毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)可編輯

實(shí)習(xí)一實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的一般操作技術(shù)一、目的和意義毒理學(xué)研究需要用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來(lái)進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)，通過對(duì)動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)觀察和分析來(lái)研究毒作用，獲得毒物的毒性、劑量-反應(yīng)關(guān)系、毒作用機(jī)制等方面的資料，因此動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是毒理學(xué)研究中重要的手段之一。通過本次實(shí)習(xí)學(xué)習(xí)毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)中有關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的基本操作技術(shù)，掌握實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇、動(dòng)物抓取、染毒方法和生物材料的采集等技術(shù)。二、內(nèi)容（一）健康動(dòng)物的選擇無(wú)論選擇哪種種屬品系的動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，均要求選擇健康的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。健康動(dòng)物檢查時(shí)要求達(dá)到：外觀體型豐滿，被毛濃密有光澤、緊貼體表，眼睛明亮，行動(dòng)迅速，反應(yīng)靈活，食欲及營(yíng)養(yǎng)狀況良好。選擇時(shí)重點(diǎn)檢查以下項(xiàng)目：1.眼睛明亮，瞳孔雙側(cè)等圓，無(wú)分泌物。2.耳耳道無(wú)分泌物溢出，耳殼無(wú)膿瘡。3.鼻無(wú)噴嚏，無(wú)漿性粘液分泌物。4.皮膚無(wú)創(chuàng)傷、無(wú)膿瘡、疥癬、濕疹。5.頸部要求頸項(xiàng)端正，如有歪斜提示可能存在內(nèi)耳疾患，不應(yīng)選作實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。6.消化道無(wú)嘔吐、腹瀉，糞便成形，肛門附近被毛潔凈。7.神經(jīng)系統(tǒng)無(wú)震顫、麻痹。若動(dòng)物（大鼠、小鼠）出現(xiàn)圓圈動(dòng)作或體位倒置呈圓圈擺動(dòng)，應(yīng)該放棄動(dòng)物。8.四肢及尾四肢、趾及尾無(wú)紅腫及潰瘍。（二）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的性別鑒定動(dòng)物性別不同對(duì)毒物的敏感性也不同，這可能與性激素、肝微粒體羥基化反應(yīng)有關(guān)，也隨受試物而異。因此，要根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求選擇性別，一般實(shí)驗(yàn)如對(duì)性別無(wú)特殊要求者，宜選用雌雄動(dòng)物各半。1.大鼠、小鼠主要依肛門與生殖孔間的距離區(qū)分，間距大者為雄性，小者為雌性。成年雄鼠臥位可見到睪丸，雌性在腹部可見乳頭。2.豚鼠用在一只手抓住豚鼠頸部，另一只手把開靠近生殖器孔的皮膚，雄性動(dòng)物在圓孔中露出性器官的突起，雌性動(dòng)物則顯出三角形間隙，成年雌性豚鼠胸部有兩個(gè)乳頭。