2016生物技術(shù)制藥復(fù)習(xí)重點附答案

第一章緒論

生物技術(shù)：（Biotechnology）以生命科學(xué)為基礎(chǔ)，利用生物體（或生物組織、細(xì)胞及其組分）的特性和功能，設(shè)計構(gòu)建

具有預(yù)期性狀的新物種或新品系，并與工程相結(jié)合，利用這樣的新物種（品系）進(jìn)行加工生產(chǎn)，為社會提供商品和服

務(wù)的一個綜合性技術(shù)體系。

生物技術(shù)藥物：采用DNA重組技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)或其它生物新技術(shù)研制的蛋白質(zhì)、治療性抗體或核酸類藥物。

生物技術(shù)制藥：就是利用基因工程技術(shù)、細(xì)胞工程技術(shù)、微生物工程技術(shù)、酶工程技術(shù)、蛋白質(zhì)工程技術(shù)、分

子生物學(xué)技術(shù)等來研究和開發(fā)藥物，用來診斷、治療和預(yù)防疾病的發(fā)生。

生物技術(shù)制藥的特征：⑴高技術(shù)⑵高投入⑶長周期⑷高風(fēng)險⑸高收益

1.生物技術(shù)發(fā)展的不同階段的技術(shù)特征和代表產(chǎn)品

（1）傳統(tǒng)生物技術(shù)的技術(shù)特征是釀造技術(shù)，所得產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)較為簡單，屬于微生物的初級代謝產(chǎn)物。代表產(chǎn)

品如酒、醋、乙醇，乳酸，檸檬酸等。（2）近代生物技術(shù)階段的技術(shù)特征是微生物發(fā)酵技術(shù)，所得產(chǎn)品的類

型多，不但有菌體的初級代謝產(chǎn)物、次級代謝產(chǎn)物，還有生物轉(zhuǎn)化和酶反應(yīng)等的產(chǎn)品，生產(chǎn)技術(shù)要求高、規(guī)模

巨大，技術(shù)發(fā)展速度快。代表產(chǎn)品有青霉素，鏈霉素，紅霉素等抗生素，氨基酸，工業(yè)防制劑等。（3）現(xiàn)代

生物技術(shù)階段的技術(shù)特征是DNA重組技術(shù)。所得的產(chǎn)品結(jié)構(gòu)復(fù)雜，治療針對性強(qiáng)，療效高，不足之處是穩(wěn)定

性差，分離純化工藝更復(fù)雜。代表產(chǎn)品有胰島素，干擾素和疫苗等。

2.生物技術(shù)制藥分為哪些類型？

生物技術(shù)制藥分為四大類：a應(yīng)用重組DNA技術(shù)（包括基因工程技術(shù)、蛋白質(zhì)工程技術(shù)）制造的基因重組多肽，

蛋白質(zhì)類治療劑。b基因藥物，如基因治療劑，基因疫苗，反義藥物和核酶等c來自動物、植物和微生物的天

然生物藥物d合成與部分合成的生物藥物

3.生物技術(shù)制藥具有什么特征？

（1）分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜（2）具有種屬特異性（3）治療針對性強(qiáng)，療效高（4）穩(wěn)定性差（5）基因穩(wěn)定性（6）

免疫原性（7）體內(nèi)的半衰期短（8）受體效應(yīng)（9）多效性（10）檢驗的特殊性

生物藥物功能用途分類：⑴治療藥物，⑵預(yù)防藥物⑶診斷藥物。

第二章基因工程制藥

基因工程技術(shù)：基因工程技術(shù)又叫基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù)。將重組對象的目的基因插入載體，拼接后轉(zhuǎn)入新的

宿主細(xì)胞，構(gòu)建成工程菌；實現(xiàn)遺傳物質(zhì)的重新組合，并使目的基因在工程菌內(nèi)進(jìn)行復(fù)制和表達(dá)的技術(shù)。

基因工程藥物：利用DNA重組技術(shù)生產(chǎn)出來的藥物被稱為基因工程藥物

限制性核酸內(nèi)切酶：是一類能夠識別雙鏈DNA分子中的某種特定核甘酸序列，并由此切割雙鏈DNA雙鏈結(jié)構(gòu)的核酸內(nèi)

切酶。它們主要是從原核生物中分離純化出來的。

編碼區(qū)：是基因功能發(fā)揮的結(jié)構(gòu)基因（或稱功能基因），調(diào)控序列和啟動子起調(diào)控啟動作用，終止的非編碼區(qū)屬于調(diào)控

