植物生物技術(shù)考試重點

植物生物技術(shù)考試重點生物技術(shù)？現(xiàn)代生物技術(shù)主要包括哪幾個方面的技術(shù)？生物技術(shù)(biotechnology)，也稱生物工程,是指以現(xiàn)代生命科學(xué)為根底,結(jié)合先進的工程技術(shù)手段和其他根底科學(xué)的科學(xué)原理,按照預(yù)先的設(shè)計改造生物體或加工生物原料,為人類生產(chǎn)出所需要的產(chǎn)品或到達某種目的的一系列技術(shù)。先進的工程技術(shù)：基因工程、細胞工程、酶工程、發(fā)酵工程和蛋白質(zhì)工程等新技術(shù)。改造生物體：獲得優(yōu)良的動植物品種。為人類生產(chǎn)所需的產(chǎn)品：食品、醫(yī)藥、能源、原料等。生物技術(shù)的產(chǎn)生以DNA重組技術(shù)的建立為標志?，F(xiàn)代植物生物技術(shù)包括：植物組織培養(yǎng)技術(shù)、人工種子技術(shù)、細胞工程技術(shù)、基因工程技術(shù)。什么是胚培養(yǎng)？有什么意義？無菌條件下將胚從胚珠或種子中別離出來，置于培養(yǎng)基上進行離體培養(yǎng)的方法。意義：克服遠緣雜交不親和性和雜種不育性，獲得種間或?qū)匐s種。種間或?qū)匐s交中，受精作用能正常完成，胚也能進行早期的發(fā)育，但由于胚乳發(fā)育不良，雜種胚最終將夭折，因而不能形成有發(fā)芽能力的種子。什么是根本培養(yǎng)基？僅能滿足微生物野生型菌株生長需要的培養(yǎng)基什么是轉(zhuǎn)基因沉默？什么是逆轉(zhuǎn)錄酶？6、植物組織培養(yǎng)？將植物的離體器官〔如根、莖、葉、花、果實、種子等〕、組織〔如花藥、胚珠、形成層、皮層、胚乳等〕、細胞〔如體細胞、生殖細胞花粉等〕以及去除細胞壁的原生質(zhì)體，甚至幼小的植株，在人工控制的無菌環(huán)境下，應(yīng)用人工培養(yǎng)基創(chuàng)造適宜的培養(yǎng)條件，使其生長、分化并成長為完整植株的過程。也稱為離體培養(yǎng)或試管培養(yǎng)。愈傷組織的形成的過程？8、愈傷組織的定義和特點？愈傷組織〔Callus〕：離體的植物器官、組織或細胞，在培養(yǎng)一段時間以后，通過細胞分裂，形成一種高度液泡化、無定形狀態(tài)、由薄壁細胞組成的排列疏松的組織。細胞分裂快，結(jié)構(gòu)疏松，顏色淺而透明9、闡述外植體的成苗途徑。10、植物組織培養(yǎng)常用的培養(yǎng)基及各自的特點？據(jù)其營養(yǎng)水平分：根本培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基據(jù)其態(tài)相分：固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基據(jù)其作用分：誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基據(jù)培養(yǎng)物的培養(yǎng)過程分：初代培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基組織培養(yǎng)中常用的培養(yǎng)基主要有：MS、White、N6、B5、Heller、Nitsch、Miller、KM-8P培養(yǎng)基種類固體培養(yǎng)基：加凝固劑〔多為瓊脂〕的培養(yǎng)基；液體培養(yǎng)基：不加凝固劑的培養(yǎng)基。初代培養(yǎng)基：用來第一次接種從植物體上別離下來的外植體的培養(yǎng)基。繼代培養(yǎng)基：用來接種繼初代培養(yǎng)之后的培養(yǎng)物的培養(yǎng)基。