3.家兔將家兔頭輕輕夾在實(shí)驗(yàn)者左腋窩下，左手按住腰背部，右手拉開尾巴并將尾巴夾在中指和無(wú)名指中間，然后用拇指和食指稍稍把生殖器附近的皮膚扒開。雄兔即可見一圓孔中露出圓錐形稍向下彎曲的陰莖（但幼年雄兔看不到明顯的陰莖，只能看到圓孔中有凸起物，即是陰莖）。雌兔此處則為一條朝向尾巴的長(zhǎng)縫，呈橢圓形的間隙，間隙越向下越窄，此即為陰道開口處。（三）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抓取方法正確地抓取固定動(dòng)物，是為了在不損害動(dòng)物健康、不影響觀察指標(biāo)、并防止被動(dòng)物咬傷的前提下，確保實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。1.小鼠的抓取方法先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠籠或?qū)嶒?yàn)臺(tái)上向后拉，在其向前爬行時(shí)，用左手拇指和食指抓住小鼠的兩耳和頸部皮膚，將鼠體置于左手心中，把后肢拉直，以無(wú)名指按住鼠尾，小指按住后腿即可。2.大鼠的抓取方法大鼠的抓取基本同小鼠，只是大鼠比小鼠性情兇猛，不易用襲擊方法抓取。為避免咬傷，可戴上帆布或棉紗手套。采用左手固定法，用拇指和食指捏住鼠耳，余下三指緊捏鼠背皮膚，置于左掌心中，這樣右手可進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)操作。3.豚鼠的抓取方法豚鼠膽小易驚，在抓取時(shí)要穩(wěn)、準(zhǔn)、迅速。用手掌迅速扣住鼠背，抓住其肩胛上方，以拇指和食指環(huán)握頸部，另一只手托住臀部即可。4.兔的抓取方法用右手抓住兔頸部的毛皮提起，然后左手托起臀部或腹部，讓其體重的大部分重量集中在左手上。注意不要抓取雙耳或抓提腹部。（四）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的編號(hào)、標(biāo)記方法1.稱重大、小鼠秤的感應(yīng)量需在0.1g以下。根據(jù)實(shí)驗(yàn)的不同要求，選擇一定數(shù)量的大、小鼠，體重要求在同一組內(nèi)、同性別動(dòng)物體重差異應(yīng)下于平均體重的10%，不同組間同性別動(dòng)物體重均值差異應(yīng)小于5%。2.編號(hào)（1）染色法：以苦味酸來(lái)標(biāo)記。左前腿為1，左腰部為2，左后腿為3，頭部為4，背部為5，尾基部為6，右前腿為7，右腰部為8，右后腿為9。如果動(dòng)物編號(hào)超過10，再涂染另一種涂料，表示相應(yīng)的十位數(shù)，即左前腿上為10，左腰部為20，以此類推。（2）剪耳法：在耳朵不同部位剪一小孔代表某個(gè)號(hào)碼。常以右耳代表個(gè)位，左耳代表十位。（3）烙印法：用刺數(shù)鉗在動(dòng)物耳上刺上號(hào)碼，然后用棉簽蘸著溶在酒精中的黑墨在刺號(hào)上加以涂抹，烙印前最好對(duì)烙印部位預(yù)先用酒精消毒。（4）號(hào)牌法：用金屬的牌號(hào)固定于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的耳上，大動(dòng)物可系于頸上。（五）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的隨機(jī)分組方法為了得到客觀的劑量-反應(yīng)關(guān)系，應(yīng)將一群動(dòng)物按統(tǒng)計(jì)學(xué)原則隨即分配到各個(gè)試驗(yàn)組中?？砂措S機(jī)數(shù)字表方法進(jìn)行隨機(jī)分組。具體做法舉例說明：設(shè)將30只雄性動(dòng)物平均分成A、B、C、D、E、F六組，每組5只動(dòng)物。