動(dòng)物和動(dòng)物產(chǎn)品沙門氏菌檢測方法 編制說明

1《動(dòng)物和動(dòng)物產(chǎn)品沙門氏菌檢測方法》編制說明《動(dòng)物和動(dòng)物產(chǎn)品沙門氏菌檢測方法》歸口為TC181（全國動(dòng)物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化術(shù)委員會(huì)主管部門為中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部。本文件計(jì)劃項(xiàng)目是原有標(biāo)準(zhǔn)難滿足當(dāng)前畜禽生產(chǎn)的實(shí)際需求。沙門氏菌不僅嚴(yán)重影響動(dòng)物的健康和生產(chǎn)性能，還是重要的食源性人獸共患病原菌，能夠通過食物鏈感染人，具有重要公共衛(wèi)生意義。為了更好開展動(dòng)物和動(dòng)物產(chǎn)品沙門氏菌的檢測，保障動(dòng)物和人類健康，在動(dòng)物體、動(dòng)物源產(chǎn)品及環(huán)境樣品中沙門氏菌的分離方法及鑒定方法。與現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)以及已牛、羊等動(dòng)物體內(nèi)，畜禽養(yǎng)殖過程中的沙門氏菌是動(dòng)物源食品生產(chǎn)鏈中沙門氏菌污染的源頭，通過屠宰加工過程中的交叉污染導(dǎo)致動(dòng)物產(chǎn)品的污染，可通過食物鏈傳播感染人類。因此，準(zhǔn)確、快速地檢測畜禽養(yǎng)殖階段和屠宰加工階段動(dòng)物和動(dòng)物產(chǎn)雞養(yǎng)殖環(huán)節(jié)沙門氏菌的總體流行率為9.8%2快速地檢測畜禽養(yǎng)殖階段和屠宰加工階段動(dòng)物和動(dòng)物產(chǎn)品中的沙門氏菌具有十分重近年來我國家禽、家畜的養(yǎng)殖和屠宰產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速，在生產(chǎn)過程的集約化、標(biāo)準(zhǔn)化以及動(dòng)物產(chǎn)品的多樣化等方面取得了巨大的進(jìn)步。原有的《動(dòng)物和動(dòng)物產(chǎn)品沙品種類及處理、采樣環(huán)節(jié)設(shè)置等方面已經(jīng)較難滿足當(dāng)前畜禽生產(chǎn)的實(shí)際需求。傳統(tǒng)本文件提供了不同類型動(dòng)物和動(dòng)物產(chǎn)品相關(guān)樣品的采集、保存、運(yùn)輸、處理方法等；沙門氏菌的分離培養(yǎng)和鑒定方法，包括細(xì)菌接種、選擇性培養(yǎng)基使用、可疑型鑒定方法和結(jié)果判定等；樣品處理和沙門氏菌分離鑒定相關(guān)試劑的制備方法等。通過本標(biāo)準(zhǔn)的制定和實(shí)施，有望建立全國范圍內(nèi)動(dòng)物和動(dòng)物產(chǎn)品沙門氏菌的統(tǒng)一、本文件由揚(yáng)州大學(xué)和華中農(nóng)業(yè)大學(xué)起草。其中，揚(yáng)州大學(xué)起草人來自揚(yáng)州大學(xué)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全生物性危害因子（動(dòng)物源）控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、江蘇省人獸共患病學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，包括焦新安、潘志明、孟闖、耿士忠、胡茂志、康喜龍、人來自華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院、動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，包括栗紹文等人。