基因。

凝膠過濾層析：是以多孔性凝膠填料為固定相，按分子大小對溶液中各組分進(jìn)行分離的液相層析方法。

親和層析：是利用固定化配體與目的蛋白質(zhì)之間非常特異的生物親和力進(jìn)行吸附，這種結(jié)合既是特異的，又是可逆的,

改變條件可以使結(jié)合解除。

疏水層析：是利用蛋白質(zhì)表面的疏水區(qū)域和固定相上疏水基團(tuán)之間的相互作用力差異，對蛋白組分進(jìn)行分離的層析方

法。

離子交換層析：是依據(jù)流動相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進(jìn)行可逆交換時結(jié)合力大小的差別而進(jìn)行分離的一

種層析方法.

融合蛋白：由一條短的原核多肽和真核蛋白結(jié)合在一起的，稱為融合蛋白。

包涵體：是無定形的蛋白質(zhì)的聚集，不被任何膜所包圍。它是致密的不溶性蛋白和RNA的凝聚體，包含大部分的表達(dá)

蛋白。

1.利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)藥物的優(yōu)點

答：1）大量生產(chǎn)過去難以獲得的生理活性蛋白和多肽，為臨床使用提供有效的保障；2）可以提供足夠數(shù)量的生理活性

物質(zhì)，以便對其生理、生化和結(jié)構(gòu)進(jìn)行深入的研究，從而擴(kuò)大這些物質(zhì)的應(yīng)用范圍；3）可以發(fā)現(xiàn)、挖掘更多的內(nèi)源性

生理活性物質(zhì)；4）內(nèi)源生理活性物質(zhì)在作為藥物使用時存在的不足之處，可通過基因工程和蛋白質(zhì)工程進(jìn)行改造和去

除；5）可獲得新型化合物，擴(kuò)大藥物篩選來源。

2.基因工程藥物制造的主要步驟

答：目的基因的克??；構(gòu)建DNA重組體；將DNA重組體轉(zhuǎn)移入宿主菌構(gòu)建工程菌；工程菌的發(fā)酵；外源基因表達(dá)產(chǎn)物

的分離純化；產(chǎn)品的檢驗等。

3.化學(xué)合成目的基因的先決條件

答：較小的蛋白質(zhì)或多肽的編碼基因可以采用人工化學(xué)合成，其先決條件：已知目的基因的核昔酸序列或蛋白質(zhì)的氨

基酸序列，按相應(yīng)的密碼子推導(dǎo)出DNA的堿基序列。

4.人工合成基因的限制有哪些

答：1）不能合成太長的基因，50~60個堿基對；2）人工合成堿基對時，遺傳密碼的簡并會為選擇密碼帶來很大的困難；

3）費(fèi)用高。

5.基因工程宿主菌應(yīng)滿足那些要求？目前應(yīng)用最廣泛的宿主菌有哪些

答：1）容易獲得較高濃度的細(xì)胞；2）能利用廉價易得的原料；3）不致病、不產(chǎn)生內(nèi)毒素；4）發(fā)熱量低，需氧低，適當(dāng)

的發(fā)酵溫度和細(xì)胞形態(tài)；5）容易進(jìn)行代謝調(diào)控；6）容易進(jìn)行DNA重組技術(shù)操作；7）產(chǎn)物的產(chǎn)量、產(chǎn)率高，產(chǎn)物容易提

取。

宿主菌可分兩大類：1）原核細(xì)胞：大腸桿菌、枯草芽抱桿菌、鏈霉菌；2）真核細(xì)胞：酵母菌、絲狀真菌、哺乳動物細(xì)

胞。

6.表達(dá)載體須具備哪些條件？常用載體有咖些

答：（1）能夠獨立的復(fù)制；有復(fù)制起點，有嚴(yán)緊型和松弛型，嚴(yán)緊型伴隨宿主染色體的復(fù)制而復(fù)制，在宿主細(xì)胞中拷