將已編號(hào)的動(dòng)物以號(hào)碼按隨機(jī)數(shù)字表進(jìn)行分配。如選隨機(jī)數(shù)字表第二行，從第一個(gè)數(shù)字開始，順次抄下30個(gè)數(shù)字（可依橫行、豎行或斜行抄錄）。將每個(gè)數(shù)字一律除以6（組數(shù)），根據(jù)余數(shù)1、2、3、4、5、0（整除者）分別將動(dòng)物分配到A、B、C、D、E、F組，結(jié)果見表1（數(shù)字源自第二行隨機(jī)數(shù)字表）表1動(dòng)物隨機(jī)分組表動(dòng)物號(hào)123456789101112131415隨機(jī)數(shù)字977424676242811457204253323732除6余數(shù)120120323205212分組ABFABFCBCBFEBAB動(dòng)物號(hào)161718192021222324252627282930隨機(jī)數(shù)字2773675124517989731676622766除6余數(shù)310130315144230分組CAFACFCAEADDBCF按上法分組后，A組有7只動(dòng)物，B組7只，C組6只，D組與E組各2只，F(xiàn)組6只。為了使每組動(dòng)物數(shù)均為5只，需要根據(jù)隨即分配的原則再選出2只A組和1只C組動(dòng)物給D組。B組選出2只，F(xiàn)組選出1只給E組。具體方法如下：繼續(xù)抄下隨機(jī)數(shù)字分別除以A、B、C、F組的動(dòng)物數(shù)，即：56/7（7為A組動(dòng)物數(shù)）整除，余數(shù)為0，將A組第7只動(dòng)物（25號(hào)）調(diào)配給D組；下一個(gè)：50/6（6為A組動(dòng)物數(shù)）余2，將A組第2只動(dòng)物（4號(hào)）調(diào)配給D組；接下來(lái)26/6（6為C組動(dòng)物數(shù)）余2，將C組第2只動(dòng)物（9號(hào)）給D組。余類推，最后調(diào)整分組成表2所示。雌性動(dòng)物也按上法分組，然后將雌、雄動(dòng)物合組進(jìn)行試驗(yàn)。表230只動(dòng)物隨機(jī)分組組別鼠號(hào)組別鼠號(hào)ABC1，14，17，19，235，8，10，13，157，16，20，22，29DEF4，9，25，26，272，6，12，24，283，11，18，21，30（六）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的被毛去除方法1.剪毛剪毛剪。注意把剪刀貼緊皮膚剪，不可用手提起被毛，以免剪破皮膚；依次剪毛，不要亂剪；剪下來(lái)的被毛集中在一個(gè)容器內(nèi)，勿遺留在手術(shù)野和操作臺(tái)周圍。2.拔毛多用于兔耳緣靜脈注射或取血時(shí)，以及給大、小鼠作尾靜脈注射時(shí)，需用拇指、食指將局部被毛拔去，以利操作。3.脫毛脫毛系指用化學(xué)藥品脫去動(dòng)物的被毛，適用于無(wú)菌手術(shù)野的準(zhǔn)備以及觀察動(dòng)物局部皮膚血液循環(huán)和病理變化。常用硫化鋇或依據(jù)脫毛劑配方配制脫毛劑。（七）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物染毒途徑和方法染毒的途徑和方法多種多樣，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、?dòng)物種類和藥物劑型等情況確定。1.皮下注射注射時(shí)以左手拇指和食指提起皮膚，將連有針頭的注射器刺入皮下。注射部位一般在大腿外側(cè)、內(nèi)側(cè)、背部、耳根部、腹部。2.皮內(nèi)注射將注射的局部脫去被毛，消毒后，用左手拇指和食指按住皮膚并使之繃緊，在兩指之間，將連有針頭的注射器緊貼皮膚表層刺入皮內(nèi)，然后再向上挑起并再稍刺入，即可注射藥物，此時(shí)可見皮膚表面鼓起一白色小皮丘。