主要起草標(biāo)準(zhǔn)編寫和修改；潘志明協(xié)調(diào)標(biāo)準(zhǔn)起草的具體工作，參與標(biāo)準(zhǔn)編寫和修改；孟闖、3訂，確定標(biāo)準(zhǔn)結(jié)構(gòu)，組織標(biāo)準(zhǔn)編寫和修改；潘志明協(xié)調(diào)標(biāo)準(zhǔn)起草的具體工作，參與標(biāo)準(zhǔn)編寫和修改；孟闖、栗紹文、胡茂志、康喜龍參與標(biāo)準(zhǔn)編寫和修改；耿士忠、單位包括中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所、中國動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心、中國農(nóng)科院上海獸醫(yī)研究所、江蘇省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心、肉食品安全生產(chǎn)技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院、四川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院、吉林大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院、中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院、新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)等，是我國長期從事動(dòng)得立項(xiàng)，項(xiàng)目主持人焦新安教授隨機(jī)組織標(biāo)準(zhǔn)制定小組成員繼續(xù)開展標(biāo)準(zhǔn)的征求意家和省部級(jí)政府（動(dòng)物）疾病預(yù)防與控制中心等檢測監(jiān)測部門，包括中國動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心、中國動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心、江蘇省疾控預(yù)防控制中心、江蘇省動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心等；二是國家和省部級(jí)研究院所，包括中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海4中國動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心、中國動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽采樣過程要更詳細(xì)一些，明確采樣面積、重量等可操作性，均已經(jīng)按照實(shí)際情況進(jìn)4）報(bào)批階段規(guī)范性引用文件、術(shù)語和定義、縮略語、設(shè)備和材料、培養(yǎng)基與試劑和生物安全要及養(yǎng)殖和屠宰生產(chǎn)環(huán)境中相關(guān)樣品的采集和處理方法，沙門氏菌的分離方法、生化PCR檢測。本文件主要依據(jù)NY/T1948《獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室生物安全要求通則》、GB4789.4-2024《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門氏菌檢驗(yàn)》以及OIE《陸5系中沙門氏菌的防控等內(nèi)容進(jìn)行編寫。通過對(duì)國內(nèi)外現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)及數(shù)據(jù)文獻(xiàn)的調(diào)研，結(jié)合起草單位前期大量的研究基礎(chǔ)，充分了解沙門氏菌在畜禽養(yǎng)殖和屠宰過程中動(dòng)物和動(dòng)物產(chǎn)品中的污染情況及檢測手段，修訂完善了動(dòng)物和動(dòng)物產(chǎn)品沙門氏菌檢測需氧或兼性厭氧菌，絕大多數(shù)沙門氏菌都有鞭毛，可以進(jìn)行趨向性運(yùn)動(dòng)，沒有可見大小黑色圓形菌落，周圍有淡淡的透明圈環(huán)繞。在三糖鐵實(shí)驗(yàn)中使底部變黑，斜面變紅，能夠產(chǎn)酸產(chǎn)氣。沙門氏菌是人類主要的食源性人獸共患病原菌之一，該菌廣泛存在于禽類、豬、牛、羊等動(dòng)物體內(nèi)，畜禽養(yǎng)殖過程中的沙門氏菌是動(dòng)物源食品生產(chǎn)鏈中沙門氏菌污染的源頭，通過屠宰加工過程中的交叉污染導(dǎo)致動(dòng)物產(chǎn)品的污染，可通過食物鏈傳播感染人類。