貝少（1-3）；松弛型的復(fù)制可不依賴與宿主細(xì)胞，在宿主細(xì)胞中拷貝多達(dá)3000個。（2）具有靈活的克隆位點和方便

的篩選標(biāo)記，以利于外源基因的克隆、鑒定和篩選；（3）應(yīng)具有很強(qiáng)的啟動子，能為大腸桿菌的RAN聚合酶所識別；（4）

應(yīng)具有阻遏子（5）應(yīng)具有很強(qiáng)的終止子（6）所產(chǎn)生的mRNA必須具有翻譯的起始信號。

常用載體有：1）細(xì)菌細(xì)胞的質(zhì)粒。2）入噬菌體載體。

7.真核基因在大腸桿菌中的表達(dá)形式

答：有三種形式：（1）融合蛋白的表達(dá)形式。（由一段短的原核多肽和真核蛋白結(jié)合在一起的蛋白質(zhì)，稱為融合蛋白。）

（2）非融合蛋白的表達(dá)形式。（3）分泌型表達(dá)形式。

（1）、融合蛋白

融合蛋白是將外源基因融合至某種特定原核結(jié)構(gòu)基因下游，表達(dá)的外源蛋白N端或者C端含有原核多肽。

優(yōu)點：表達(dá)效率提高，有利于純化

缺點：影響蛋白質(zhì)天然構(gòu)象

（2）、非融合蛋白

非融合蛋白是指表達(dá)的外源蛋白N端或者C端不含有任何大腸桿菌的多肽序列。

優(yōu)點：能夠較好地保持原來的蛋白活性；

缺點：容易被蛋白醐破壞，氨基末端常常帶有甲硫氨酸，在人體內(nèi)用藥時可能會引起人體免疫反應(yīng)。

（3）、分泌型

將外源基因融合至編碼原核蛋白序列下游而實現(xiàn)。

8.影響目的的基因在大腸桿菌中友達(dá)的因素有哪些？

（1）外源基因的拷貝數(shù)

（2）外源基因的表達(dá)效率：啟動子的強(qiáng)度、核糖體結(jié)合位點的有效性、SD序列和起始密碼ATG的間距、密碼子的組成

等都會不同程度地影響外源基因的表達(dá)效率。（3）表達(dá)產(chǎn)物的穩(wěn)定性：①組建融合蛋白；②利用大腸桿菌的信號肽

或真核多肽中自身的信號肽；③采用位點突變的方法；④選用蛋白的缺陷型大腸桿菌為宿主細(xì)胞，可能會減弱表達(dá)產(chǎn)

物的降解。

（4）細(xì)胞的代謝負(fù)荷：外源基因的表達(dá)產(chǎn)物屬于異己物質(zhì)，并可能對宿主細(xì)胞有毒性。調(diào)節(jié)表達(dá)物質(zhì)的積累與細(xì)胞的