3.肌內(nèi)注射肌內(nèi)注射應(yīng)選肌肉發(fā)達(dá)、沒有大血管通過的部位，一般多選用臀部，注射時(shí)垂直迅速刺入肌肉，回抽針?biāo)┤鐭o(wú)回血，即可進(jìn)行注射。4.腹腔注射用大、小鼠作實(shí)驗(yàn)時(shí)，以左手抓住動(dòng)物，使腹部向上，右手將注射針頭于左或右下腹刺入皮下，使針頭向前推進(jìn)0.5~1.0cm，再以45°角穿過腹肌，固定針頭，緩慢注入藥液。若實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為家兔，進(jìn)針部位為下腹部的腹白線離開1cm。5.靜脈注射（1）小白鼠和大白鼠：一般采用尾靜脈注射，鼠尾靜脈有三根，左右兩側(cè)尾靜脈比較容易固定，多采用。操作時(shí)先將動(dòng)物固定在鼠筒內(nèi)或扣在燒杯中，使尾巴露出，尾部用溫水浸潤(rùn)或用酒精擦拭，以左手拇指和食指捏住鼠尾兩側(cè)，中指從下面托起尾巴，以無(wú)名指和小指夾住尾巴的末梢，右手持注射器，使針頭與靜脈平行，從尾下四分之一處進(jìn)針，先緩慢注入少量藥液，如無(wú)阻力，可繼續(xù)注入。注射完畢后把尾部向注射側(cè)彎曲以止血或用消毒棉球壓迫針眼止血。（2）兔：兔耳中央為動(dòng)脈，耳外緣為靜脈。內(nèi)緣靜脈深不易固定，故一般不選用，常用外緣靜脈。先拔去注射部位的被毛，用手指彈動(dòng)或輕揉兔耳，使靜脈充盈，左手食指和中指夾住靜脈的近端，拇指繃緊靜脈的遠(yuǎn)端，無(wú)名指及小指墊在下面，右手持針盡量從靜脈的遠(yuǎn)端刺入，待有回血后，將拇指移到針頭處以固定針頭，放開食指和中指，將藥液注入，然后拔出針頭，用手壓迫針眼片刻。6.經(jīng)口染毒在急性試驗(yàn)中，經(jīng)口染毒多用灌胃法，此法劑量準(zhǔn)確，適用于小鼠、大鼠、家兔等動(dòng)物。（1）小鼠、大鼠或豚鼠：灌胃時(shí)將針按在注射器上，吸入藥液。左手抓住鼠背部及頸部皮膚將動(dòng)物固定，右手持注射器，將灌胃針插入動(dòng)物口中，沿咽后壁徐徐插入食管。針插入時(shí)應(yīng)無(wú)阻力，若感到阻力或動(dòng)物掙扎，應(yīng)立即停止進(jìn)針或?qū)⑨槹纬?，以免損傷或穿破食管及誤入食管。（2）兔：先將動(dòng)物固定，再將特制的擴(kuò)口器放入動(dòng)物口中，擴(kuò)口器的寬度可視動(dòng)物口腔大小而定，中間鉆一小孔。灌胃時(shí)將擴(kuò)口器放在動(dòng)物上下門牙之后，并用繩固定于嘴部，將帶有彈性的橡皮導(dǎo)管，經(jīng)擴(kuò)口器上的小圓孔插入，沿咽后壁進(jìn)入食管，此時(shí)應(yīng)檢查導(dǎo)管是否正確插入食管，可將導(dǎo)管外口置于一盛水的燒杯中，如不發(fā)生氣泡，即認(rèn)為此導(dǎo)管實(shí)在食管中，此時(shí)可將藥液灌入。7.其它給藥途徑（1）呼吸道染毒：粉塵、氣體、蒸氣或霧等狀態(tài)存在的藥物或賭氣，須通過呼吸道染毒。（2）皮膚染毒：為了鑒定化學(xué)物質(zhì)經(jīng)皮膚的吸收作用、局部作用、致敏作用和光感作用等，需采用經(jīng)皮膚染毒方法。①斑貼法（家兔）：在脫毛區(qū)（一般1cm2即可）貼敷浸有受試化合物的多層紗布（應(yīng)低于致死劑量），再蓋上一層油紙或塑料薄膜，貼牢固定。于12~24小時(shí)后解開敷料，用溫水清洗皮膚，觀察皮膚反應(yīng)。②浸尾法（小鼠及大鼠）：目的是定性地判定受試物的經(jīng)皮吸收作用。染毒前先將鼠放入特制的固定盒內(nèi)，并使其尾巴通過固定盒底部的軟木塞的圓孔露出管外。繼之將尾巴通過小試管軟木塞小孔，插入莊有受試物液體的試管內(nèi)，浸泡2~6小時(shí)，觀察中毒癥狀。（八）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物染毒途徑和方法1.