標(biāo)準(zhǔn)起草人團(tuán)隊(duì)曾經(jīng)采集上海豬場糞便樣品587產(chǎn)品中的沙門氏菌具有十分重要的意義。近年來我國家禽、家畜的養(yǎng)殖和屠宰產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速，在生產(chǎn)過程的集約化、標(biāo)準(zhǔn)化以及動(dòng)物產(chǎn)品的多樣化等方面取得了巨大的進(jìn)步，原有標(biāo)準(zhǔn)在樣品種類及處理、采樣環(huán)節(jié)設(shè)置等方面已經(jīng)較難滿足當(dāng)前畜禽生產(chǎn)的實(shí)際需求。傳統(tǒng)的沙門氏菌的鑒定采用形態(tài)觀察和生化鑒定的方法，檢測誤差較大，不能滿足快速檢測要求。因而，本文件提供了不同類型動(dòng)物和動(dòng)物產(chǎn)品相關(guān)樣品的采集、保存、運(yùn)輸、處理方法等；沙門氏菌的分離培養(yǎng)和鑒定方法，包括細(xì)菌接種、選擇性培養(yǎng)基使用、可疑菌落選擇、菌落生化鑒定和血清型鑒定方法和結(jié)果判定等；樣品處理和沙門氏菌分離鑒定相關(guān)試劑6本文件起草成員長期以來在食源性動(dòng)物源沙門氏菌的流行病學(xué)調(diào)查、細(xì)菌與宿益性行業(yè)專項(xiàng)、國家自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目、國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目、國家農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估項(xiàng)目、農(nóng)業(yè)行業(yè)管理業(yè)務(wù)經(jīng)費(fèi)項(xiàng)目等重大科研和行業(yè)監(jiān)管項(xiàng)目等舊標(biāo)準(zhǔn)主要包括范圍、規(guī)范性引用文件、檢測方法三部分內(nèi)容。新標(biāo)準(zhǔn)包括正關(guān)樣品的采集和處理方法，沙門氏菌的分離方法、生化鑒定方法和分子生物學(xué)鑒定3.增加了不同類型動(dòng)物和動(dòng)物產(chǎn)品相關(guān)樣品包括雞、豬、牛等主要?jiǎng)游镳B(yǎng)殖和屠宰環(huán)節(jié)中糞便、飼料、禽蛋、鮮奶、腸內(nèi)7樣品處理和沙門氏菌分離鑒定相關(guān)試劑的配方和制R本標(biāo)準(zhǔn)在征求意見稿階段分別請(qǐng)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部獸醫(yī)診斷中心（中國動(dòng)物疾病預(yù)防株。復(fù)核結(jié)論認(rèn)為“標(biāo)準(zhǔn)所述技術(shù)內(nèi)容可有效檢測出豬屠產(chǎn)品沙門氏菌檢測方法》所述方法，采集屠宰過程中雞胴體表面、屠宰刀具等工具復(fù)核結(jié)論認(rèn)為“標(biāo)準(zhǔn)所述技術(shù)內(nèi)容可有效檢測出雞屠宰過程中的沙門菌，符合標(biāo)準(zhǔn)8根據(jù)《動(dòng)物和動(dòng)物產(chǎn)品沙門氏菌檢測方法》所述方法，采集雞蛋表面擦拭樣、雞蛋菌的特異性取決于所選擇靶序列是否為沙門氏菌高度保守的特異性片段。目前國內(nèi)蠟樣芽孢桿菌、乳酸桿菌、肺炎克雷伯桿菌、普通變形桿菌、奇異變形桿菌、陰溝腸桿菌、弗氏檸檬酸桿菌、痢疾桿菌、福氏2a志賀氏菌、普羅威登斯擴(kuò)增后均無特異性條帶出現(xiàn)。使用的非沙門氏菌主要是腸桿菌科其他菌屬的細(xì)菌，因?yàn)樯抽T氏菌與腸桿菌科其他屬的細(xì)菌親緣關(guān)系很近，尤其是與檸檬酸桿菌的同源9牛、羊等動(dòng)物體內(nèi)，畜禽養(yǎng)殖過程中的沙門氏菌是動(dòng)物源食品生產(chǎn)鏈中沙門氏菌污染的源頭，通過屠宰加工過程中的交叉污染導(dǎo)致動(dòng)物產(chǎn)品的污染，可通過食物鏈傳播感染人類。