生長和代謝之間的平衡有利于外源基因的高效表達(dá)。

另外通過將細(xì)胞的生長和外源基因的表達(dá)分成兩個階段，或?qū)⑺拗骷?xì)胞的生長與重組質(zhì)粒的復(fù)制分開兩種手段也可

以減輕細(xì)胞代謝的負(fù)荷。形成不溶性的包含體可以降低表達(dá)產(chǎn)物對宿主細(xì)胞的毒害作用

（5）工程菌的培養(yǎng)條件：除宿主、載體和克隆基因三者之間的關(guān)系影響外源基因的高水平表達(dá)外，培養(yǎng)條件亦是非常

值得研究的因素。

9.對山基因重組技術(shù)所獲得的蛋白質(zhì)藥物進(jìn)行鑒定時，常做哪些項目分析？

基因工程藥物質(zhì)量控制主要包括以下幾點：產(chǎn)品的鑒別，純度，活性，安全性，穩(wěn)定性和一致性

項目分析主要有：1）生物活性測定2）理化性質(zhì)鑒定3）蛋白質(zhì)含量鑒定4）蛋白質(zhì)純度分析5）雜志檢測6）穩(wěn)定性考察

7）產(chǎn)品一致性的保證

10離子交換層析的原理？

答：當(dāng)離子交換劑處于水溶液中時，活性離子可以從活性基因上解離下來，在基質(zhì)骨架與溶液間自由遷移，并可與溶

液間的同性離子，因與活性基因的化學(xué)親和力不同而發(fā)生交換，即發(fā)生離子交換作用。

11.疏水層析的基本原理？

答：蛋白質(zhì)表面多由親水基團(tuán)組成，也有一些疏水性較強(qiáng)的疏水區(qū)。在高鹽濃度時;蛋白質(zhì)表面疏水部位的水化層

被破壞，暴露出疏水部位，疏水作用增強(qiáng)，與固定相上的疏水基團(tuán)產(chǎn)生疏水性作用而被吸附；鹽濃度降低時蛋白質(zhì)疏

水作用減弱，目的蛋白質(zhì)被逐步洗脫下來。

12.親和層析的基本原理？

答：通過將具有親和力的兩個分子中一個固定在不溶性基質(zhì)（也稱載體）上，利用分子間親和力的特異性和可逆性，

對另一個分子進(jìn)行分離純化。（被固定在基質(zhì)上的分子稱為配體，配體與基質(zhì)共價結(jié)合，構(gòu)成親和層析的固定相，稱為

親和吸附劑。）

13.凝膠過濾層析的優(yōu)缺點？

答：優(yōu)點：設(shè)備簡單、操作方便、樣品回收率高、實驗重復(fù)性好、不改變樣品生物學(xué)活性。

缺點：分辨率較低，尤其是相對分子質(zhì)量相近的分子之間。

第三章動物細(xì)胞工程制藥

貼壁培養(yǎng)：細(xì)胞貼附在某種基質(zhì)上細(xì)胞才能生長繁殖的培養(yǎng)方法。大多數(shù)哺乳動物細(xì)胞的培養(yǎng)必須采用這種方法。

貼壁細(xì)胞：生長須有貼附的支持物表面，自身分泌或培養(yǎng)基中提供的貼附因子才能在該表面上生長。兩種形態(tài)：成纖

維細(xì)胞型和上皮細(xì)胞型。

天然培養(yǎng)基：在細(xì)胞培養(yǎng)的早期階段使用的培養(yǎng)基，主要為來自天然的材料如血漿凝塊、血清、淋巴液、胚胎浸液以

及羊水、腹水等。

懸浮培養(yǎng)：細(xì)胞自由地懸浮在培養(yǎng)基內(nèi)生長繁殖的培養(yǎng)方法。

原代細(xì)胞：是直接取自動物組織、器官，經(jīng)過粉碎、消化而獲得的細(xì)胞懸液。

轉(zhuǎn)化細(xì)胞系：失去了正常細(xì)胞的特點，可以無限增殖。

1.動物細(xì)胞的生理特點？

答：1）細(xì)胞分裂周期長（動物細(xì)胞分裂所需時間一般為12~48h。）。2）細(xì)胞生長需貼附于基質(zhì)，有接觸抑制現(xiàn)象。

3）二倍體細(xì)胞壽命有限（異倍體細(xì)胞系壽命長）。4）對生長環(huán)境要求敏感。5）培養(yǎng)基要求高。6）合成的蛋白質(zhì)有修飾。

2.動物細(xì)胞培養(yǎng)時加入血清的作用機(jī)制？

答：提供基本營養(yǎng)物質(zhì)；提供激素和各種生長因子；提供貼附因子和伸展因子；對培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用；

提供PH\緩沖物質(zhì)，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基PH；影響培養(yǎng)系統(tǒng)中的某些物理特性如：剪切力、黏度、滲透壓和氣體傳遞速度等。

3.體外培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)的基本條件:（1）絕對無菌操作；（2）足夠的營養(yǎng)供應(yīng)，排除有害物質(zhì)包括極其微量的離子摻入;

（3）適量氧氣供應(yīng)；（4）隨時清除細(xì)胞代謝中產(chǎn)生的有害產(chǎn)物；（5）有良好的適于生存外界環(huán)境，包括pH、滲透壓和

離子濃度等；（6）及時分種，保持合適的細(xì)胞密度。

4.動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的方法有哪些？

答：根據(jù)生產(chǎn)實際：貼壁培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng)和貼壁-懸浮培養(yǎng)（假懸浮培養(yǎng)）。

5.動物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的優(yōu)缺點？

答：優(yōu)點：適用的細(xì)胞較廣；容易更換培養(yǎng)液：容易采用灌流培養(yǎng)的方式使細(xì)胞達(dá)到高密度。

缺點：操作比較麻煩；培養(yǎng)條件不易均一；傳質(zhì)、傳氧較差；不能有效監(jiān)測細(xì)胞的生長；需要合適的貼附材料和足夠

的面積；擴(kuò)大培養(yǎng)比較困難，投資大。

6.動物細(xì)胞貼壁培養(yǎng)的優(yōu)缺點？

答：優(yōu)點：操作簡單，培養(yǎng)的體積大、成本低；培養(yǎng)條件比較均一；傳質(zhì)、傳氧較好；傳代時無需消化分散；容易擴(kuò)