動(dòng)物常用采血方法(1)大小鼠鼠尾采血方法：適用于需血量少的實(shí)驗(yàn)。方法：將動(dòng)物固定后，把鼠尾浸入45~50℃溫水中使尾靜脈充血，擦干皮膚后，再用酒精棉球擦拭消毒。剪去尾尖（約0.2~（2）眼眶靜脈叢采血法：操作者以左手拇指、食指緊緊握住大鼠或小鼠頸部壓迫頸部?jī)蓚?cè)使眶后靜脈叢充血（注意用力要恰當(dāng)，以防止動(dòng)物窒息死亡），右手持玻璃毛細(xì)管從一側(cè)眼內(nèi)眥部以45°角刺入，捻轉(zhuǎn)前進(jìn)。如無(wú)阻力繼續(xù)刺入，有阻力就抽出玻璃毛細(xì)管調(diào)整方向后再刺入，直至出血為止。右手持容器收集血液后，拔出毛細(xì)管，用干棉球壓迫止血。（3）腹主動(dòng)脈或股動(dòng)（靜）脈采血法：為一次性采血方法。大、小鼠麻醉后，仰臥位固定動(dòng)物，剪開腹腔，剝離暴露腹主動(dòng)脈或暴露股動(dòng)（靜）脈，用注射器刺入采血。（4）家兔耳緣靜脈采血法：家兔在兔盒中固定，拔掉一側(cè)耳緣部細(xì)毛，輕輕以手指彈耳，使耳緣靜脈充血，酒精消毒。左手壓迫耳根，右手持針刺破靜脈收集血液；或直接用注射器進(jìn)針，耳緣靜脈采血。（5）斷頭采血法：該法可用于大、小鼠。操作者左手握住動(dòng)物，右手持剪刀，快速剪斷頭部，倒立動(dòng)物將血液滴入容器。注意防止剪斷的毛發(fā)掉入接血容器內(nèi)。（6）心臟采血法：將兔或大、小鼠以仰臥位固定，家兔需在左側(cè)胸3~4肋部位剪毛，常規(guī)消毒。于第3~4肋間近胸骨左緣處，手觸心搏最明顯處進(jìn)針，采血。采血畢迅速拔針，用酒精棉球壓迫止血。大、小鼠則在手觸心搏最明顯處進(jìn)針。2.動(dòng)物尿液的收集：用代謝籠收集。代謝籠主要由備有動(dòng)物飲水和裝飼料的籠體、糞尿分離器和收集尿液容器組成。（九）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處死方法1.脊椎脫臼法左手按住鼠頭，右手抓住鼠尾猛力向后拉，使動(dòng)物頸椎拉斷脫節(jié)而立即死亡。此法多用于處死小鼠。2.斷頭法操作者用右手按住大鼠或小鼠頭部，左手握住背部，露處頸部，助手用大剪刀或斷頭器剪斷頸部使之死亡。3.急性大失血法可用鼠眼眶動(dòng)脈和靜脈急性大量失血法使大、小鼠立即死亡。4.擊打法右手抓住尾部，提起，用力棒打其頭部，鼠痙攣后立即死亡。5.麻醉致死法在密閉容器中預(yù)先放入麻醉劑（氯仿或乙醚），然后將動(dòng)物放入，密封蓋好，使動(dòng)物吸入過量麻醉劑致死。6.麻醉后急性放血法該法多用于處死大鼠。先腹腔注射麻醉動(dòng)物后，固定動(dòng)物于仰臥位，右手持鑷子提起大腿內(nèi)側(cè)皮膚，右手用剪刀作一切口并向腹股溝方向剪開皮膚，皮膚切口長(zhǎng)約3~4cm。用鑷子分離筋膜，于腹股溝中點(diǎn)大腿內(nèi)側(cè)深部，暴露股動(dòng)脈和靜脈，用剪子剪斷股動(dòng)脈即有大量血液流出，動(dòng)物迅速死亡。7.空氣栓塞法用注射器向動(dòng)物靜脈內(nèi)迅速注入一定量的空氣，使之形成氣栓栓塞血管，引起循環(huán)障礙致死。該法適用于大動(dòng)物如兔、狗、猴等。使用時(shí)需注入足量的空氣。8.化學(xué)藥物致死法此法適用于較大動(dòng)物如兔、狗等。方法是給動(dòng)物靜脈注射化學(xué)藥物而致死。常用10%KCl或10%甲醛溶液進(jìn)行靜脈注射。9.開放性氣胸法將動(dòng)物開胸，造成開放性氣胸，此時(shí)胸膜腔的壓力與大氣壓力相等，肺臟因受大氣壓所發(fā)生萎縮、縱隔擺動(dòng)使動(dòng)物窒息而死亡。