根本培養(yǎng)基：只含有機和無機成分，但不包括糖、激素和復(fù)雜有機添加物等。完全培養(yǎng)基：根本培養(yǎng)基的根底上，根據(jù)試驗的不同需要，附加一些物質(zhì)，如植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和其它復(fù)雜有機附加物等。2、培養(yǎng)基的特點MS培養(yǎng)基--大量元素。特點：無機鹽的濃度高，具有高含量的氮、鉀，尤其硝酸鹽的用量很大，同時還含有一定數(shù)量的銨鹽，這使得它營養(yǎng)豐富，不需要添加更多的有機附加物，就能滿足植物組織對礦質(zhì)營養(yǎng)的要求，有加速愈傷組織和培養(yǎng)物生長的作用，當培養(yǎng)物久不轉(zhuǎn)移時仍可維持其生存。White(WH)培養(yǎng)基。特點：無機鹽濃度較低。它的使用也很廣泛，無論是生根培養(yǎng)還是胚胎培養(yǎng)或一般組織培養(yǎng)都有很好的效果。N6培養(yǎng)基。特點：KNO3和(NH4)2SO4含量高，不含鉬。目前在國內(nèi)已廣泛應(yīng)用于小麥、水稻及其他植物的花粉和花藥培養(yǎng)和組織培養(yǎng)。B5培養(yǎng)基。特點：含有較低的銨鹽，較高的硝酸鹽和鹽酸硫胺素。銨鹽可能對不少培養(yǎng)物的生長有抑制作用，但它適合于有些植物如雙子葉植物特別是木本植物的生長。KM-8P培養(yǎng)基。特點：特點是有機成分較復(fù)雜,它包括了幾乎所有的單糖和維生素、呼吸代謝中的主要有機酸。主要用于原生質(zhì)體培養(yǎng)。固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基：固體培養(yǎng)基：使用簡便，一般用于組織、愈傷組織、短枝、莖尖等材料的培養(yǎng)。特別適合植物的快速繁殖。缺點：一塊外植體只能局部接觸培養(yǎng)基，不能浸沒在培養(yǎng)基中，結(jié)果培養(yǎng)物上下部因接受養(yǎng)分不勻而形成差異，不易使細胞群體保持一致。液體培養(yǎng)基(不加瓊脂)：提供比擬均勻的營養(yǎng)，而且細胞的增殖速度快，一般用于細胞，原生質(zhì)體的培養(yǎng)，也可用于愈傷組織的培養(yǎng)，胚狀體等材料的繼代培養(yǎng)。11、植物組織培養(yǎng)室需要控制的條件。溫度：大多數(shù)植物組織培養(yǎng)溫度在23~27℃之間。低于15℃時培養(yǎng)，植物組織會表現(xiàn)生長停止，高于35℃時對植物生長不利。不同植物培養(yǎng)的適溫不同。月季是25~27℃、番茄是28℃。溫度不僅影響植物組織培養(yǎng)育苗的生長速度，也影響其分化增殖以及器官建成等發(fā)育進程。如煙草芽的形成以28℃為最好，在12℃以下，33℃以上形成率皆最低。光照：主要表現(xiàn)在光照強度、時間長短、光照質(zhì)量等。有的材料培養(yǎng)需要光，有的那么不需光；不同的植物所需的光照強度也不一樣。一般1000-5000Lx/12-16h/天。濕度：濕度影響包括培養(yǎng)容器內(nèi)濕度和環(huán)境濕度。容器內(nèi)濕度水平主要受培養(yǎng)基水分含量和封口材料的影響。封口材料直接影響容器內(nèi)濕度情況。封閉性差的材料易導(dǎo)致培養(yǎng)基枯燥；封閉性高的封口材料易引起透氣性不好。濕度過低會使培養(yǎng)基喪失大量水分，導(dǎo)致培養(yǎng)基各種成分濃度的改變和滲透壓的升高，進而影響組織培養(yǎng)的正常進行。濕度過高時，易引起棉塞長霉，造成污染。氣體環(huán)境:氧氣是組織培養(yǎng)中必需的因素，瓶蓋封閉時要考慮通氣問題，可用附有濾氣膜的封口材料。