大培養(yǎng)規(guī)模。缺點：由于細(xì)胞體積較小，難采用灌流培養(yǎng)，細(xì)胞密度較低

7.動物細(xì)胞包埋或微囊培養(yǎng)的優(yōu)點？

答：(1)、包埋在在體內(nèi)的細(xì)胞可以獲得保護(hù)，避免了剪切力的損害。(2)、可以獲得較高的細(xì)胞密度，一般都在10.7~10~8

個/ml以上。(3)、可以使產(chǎn)品濃縮在微囊內(nèi)，利于下游產(chǎn)物的純化。(4)、可以采用多種生物反應(yīng)器進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)。

8.離體培養(yǎng)的動物細(xì)胞分為哪些類型?

分為三類：1)貼壁細(xì)胞：細(xì)胞生長必須有可以貼附的支持物表面，細(xì)胞依靠自身分泌的培養(yǎng)基中提供的貼附因子才能

在該表面上生長增殖。2)懸浮細(xì)胞：細(xì)胞的生長不依賴支持物表面，可在培養(yǎng)液中懸浮狀態(tài)生長3)兼性貼壁細(xì)胞：既

可貼附于支持物表面生長，又在懸浮生長。

9.常用的培養(yǎng)動物細(xì)胞的培養(yǎng)基的種類有哪些？

(1)天然培養(yǎng)基(2)合成培養(yǎng)基(3)無血清培養(yǎng)基

10.動物細(xì)胞生物反應(yīng)器必須具備哪些基本要求？有哪些類型？特點是什么？

動物細(xì)胞反應(yīng)器具備的基本要求：

(1)制造生物反應(yīng)器所采用的一切材料，尤其是與培養(yǎng)基，細(xì)胞直接接觸的材料，對細(xì)胞必須是無毒性的。

(2)生物反應(yīng)器的結(jié)構(gòu)必須使之具有良好的傳質(zhì)、傳熱和混合的性能

(3)密封性良好，可避免一切外采的不需要的微生物污染。

(4)對培養(yǎng)基環(huán)境中多種物理化學(xué)參數(shù)能自動檢測和調(diào)節(jié)控制，控制的精度高，而且能保持環(huán)境質(zhì)量的均一。

(5)可長期連續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)，這對于培養(yǎng)動物細(xì)胞的生物反應(yīng)器顯得尤其重要。

(6)容器加工制造時要求內(nèi)面光滑，無死角，以減少細(xì)胞或微生物的沉積。

(7)拆裝，連結(jié)和清潔方便，能耐高壓蒸汽消毒，便于操作維修

(8)設(shè)備成本盡可能低。

反應(yīng)器類型及特點：

(1)攪拌罐式生物反應(yīng)器：主要用于是懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，微載體培養(yǎng)，微囊和巨載體培養(yǎng)以及結(jié)團(tuán)培養(yǎng)

(2)氣升式生物反應(yīng)器：氣體通過裝在罐底的噴管進(jìn)入反應(yīng)器的導(dǎo)流管，致使該部液體的密度小于導(dǎo)流管外部的

液體形成循環(huán)流。

(3)中空纖維式生物反應(yīng)器：占地空間小，產(chǎn)品產(chǎn)量、質(zhì)量高，生產(chǎn)成本低，不能重復(fù)使用，不能耐高壓蒸汽滅菌,

需用環(huán)氧乙烷或其它消毒劑滅菌，難以取樣檢測。

(4)透析袋或膜式生物反應(yīng)器：可使細(xì)胞達(dá)到高密度，又可隨意組合進(jìn)行操作，對產(chǎn)品進(jìn)行濃縮純化。

(5)固定床或流化床生物反應(yīng)器：結(jié)構(gòu)簡單，裝填材料易

11.無血清培養(yǎng)基的優(yōu)點如下：

①提高了細(xì)胞培養(yǎng)的可重復(fù)性，避免，避免了由于血清批之間差異的影響；②減少了由血清帶來的病毒、真菌和支原

體等微生物污染的危險；③供應(yīng)充足、穩(wěn)定；④細(xì)胞產(chǎn)品容易純化；⑤避免了血清中某些因素對有些細(xì)胞的毒性；⑥

減少了血清中蛋白對某些生物測定的干擾，便于實驗結(jié)果的分析。

12.細(xì)胞的兩步培養(yǎng)法各有什么目的？

答：第一步采用適合細(xì)胞生長的培養(yǎng)基——生長培養(yǎng)基；第二步采用適合次級代謝產(chǎn)物合成的培養(yǎng)基——生產(chǎn)培養(yǎng)基。