本文件起草成員長期以來在食源性動(dòng)物源沙門氏菌的流行病學(xué)調(diào)查，胴體依次經(jīng)燎毛和去毛后，沙門氏菌陽性率降至最低（12.2%在劈半后沙門氏菌檢出率達(dá)到最高（64.6%清水淋洗后沙門氏菌檢出率大幅下降至32.7%，經(jīng)修飾株中91.66%鑒定為沙門氏菌。大量流行病快速地檢測畜禽養(yǎng)殖階段和屠宰加工階段動(dòng)物和動(dòng)物產(chǎn)品中的沙門氏菌具有十分重要的意義。近年來我國家禽、家畜的養(yǎng)殖和屠宰產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速，在生產(chǎn)過程的集約化、標(biāo)準(zhǔn)化以及動(dòng)物產(chǎn)品的多樣化等方面取得了巨大的進(jìn)步，原有標(biāo)準(zhǔn)在樣品種類及處理、采樣環(huán)節(jié)設(shè)置等方面已經(jīng)較難滿足當(dāng)前畜禽生產(chǎn)的實(shí)際需求，亟待根據(jù)當(dāng)前我國畜禽養(yǎng)殖和屠宰生產(chǎn)實(shí)際情況和需求開展動(dòng)物和動(dòng)物產(chǎn)品中沙門氏菌檢測方的是結(jié)合抗體的熒光化合物，當(dāng)用熒光標(biāo)記的高度專一性單克隆抗體與沙門氏菌抗原反應(yīng)，形成的熒光物質(zhì)可通過儀器檢測出來，從而達(dá)到對(duì)沙門氏菌進(jìn)行快速篩選依靠生化反應(yīng)和血清學(xué)反應(yīng)對(duì)沙門氏菌進(jìn)行檢驗(yàn)鑒定，它是一種傳統(tǒng)的沙門氏菌鑒定方法，在國際上被廣泛承認(rèn)，是鑒定沙門氏菌的基準(zhǔn)方法，如出現(xiàn)爭議，應(yīng)以此生更多的數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)的可信度更高，降低工作量，因此分析的花費(fèi)也低。定性P大小的特異性條帶，說明本方法無假陰性的結(jié)果；17株非沙門氏菌菌株經(jīng)PCR擴(kuò)增后均無特異性條帶出現(xiàn)，說明該方法具有很強(qiáng)的特異性。用本研究建立的PCR方法和增菌預(yù)處理，結(jié)合PCR檢測方法的使用，是，被沙門氏菌污染的動(dòng)物源食品是引起人類食源性疾病的主要原因之一，導(dǎo)致嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。按照標(biāo)準(zhǔn)編制的相關(guān)要求，起草小組對(duì)活體動(dòng)物、動(dòng)物源產(chǎn)品以及畜禽屠宰過程中的沙門氏菌檢測制定了標(biāo)準(zhǔn)和依據(jù)，為開展沙門氏菌的檢測、監(jiān)測及流行病學(xué)調(diào)查提供依據(jù)。通過本文件提供的方法，可以在畜禽養(yǎng)殖及屠宰環(huán)節(jié)有效檢測動(dòng)物活體、動(dòng)物源產(chǎn)品及生產(chǎn)環(huán)境中的沙門氏菌，以便盡早實(shí)施針對(duì)沙（四）與國際、國外同類標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)內(nèi)容的對(duì)比情況，或者與測試的本文件主要根據(jù)OIE《陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》2019年版第3.10.7章沙養(yǎng)殖階段的家禽的糞便和泄殖腔的腸樣品及拭子~20℃;樣品運(yùn)輸時(shí)緩沖蛋白胨水預(yù)增菌，子生物學(xué)鑒定方法緩沖蛋白胨水預(yù)增菌，四硫磺酸鈉煌綠培養(yǎng)基養(yǎng)殖階段家禽泄殖腔棉拭子或糞家畜直腸棉拭子和屠宰階段環(huán)境0℃~20℃;樣品運(yùn)輸時(shí)間不超過244℃±2℃中低溫進(jìn)行處理緩沖蛋白胨水預(yù)增菌；糞便樣品增菌培養(yǎng)后MSRV改良培養(yǎng)基（新品增菌培養(yǎng)后RVR10XLT-4瓊脂培養(yǎng)基選擇血清型鑒定血清學(xué)鑒定方法本文件主要根據(jù)OIE《陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》2019年版第3.10.7章沙門氏菌病診斷本文件與《中華人民共和國動(dòng)物防疫法》《中華人民共和國食品安全法》《動(dòng)與國家標(biāo)準(zhǔn)GB4789.4-20