通氣最好的是棉塞封閉瓶口，但棉塞易使培養(yǎng)基枯燥，夏季易引起污染。固體培養(yǎng)基可加進活性炭來增加通氣度，以利于發(fā)根。培養(yǎng)室要經(jīng)常換氣，改善室內(nèi)的通氣狀況。液體振蕩培養(yǎng)時，要考慮振蕩的次數(shù)、振幅等，同時要考慮容器的類型、培養(yǎng)基等。植物組織培養(yǎng)最常用的C源、常用的激素及其作用和濃度？蔗糖2%~5%作為植物生長發(fā)育所需的營養(yǎng)物質(zhì)和調(diào)節(jié)培養(yǎng)基中的滲透壓生長素誘導(dǎo)細胞分裂和根的分化細胞分裂素促進細胞分裂和由愈傷組織形成器官，分化不定芽赤霉素刺激在培養(yǎng)中形成的不定胚發(fā)育成小植株油菜素內(nèi)酯促進伸長提高植物內(nèi)源生長素乙烯促進RNA和蛋白質(zhì)合成和使細胞膜透性增加脫落酸抑制外植體形成體細胞胚狀體13、植物組織培養(yǎng)中培養(yǎng)基配制過程中應(yīng)注意的環(huán)節(jié)？培養(yǎng)基的配制：準備工作、母液的配置和保存、培養(yǎng)基配置、培養(yǎng)基的滅菌配制母液時要用蒸餾水或重蒸餾水。藥品應(yīng)選取等級較高的化學(xué)純或分析純。各種藥品要充分溶解再依次混合.配制時注意一些離子之間易發(fā)生沉淀(如Ca2+和S042-)。鐵鹽容易發(fā)生沉淀，需單獨配制。培養(yǎng)基的配制考前須知：1、溶解特征：大量元素易沉淀；

2、標簽〔濃度、日期〕

3、保存期：發(fā)現(xiàn)沉淀不能用。培養(yǎng)基的配制步驟：1、將配制好的母液按順序排列，2、列表計算各母液用量3、先取適量的蒸餾水放入容器，再依次參加母液4、參加肌醇和蔗糖，定容后調(diào)pH5、參加瓊脂，煮開至完全溶解6、分裝到組培容器7、封口，貼標簽植物組織培養(yǎng)的理論依據(jù)？植物細胞全能性組織培養(yǎng)的生理依據(jù)：激素〔植物生長調(diào)節(jié)劑〕調(diào)控15、植物組織培養(yǎng)技術(shù)在目前農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的應(yīng)用？1育種上的應(yīng)用:單倍體育種：快速純化個體，縮短育種年限，提高育種效率等作用。遠緣雜交：克服雜交不親和性，用于植物的遠緣雜交；體細胞雜交；胚珠培養(yǎng)。體細胞變異的應(yīng)用：果樹苗木等。單細胞突變體的篩選：抗性育種。2種子繁育與生產(chǎn)：快速繁育：蘭花、香蕉、甘蔗、咖啡等。獲得脫毒植株，提高種性：病毒可通過維管束傳遞，莖尖細胞分裂很旺，幾乎沒有病毒，如土豆。人工種子：不受氣候影響，苜蓿、芹菜、胡蘿卜等。3植物產(chǎn)品的工廠化生產(chǎn)：喜樹的喜樹堿〔抗癌〕，人參皂苷，香料植物的香油精。4種質(zhì)資源的保存：對于難于產(chǎn)生種子，種子不易保存，或珍稀的植物。番薯的塊根保存很難，可以取其莖尖進行組織培養(yǎng)，進行保存。簡述植物組織無菌培養(yǎng)的一般步驟？外植體外表消毒：將外植體置于有螺絲蓋的玻璃瓶中,注入含有幾滴活化劑的濃度適當?shù)南疽?使材料完全浸沒在消毒液中,蓋上蓋,把玻璃瓶置入超凈工作臺。消毒期間搖動2-3次,使消毒液充分接觸植物組織。消毒處理后,翻開瓶蓋,倒出消毒液,注入適量的無菌蒸餾水,再蓋上蓋,搖動數(shù)次,將水倒掉如此重復(fù)3～4次。將材料取出,置于一個已經(jīng)滅菌的培養(yǎng)皿中。器械消毒：將所要使用的器械(如解剖刀、鑷子、剪刀等)置入95%乙醇中,取出后于酒精燈火焰上灼燒,待冷卻后即可使用。所有操作器械需使用一次,消毒一次。用這些消過毒的將已經(jīng)過外表消毒的材料切取或剝?nèi)∵m當?shù)耐庵搀w。將培養(yǎng)容器的蓋或塞子翻開,將外植體接種到培養(yǎng)基上,如果使用的是玻璃培養(yǎng)容器,把瓶口置酒精燈火餡上烘烤數(shù)秒鐘,然后迅速用瓶蓋或瓶塞封嚴。17、與整體植物相比，植物離體組織有哪些特點？整體植物不同的器官具有明顯的分工，只要有水和無機鹽就可以完成整個生命過程。離體組織與植株沒有了物質(zhì)、能量和信息的交流，從而：