前者是為了實現(xiàn)細(xì)胞的高生產(chǎn)率，后者獲得一定含量的硝酸鹽和磷酸鹽，并含有較低的糖分或較少的碳源，得到最佳

生長。

13.融合細(xì)胞系：用人工方法使離體的兩個不同的細(xì)胞融合,從而培養(yǎng)出一系列有其特性的雜種細(xì)胞和新的物種。

細(xì)胞融合是指兩個或兩個以上的細(xì)胞合并成一個細(xì)胞的過程。附：細(xì)胞系(cellline)指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)首次傳

代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。

14.常用融合方法：

⑴仙臺病毒融合法

⑵聚乙二醇融合法：

⑶電融合法

第三章抗體工程制藥

抗體：由B細(xì)胞接受刺激后分化為漿細(xì)胞產(chǎn)生的能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白

單克隆抗體：只識別一種表位（抗原決定簇）的高純度抗體，一般來自單個B淋巴細(xì)胞的克隆或一個雜交瘤細(xì)胞的克隆。

人-鼠嵌合抗體：嵌合抗體（chimericatibody）是最早制備成功的基因工程抗體。它是山鼠源性抗體的V區(qū)基因

與人抗體的C區(qū)基因拼接為嵌合基因，然后插入載體，轉(zhuǎn)染骨髓瘤組織表達(dá)的抗體分子。因其減少了鼠源成分，從而

降低了鼠源性抗體引起的不良反應(yīng)，并有助于提高療效。

雙功能抗體：將識別效應(yīng)細(xì)胞的抗體和識別靶細(xì)胞的抗體聯(lián)結(jié)在一起，制成雙功能性抗體，稱為雙特異性抗體。如由

識別腫瘤抗原的抗體和識別細(xì)胞毒性免疫效應(yīng)細(xì)胞（CTL細(xì)胞、NK細(xì)胞、LAK細(xì)胞）表面分子的抗體（CD3抗體

或CD16抗體）制成的雙特異性抗體，有利于免疫效應(yīng)細(xì)胞發(fā)揮抗腫瘤作用。

L什么是單克隆抗體？單克隆抗體有哪些不足？

單克隆抗體：是針對一個抗原決定簇的抗體，又是單一的B淋巴細(xì)胞克隆產(chǎn)生的抗體。

不足：1）單克隆抗體均是鼠源性抗體，應(yīng)用于人體內(nèi)可產(chǎn)生人抗鼠抗體，加速了排斥反應(yīng)，在人體內(nèi)半衰期只有5-6h,

