液萃取中加入氯化鈉起防止乳化的作用；衍生化前經(jīng)凈化處理可防止具有相同官能團的雜質也生成衍生干擾測定。學習文檔（三）檢驗方法開發(fā)學習文檔1.樣品預處理條件優(yōu)化提取方法選擇（