1、生長發(fā)育不受植株的控制，可以脫離原來的發(fā)育路線；

2、得不到生長發(fā)育所需要的培養(yǎng)，從自養(yǎng)變成異樣。

3、所需要的營養(yǎng)與活體組織所需要的營養(yǎng)具有很大的差異。能量來源〔碳源〕；有機成分、激素等。18、簡述激素在植物組織離體培養(yǎng)過程中的作用？19、常用的PCR技術(shù)有哪些？20、PCR反響的條件？21、PCR反響中關(guān)鍵的試劑有哪些？22、什么是離體授粉？23、柯斯質(zhì)粒？24、載體的種類以及載體應(yīng)具備的特性？25、質(zhì)粒載體構(gòu)建的根本原那么，以及質(zhì)粒載體的一般生物學(xué)特性？26、噬菌體的特征？什么是溶菌周期，什么是溶源周期？27、同源基因的共抑制效應(yīng)？28、基因克隆操作中常用的工具酶種類？29、基因克隆的本質(zhì)以及基因克隆主要包括哪些內(nèi)容？30、簡述植物基因組文庫構(gòu)建的一般步驟以及構(gòu)建原那么？31、什么是轉(zhuǎn)基因育種？轉(zhuǎn)基因育種有哪些特點？32、理想的植物受體系統(tǒng)應(yīng)符合的條件33、根據(jù)你的理解詳細說明農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)〔包括土壤農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒轉(zhuǎn)化系統(tǒng)和發(fā)根農(nóng)桿菌Ri質(zhì)粒轉(zhuǎn)化系統(tǒng)〕有哪些優(yōu)點？34、以水稻為例詳細介紹農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)的具體操過程?35、外源基因整合到植物染色體上的主要的分子鑒定方法？36、轉(zhuǎn)基因檢測可以從哪些方面進行檢測，具體的檢測原理是什么？植物基因工程理論上的三大發(fā)現(xiàn)：DNA為遺傳信息的攜帶者。DNA的雙螺旋模型和半保存不不連續(xù)復(fù)制機制。中心法那么和操縱子模型。植物基因工程技術(shù)上的三大創(chuàng)造：DNA體外切割與連接技術(shù)?；蚬こ梯d體的使用。DNA分析技術(shù)：電泳、測序、雜交技術(shù)?；蚬こ痰亩x：用人工的方法，從不同生物中提取外源基因及載體DNA，經(jīng)過體外切割、拼接和重組，然后采取某種方法，把重組后的帶有外源基因的載體DNA引入植物細胞，并使其在植物細胞內(nèi)進行復(fù)制和表達，以到達預(yù)期改變受體植物細胞遺傳特性的目的。它的核心是重組DNA技術(shù)。也稱：遺傳工程，基因操作，基因克隆，分子克隆?；蚬こ痰纳a(chǎn)應(yīng)用：克服遠緣雜交〔有性雜交〕的困難。1、使基因在動物、植物，微生物不同生物系統(tǒng)中傳遞。2、快速、定向的獲取人類所需要的生物新類型。細胞工程的定義：利用細胞培養(yǎng)、細胞融合等細胞生物學(xué)方法對細胞進行改造，使細胞按人類需要生產(chǎn)有用的產(chǎn)品，或者遺傳物質(zhì)，從而培育新的生物類型。包括：細胞雜交技術(shù)、單克隆抗體、細胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)。