實(shí)習(xí)二經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)一、原理和實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私庖淮位?4小時(shí)內(nèi)多次給予受試化學(xué)物后，動(dòng)物多產(chǎn)生的急性毒性反應(yīng)極其嚴(yán)重關(guān)系，中毒死亡的特征以及可能的死亡原因，觀察受試物毒性反應(yīng)與劑量的關(guān)系，求出半數(shù)致死量（LD50）?；瘜W(xué)毒物經(jīng)口染毒的方法是衛(wèi)生毒理學(xué)中重要的基本技術(shù)之一，經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)是研究化學(xué)毒物的基本試驗(yàn)。通過該實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)化學(xué)物毒性試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原則和掌握經(jīng)口灌胃技術(shù)。二、內(nèi)容1.健康小鼠的選擇，性別的辨認(rèn)2.稱重、編號(hào)和隨機(jī)分組方法3.受試化學(xué)物溶液的配制4.小鼠經(jīng)口灌胃操作技術(shù)5.毒性體征的觀察、LD50計(jì)算和毒性分級(jí)三、試劑和材料（一）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康成年小鼠或大鼠若干只。（二）器材注射器、吸管、容量瓶、燒杯、滴管、灌胃針、電子天平、動(dòng)物體重秤、外科剪刀、鑷子。（三）試劑受試化合物，苦味酸酒精飽和液或其他染色液。四、操作步驟（一）健康動(dòng)物的選擇（見實(shí)習(xí)一）（二）性別鑒定（見實(shí)習(xí)一）（三）動(dòng)物編號(hào)與分組1.稱重大、小鼠秤的感應(yīng)量需在0.1g以下。根據(jù)實(shí)驗(yàn)的不同要求，選擇一定數(shù)量的大、小鼠，體重要求在同一組內(nèi)、同性別動(dòng)物體重差異應(yīng)小于平均體重的10%，不同組間同性別動(dòng)物體重均值差異應(yīng)小于5%。急性毒性實(shí)驗(yàn)一般使用體重為18~25g的小鼠或/和150~240g大鼠。2.編號(hào)（見實(shí)習(xí)一）3.隨機(jī)分組（見實(shí)習(xí)一）（四）受試物的配制受試化學(xué)物的量取固體化學(xué)物采用稱量法，液體化學(xué)物可用稱量法或吸量法。（1）稱量法：將受試化合物放入已知重量的容器內(nèi)稱量。加溶劑溶解或稀釋，輕如刻度容器內(nèi)，混勻，再加溶劑至刻度。算出濃度（mg/ml）備用。（2）吸量法：依設(shè)計(jì)劑量計(jì)算出應(yīng)吸取也太受試物的容積，加入容量瓶中，用溶劑加至刻度。計(jì)算公式為：X=式中：X——應(yīng)吸取受試物的容積（ml）A——設(shè)計(jì)要求的受試物濃度（mg/ml）V——容兩瓶溶劑（ml）d——受試化學(xué)物比密2.受試化學(xué)物的稀釋（1）等濃度稀釋法：將受試化學(xué)物配成一種濃度，此時(shí)各劑量組的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物將給予不同提及的受試化學(xué)物。例如受試物配成1000mg/10ml的溶液，五個(gè)劑量組的劑量分別為100、200、400、800、1600mg/kg，則各劑量組動(dòng)物將依次給予1.0ml/kg、2.0ml/kg直至最高劑量組的16ml/kg。（2）等容量稀釋法：按照事先設(shè)計(jì)的劑量分別稀釋配制為幾種不同濃度的受試物溶液，二個(gè)各劑量組的動(dòng)物均給予相同單位體重體積的受試化學(xué)物。如上例的情況，將受試物分別配成100mg/10ml、200mg/10ml……1600mg/10ml等5個(gè)濃度的溶液，各劑量組動(dòng)物給予受試物的體積均為10ml/kg。