難以維持有效藥物作用靶組織時間。2）完整的抗體分子，即Ig的相對分子質(zhì)量過大，難以穿透實體腫瘤組織，達(dá)不到

有效治療濃度。

2.免疫導(dǎo)向療法為什么沒有成功？從哪些方面可以對單克隆抗體進(jìn)行改造？

答：阻礙：A.單克隆抗體的均是鼠源性抗體，應(yīng)用于人體可內(nèi)可產(chǎn)生人鼠源抗體，加速了排斥反應(yīng)，在人體內(nèi)的半衰

期只有5-6h,難以維持有效藥物的作用靶組織時間。

B.完整的抗體份子Ig分子質(zhì)量過大，難以穿透實體腫瘤組織，達(dá)不到有效的治療濃度。

改造：A.降低單克隆抗體的免疫原性。B.降低單克隆抗體的相對分子質(zhì)量

（1）人-鼠嵌合抗體：由人抗體的恒定區(qū)與鼠源單抗的可變區(qū)融合得到。

（2）改型抗體：把鼠抗體的CDR序列移植到人抗體的可變區(qū)內(nèi)，所得到的抗體

（3）小分子抗體小分子抗體包括：Fab、Fv或ScFv、單域抗體、最小識別單位。這些部位都可以改造。

2.單克隆抗體的制備流程及方法

流程：將有用抗原免疫過的淋巴細(xì)胞與骨髓瘤用PEG進(jìn)行雜交融合。采用與骨髓瘤供體同?品系的動物進(jìn)行免疫。

①把融合的細(xì)胞在HAT培養(yǎng)基上選擇出來。

②將選擇后的整合細(xì)胞分散，培養(yǎng)成雜交瘤細(xì)胞。

③使能產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞克隆化。

④雜交瘤細(xì)胞抗體的性狀的鑒定。

⑤單克隆抗體的大量制備，一是在培養(yǎng)液中大更是繁殖，二是注入純系小鼠腹腔中大量繁殖。

?單克隆抗體的純化。

3.動物體內(nèi)誘生法制備單克隆抗體的優(yōu)缺點

答：優(yōu)點：簡單.，比較經(jīng)濟(jì)，所得單克隆抗體量較多且效價較高，可有效地保存雜交瘤細(xì)胞株和分分離已污染的雜菌

的雜交瘤細(xì)胞株。

缺點：小鼠腹水中混有來自小鼠的多種雜蛋白，給純化帶來難度。

4.鼠源性單克隆抗體改造后的抗體類型及各自的特點？

答：①人-鼠嵌合抗體：保持鼠源性單克隆抗體的抗原結(jié)合特異性，但對人免疫原性大幅下降了。

②改型抗體：鼠源性單克隆抗體的互補(bǔ)決定區(qū)（CDR區(qū)）序列替換人的Ig分子中的CDR序列。基本消除免疫原性。

③小分子抗體：

Fab將Ig的重鏈在餃鏈區(qū)的C端裂解，獲得兩個完全相同的抗原結(jié)合片段。才較鏈區(qū)和二硫鍵相連。有完整的生雙

價抗體活性，相對分子質(zhì)量減少為三分之一，排斥反應(yīng)也降低，人體內(nèi)很穩(wěn)定。

Fv含有L鏈和Ed鏈-半的N端可變區(qū)。有完整的抗體相似的結(jié)能力，相對分子質(zhì)量減少為六分之一。

④單鏈抗體scFv：單鏈易改造；體內(nèi)半衰期短，免疫原性低；穩(wěn)定性低，重輕鏈之間的分子間作用力弱；功能單一，

只能與一種抗原特異性結(jié)合；親和力低，穩(wěn)定性差，體內(nèi)清除過快?

⑤單域抗體：只由一個CDR構(gòu)成。

5.基因工程抗體有哪些類型？其特性和制備方法有什么不同？

基因工程抗體主要包括嵌合抗體、人源化抗體、完全人源抗體、單鏈抗體、雙特異性抗體等。

（1）嵌合抗體嵌合抗體（chimericatibody）是最早制備成功的基因工程抗體。它是由鼠源性抗體的V區(qū)基因

與人抗體的C區(qū)基因拼接為嵌合基因，然后插入載體，轉(zhuǎn)染骨髓瘤組織表達(dá)的抗體分子。因其減少了鼠源成分，從而

降低了鼠源性抗體引起的不良反應(yīng)，并有助于提高療效。

（2）人源性抗體是將人抗體的CDR代之以鼠源性單克隆抗體的CDR,山此形成的抗體，鼠源性只占極少，稱為人

源化抗體。

（3）完全人源化抗體采用基因敲除術(shù)將小鼠Ig基因敲除，代之以人Ig基因，然后用Ag免疫小鼠，再經(jīng)雜交瘤

技術(shù)即可產(chǎn)生大量完全人源化抗體。

（4）單鏈抗體是將Ig的H鏈和L鏈的V區(qū)基因相連，轉(zhuǎn)染大腸桿菌表達(dá)的抗體分子，又稱單鏈FV（single

chainfragmentofvariableregion,sFv）。SFv穿透力強(qiáng)，易于進(jìn)入局部組織發(fā)揮作用。

（5）雙特異性抗體將識別效應(yīng)細(xì)胞的抗體和識別靶細(xì)胞的抗體聯(lián)結(jié)在一起，制成雙功能性抗體，稱為雙特異性抗體。

如由識別腫瘤抗原的抗體和識別細(xì)胞毒性免疫效應(yīng)細(xì)胞（CTL細(xì)胞、NK細(xì)胞、LAK細(xì)胞）表面分子的抗體（CD3抗

體或CD16抗體）制成的雙特異性抗體，有利于免疫效應(yīng)細(xì)胞發(fā)揮抗腫瘤作用。

6.單克隆抗體制備的過程？有什么意義？

原理：B淋巴細(xì)胞在抗原的刺激下，能夠分化、增殖形成具有針對這種抗原分泌特異性抗體的能力。B細(xì)胞的這種能力

和量是有限的，不可能持續(xù)分化增殖下去，因此產(chǎn)生免疫球蛋白的能力也是極其微小的?將這種B細(xì)胞與非分泌型的

骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞，再進(jìn)一步克隆化，這種克隆化的雜交瘤細(xì)胞是既具有瘤的無限生長的能力，又具有