細胞工程的應(yīng)用--原生質(zhì)體融合植物組織培養(yǎng)室設(shè)計：準備室〔培養(yǎng)基室〕接種室〔無菌操作〕培養(yǎng)室〔控制溫光〕細胞室〔細胞研究〕培養(yǎng)基的成分:水、無機鹽、有機成分、植物生長調(diào)節(jié)劑、碳源、凝固劑及其它附加物無機營養(yǎng)無機物中有16種是植物必須的，即C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S、Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl。I雖然不是植物必需元素，但幾乎所有的培養(yǎng)基中都添加I。植物所需要的濃度大于0.5mmol/L的元素為大量元素，小于0.5mmol/L的元素為微量元素。缺氮：表現(xiàn)出一種很注目的花色素苷的顏色，愈傷組織不能形成導(dǎo)管；

缺鉀或磷：細胞過度生長，形成層組織減退；

缺硫：愈傷組織褪綠；

缺鐵：細胞分裂停止；

缺硼：細胞分裂停滯，細胞伸長；而缺錳銅那么會影響細胞伸長。有機成分--氨基酸氨基酸是蛋白質(zhì)的組成成分，也是一種有機氮化合物。常用的有甘氨酸、谷氨酸、精氨酸、絲氨酸、丙氨酸、半胱氨酸以及多種氨基酸的混合物〔如水解酪蛋白、水解乳蛋白〕等。有機氮作為培養(yǎng)基中的惟一氮源時，離體組織生長不良，只有在含有無機氮的情況下，氨基酸類物質(zhì)才有較好的效果。有機成分--維生素類能明顯地促進離體組織的生長。培養(yǎng)基中的維生素主要是B族維生素，如硫胺素〔維生素B1〕、吡哆醇〔維生素B6〕、煙酸〔維生素B3，又稱維生素PP〕、泛酸〔維生素B5〕、生物素〔維生素H〕、鈷胺素〔維生素Bl2〕、葉酸〔維生素B11〕、抗壞血酸〔維生素C〕等。有機成分--天然有機物有機附加物包括有些成分尚不清楚的天然提取物，如椰乳(CM)、香蕉泥、番茄汁(TJ)、馬鈴薯泥、蘋果汁、生梨汁、西瓜汁、酵母提取液〔YE〕、麥芽浸出物〔ME〕等。有機成分--肌醇肌醇：環(huán)己六醇，幫助活性物質(zhì)作用

其他：單核苷酸等。3、碳源糖在植物組織培養(yǎng)中是不可缺少的。它不但作為離體組織賴以生長的碳源，且還能使培養(yǎng)基維持一定的滲透壓〔一般培養(yǎng)基滲透壓維持在1.5～4.1MPa〕。滲透壓對細胞的增殖和胚狀體的形成都有十清楚顯的影響。一般多用蔗糖調(diào)節(jié)滲透壓，其濃度為1％～5％，也可用麥芽糖、葡萄糖或果糖等。葡萄糖或果糖價格稍貴，但可防褐化。麥芽糖價格貴，細胞培養(yǎng)時用。4、激素激素對愈傷組織的誘導(dǎo)、器官分化及植株再生具有重要的作用.培養(yǎng)基中的關(guān)鍵物質(zhì):主要包括生長素、細胞分裂素、赤霉素〔GA3〕、脫落酸〔ABA〕、乙烯。激素--生長素生長素能影響植物莖和節(jié)間的伸長、向性、頂端優(yōu)勢、葉片脫落、生根等現(xiàn)象。離體培養(yǎng)中的作用：誘導(dǎo)愈傷組織的產(chǎn)生；促進細胞脫分化；促進細胞的伸長；促進生根。常用的生長素有吲哚乙酸〔IAA〕、吲哚丁酸〔IBA〕、萘乙酸〔NAA〕、2，4—二氯苯氧乙酸〔2，4－D〕。IAA、NAA、IBA、2,4-D之類生長素，可先用少量0.1N氫氧化鈉或乙醇溶解，然后再定容到所需要的體積。激素--細胞分裂素細胞分裂素影響植物細胞分裂、頂端優(yōu)勢的變化和莖的分化等。培養(yǎng)基中參加細胞分裂素，主要是為促進細胞分裂和由愈傷組織形成器官，分化不定芽。由于這類化合物有助于解除頂端優(yōu)勢對腋芽的抑制作用，可用于莖的增殖。細胞分裂素有天然的和人工合成的。常用的有玉米素〔ZT〕、芐氨基腺嘌呤〔6－BA〕、沖動素〔KT〕等。KT、BA等細胞分裂素那么可用少量0.1N鹽酸加熱溶解，然后加水定容。