（五）灌胃操作1.小鼠、大鼠及豚鼠灌胃法：灌胃時(shí)將針按在注射器上，吸入藥液。左手抓住鼠背部及頸部皮膚將動(dòng)物固定，右手持注射器，將灌胃針插入動(dòng)物口中，沿咽后壁徐徐插入食管。針插入時(shí)應(yīng)無(wú)阻力，若感到阻力或動(dòng)物掙扎，應(yīng)立即停止進(jìn)針或?qū)⑨槹纬?，以免損傷或穿破食管及誤入食管。進(jìn)針深度一般是小鼠2.5~4cm，大鼠或豚鼠4~6cm。為了驗(yàn)明是否已正確地插入胃部，可輕輕回抽注射器，如無(wú)氣泡抽出，表明已插入胃中；如有大量氣泡，則提示誤差氣管，應(yīng)抽出重插。隨后將受試物溶液諸如。灌胃容量小鼠通常為0.2~1ml，大鼠1~4ml，豚鼠1~5ml。2.注意事項(xiàng)為了使受試物能完全吸收，灌胃染毒時(shí)要求動(dòng)物保持空腹?fàn)顟B(tài)，這是因?yàn)榛瘜W(xué)毒物進(jìn)入胃內(nèi)易與食糜作用而降低毒性，而且胃內(nèi)容物也不利于受試物溶液的灌入，因此染毒前應(yīng)禁食6~10小時(shí)。但要注意時(shí)間不能過長(zhǎng)。否則動(dòng)物長(zhǎng)時(shí)間饑餓會(huì)影響肝臟，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。灌胃后至少2~3小時(shí)后才能喂食，油劑比水溶液要求限制喂食的時(shí)間更長(zhǎng)。相同劑量的受試物，若以不同濃度給藥，死亡情況會(huì)有所不同。體積太小、太濃可能發(fā)生局部刺激或其他損傷；體積太大可能會(huì)引起胃部機(jī)械性損傷，影響正常生理功能。常用的方法是將受試物體積固定，根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的劑量將受試物配制成不同濃度的溶液進(jìn)行灌胃。通常灌胃體積以體重的1%~2%計(jì)算，最多不超過3%，即每100g體重灌胃1~2ml，最多不超過3ml。根據(jù)實(shí)際經(jīng)驗(yàn)得出的各種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物灌胃量的極限是：小鼠0.5~1ml，大鼠4~5ml。（六）中毒癥狀觀察和LD50計(jì)算1.中毒癥狀染毒后注意觀察中毒的發(fā)生、發(fā)展過程的規(guī)律以及中毒特點(diǎn)和毒作用的靶器官，觀察要點(diǎn)見表1，做好實(shí)驗(yàn)紀(jì)錄。觀察期間每3天稱重一次。急性毒性試驗(yàn)可不做病理組織學(xué)檢查，但對(duì)死亡動(dòng)物應(yīng)做大體病理學(xué)觀察，存活動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)可做大體解剖學(xué)觀察，肉眼觀察到病變時(shí)應(yīng)取材做病理組織學(xué)檢查，以便為下階段毒性試驗(yàn)劑量選擇提供參考依據(jù)。表1急性毒性實(shí)驗(yàn)原始記錄受試物名稱：受試物性狀：受試物來(lái)源：動(dòng)物種屬品系：動(dòng)物來(lái)源及合格證號(hào)：染毒途徑：室溫：日期：劑量組別（mg/kg）動(dòng)物編號(hào)性別體重（g）染毒量（ml）染毒時(shí)間體征及出現(xiàn)時(shí)間死亡時(shí)間體重紀(jì)錄（g）實(shí)驗(yàn)操作者：實(shí)驗(yàn)紀(jì)錄者：2.LD50計(jì)算根據(jù)受試物的種類有指導(dǎo)教師事先確定采用何種方法（該進(jìn)寇氏法、霍恩法等）進(jìn)行計(jì)算，并在試驗(yàn)前設(shè)計(jì)劑量分組和每組動(dòng)物數(shù)。選擇適宜的方法求出LD50及95%的可信限范圍。如毒性反應(yīng)存在性別差異，應(yīng)分別求出不同性別動(dòng)物