激素比當配制的培養(yǎng)基中生長素/細胞分裂素的比例高時那么有利于生根；生長素/細胞分裂素的比例低時那么有利于生芽；假設(shè)兩者濃度相當時，既不利于生根，也不利于生芽，而是愈傷組織的產(chǎn)生占優(yōu)勢。其它的一些激素：赤霉素，植物組織培養(yǎng)中常用的是GA3。脫落酸，在植物組織培養(yǎng)中對培養(yǎng)物有間接的抑制作用，它可抑制外植體形成體細胞胚狀體。水楊酸〔阿司匹林〕，能抑制ABA的形成，有利于胚狀體的形成。5、凝固劑在固體培養(yǎng)時，瓊脂是使用最方便、最好的凝固劑。瓊脂是一種高分子的碳水化合物，以色白、透明、潔凈的為佳，僅溶解于熱水，冷后〔40℃以下〕即凝固為固體狀的凝膠。瓊脂的凝固能力除與原料、廠家的加工方式等有關(guān)外，還與高壓滅菌時的溫度、時間、pH等因素有關(guān)，長時間的高溫會使凝固能力下降，過酸、過堿也會使瓊脂發(fā)生水解，喪失凝固能力。瓊脂糖：原生質(zhì)體培養(yǎng)時用。Phytogel：新型凝固劑。6、水植物組織培養(yǎng)所必需培養(yǎng)基的配制必須用超純水細胞培養(yǎng)主要用蒸餾水活性炭〔AC〕活性炭參加培養(yǎng)基中的目的主要是利用其吸附能力，減少一些有害物質(zhì)的影響，如防止酚類物質(zhì)污染而引起組織褐化死亡。這在蘭花組織培養(yǎng)中效果更明顯?；钚蕴渴古囵B(yǎng)基變黑，有利于某些植物生根?；钚蕴繉ξ镔|(zhì)吸附無選擇性，因此使用時應(yīng)慎重考慮，不能過量，一般用量為0.1％～0.5％。活性炭對形態(tài)發(fā)生和器官形成有良好的效應(yīng)。培養(yǎng)基的pH培養(yǎng)基的pH因培養(yǎng)材料不同而異，大多數(shù)植物都要求在pH5.6～5.8的條件進行組織培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基的pH不是一成不變的，往往隨著培養(yǎng)基的水分和養(yǎng)料的消耗，pH會發(fā)生一些變化。高壓滅菌會降低培養(yǎng)基中的pH。配制培養(yǎng)基時，常用0.lmol／L的NaOH和0.lmol／L的HCl來調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH。pH的上下會影響瓊脂的凝固能力：pH>6培養(yǎng)基變硬，pH<5瓊脂不易凝固培養(yǎng)基的滅菌和存儲：培養(yǎng)基一般采用濕熱滅菌法，壓力108kPa、溫度為121℃時，維持20min。某些激素〔如GA3、ZT、IAA〕、抗生素以及某些維生素等，遇熱時容易分解，不能進行高壓滅菌。當使用這類化合物時，可選擇使用孔徑為0.45μm或更小的細菌濾膜過濾滅菌。培養(yǎng)基一般需冷卻到60℃以下〔恰在瓊脂凝固之前〕再參加這些遇熱分解化合物。將濾膜安在過濾器里面進行高壓滅菌。過濾器的滅菌溫度不應(yīng)超過121℃。植物組培培養(yǎng)中污染的來源：〔1)培養(yǎng)容器；〔2〕培養(yǎng)根本身；〔3〕外植體；〔4〕接種室的環(huán)境；〔5〕操作用的器械；〔6〕培養(yǎng)室的環(huán)境?？梢酝ㄟ^滅菌措施防止或減少污染源常用的滅菌方法：物理滅菌：高溫高壓滅菌、干熱滅菌(烘燒和灼燒)、濕熱滅菌、輻射(紫外線、超聲波、微波)滅菌、過濾滅菌?；瘜W(xué)滅菌：酒精、升汞、過氧化氫、高錳酸鉀、次氯酸鈉、抗生素等化學(xué)藥品處理，根據(jù)工作中的不同材料不同目的適中選用。包括：熏蒸滅菌、噴霧滅菌、消毒液滅菌。高壓滅菌通常會使培養(yǎng)基中的蔗糖水解為單糖，從而改變培養(yǎng)基的滲透壓。培養(yǎng)基中的鐵在高壓滅菌時會催化蔗糖水解為葡萄糖和果糖。培養(yǎng)基值小于5.5，其水解量更多，培養(yǎng)基中含有活性炭時，高壓下蔗糖水解大大增強。滅菌考前須知：1、GA3、維生素、蔗糖等的降解問題；2、灼燒問題；3、紫外燈的危害；4、消毒劑對皮膚的損害。脫分化：指高度分化的植物器官、組織或細胞，在離體培養(yǎng)條件下經(jīng)過屢次細胞分裂逐漸失去原來的結(jié)構(gòu)、功能和分化狀態(tài)，形成無組織結(jié)構(gòu)的愈傷組織或細胞團的過程。再分化：指離體培養(yǎng)的植物細胞和組織可以由脫分化狀態(tài)重新進行分化，形成另一種或幾種類型的細胞、組織、器官，甚至形成完整植株。植物組織培養(yǎng)步驟：植物組織培養(yǎng)的類型：愈傷組織培養(yǎng):最為常見的組織培養(yǎng)器官培養(yǎng):根、莖、葉、花等胚培養(yǎng)：胚、胚乳、珠心、子房、細胞培養(yǎng)和原生質(zhì)體培養(yǎng)：懸浮培養(yǎng)、單細胞培養(yǎng)外植體消毒的一般步驟：1、預(yù)處理，先對植物組織進行修整，去掉不需要的局部，將準備使用的植物材料在流水中沖洗干凈。經(jīng)過預(yù)處理的植物材料，其外表仍有很多細菌和真菌。2、將外植體置于無菌的玻璃瓶中，參加75%的酒精溶液浸泡材料10S左右。倒出酒精，用無菌水沖洗一次。3、將適當濃度的消毒液(0.1%升汞或2%次氯酸鈉)，使材料完全浸沒在消毒液中，蓋上瓶蓋，把玻璃瓶置入超凈工作臺滅菌一定時間。在滅菌期間須搖動玻璃瓶2-3次。4、消毒處理后，將消毒液倒出，注入適量的無菌蒸餾水漂洗，將水倒掉，重復(fù)3-4次。外植體培養(yǎng)固體培養(yǎng)法：用瓊脂或植物膠固化培養(yǎng)基來培養(yǎng)植物材料的方法。該方法操作簡單，通氣好，外植體固定，利于愈傷組織的誘導(dǎo)、分化，應(yīng)用最廣；但養(yǎng)分分布不均，生長速度不均衡，有毒物質(zhì)積累，并常有褐化中毒現(xiàn)象發(fā)生。液體培養(yǎng)法：即用不加固化劑的液體培養(yǎng)基培養(yǎng)植物材料的方法。一般用于愈傷組織的繁殖、分散；主要用于別離單細胞和產(chǎn)生體細胞無性系，生產(chǎn)次生代謝物質(zhì)。由于液體中氧氣含量較少，所以通常需要通過攪動或振動培養(yǎng)液的方法以確保氧氣的供應(yīng)，優(yōu)點：生長繁殖快、均勻，工廠化生產(chǎn)缺點：需要搖床，頻繁繼代，不利分化。初代培養(yǎng)旨在獲得無菌材料和無性繁殖系。即接種某種外植體后，最初的幾代培養(yǎng)。初代培養(yǎng)時，常用誘導(dǎo)或分化培養(yǎng)基，即培養(yǎng)基中含有較多的細胞分裂素和少量的生長素。初代培養(yǎng)建立的無性繁殖系包括：莖梢、芽叢、胚狀體和原球莖等。根據(jù)初代培養(yǎng)時發(fā)育的方向可分為:頂芽和腋芽的發(fā)育、不定芽的發(fā)育、體細胞胚狀體的發(fā)生與發(fā)育。繼代培養(yǎng)是繼初代培養(yǎng)之后的連續(xù)數(shù)代的擴繁培養(yǎng)過程，外植體或愈傷組織在培養(yǎng)基上生長一段時間以后，由于營養(yǎng)物質(zhì)枯竭，水分散失，以及代謝產(chǎn)物的積累，必須轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上培養(yǎng)。繼代培養(yǎng)的后代是按幾何級數(shù)增加的過程。生根培養(yǎng)是使無根苗生根的過程，目的是使生出的不定根濃密而粗壯。生根培養(yǎng)可采用1/2或者1/4MS培養(yǎng)基，全部去掉細胞分裂素，并參加適量的生長素(NAA、IBA等)?？焖俜敝持谐醮囵B(yǎng)只是一個必經(jīng)的過程，