產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞的能力，將這種克隆化的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)或注入小鼠體內(nèi)即可獲得大量的高效價、

單一的特異性抗體。這種技術(shù)即稱為單克隆抗體技術(shù)。

過程：1）免疫脾細(xì)胞的制備制備單克隆抗體的動物多采用純系Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質(zhì)。免

疫方法同一般血清的制備，也可采用脾內(nèi)直接免疫法。

2）骨髓瘤細(xì)胞的培養(yǎng)與篩選在融合前，骨髓瘤細(xì)胞應(yīng)經(jīng)過含8-AG的培養(yǎng)基篩選，防止細(xì)胞發(fā)生突變恢復(fù)HGPRT的

活性（恢復(fù)HGPRT的活性的細(xì)胞不能在含8-AG的培養(yǎng)基中存活）。骨髓瘤細(xì)胞用10%小牛血清的培養(yǎng)液在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中

培養(yǎng)，融合前24h換液一次，使骨髓瘤細(xì)胞處于對數(shù)生長期。

3）細(xì)胞融合的關(guān)鍵:a技術(shù)上的誤差常常導(dǎo)致融合的失敗。例如，供者淋巴細(xì)胞沒有查到免疫應(yīng)答。這必然要失敗的。

b融合試驗最大的失敗原因是污染，融合成功的關(guān)鍵是提供一個干凈的環(huán)境，以及適宜的無菌操作技術(shù)。

4）陽性克隆的篩選應(yīng)盡早進(jìn)行。通常在融合后10天作第一次檢測，過早容易出現(xiàn)假陽性。檢測方法應(yīng)靈敏、準(zhǔn)確、

而且簡便快速。具體應(yīng)用的方法應(yīng)根據(jù)抗原的性質(zhì)，以及所需單克隆抗體的功能進(jìn)行選擇。常用的方法有R1A法、ELISA

法和免疫熒光法等。其中ELISA法最簡便，RIA法最準(zhǔn)確。陽性克隆的篩選應(yīng)進(jìn)行多次，均陽性時才確定為陽性克隆進(jìn)

行擴(kuò)增。

5）克隆化克隆化的目的是為了獲得單一細(xì)胞系的群體?？寺』瘧?yīng)盡早進(jìn)行并反復(fù)篩選。這是因為初期的雜交瘤細(xì)胞

是不穩(wěn)定的，有丟失染色體的傾向。反復(fù)克隆化后可獲得穩(wěn)定的雜交瘤細(xì)胞株.

克隆化的方法很多，而最常用的是有限稀釋法。

（D有限稀釋法：將對數(shù)生長期的雜交瘤細(xì)胞用培養(yǎng)液作一定的稀釋后，按每孔1個細(xì)胞接種在培養(yǎng)皿中，細(xì)胞增值

后成為單克隆細(xì)胞系。第一次克隆化時加一定量的飼養(yǎng)細(xì)胞。由于第一次克隆化生長的細(xì)胞不能保證單克隆化，所以

為獲得穩(wěn)定的單克隆細(xì)胞株需經(jīng)2?3次的再克隆才成。應(yīng)該注意的是，每次克隆化過程中所有有意義的細(xì)胞都應(yīng)冷凍

保存，以便重復(fù)檢查，避免丟失有意義的細(xì)胞。（2）軟瓊脂法：將雜交瘤細(xì)胞稀釋到一定密度，然后與瓊脂混懸。在

瓊脂中的細(xì)胞不能自山移動，彼此互不相混，從而達(dá)到單細(xì)胞培養(yǎng)的目的。但此法不如有限稀釋法好。（4）熒光激光

細(xì)胞分類法：用抗原包被的熒光乳膠微球標(biāo)記雜交瘤細(xì)胞，然后根據(jù)抗原與雜交瘤細(xì)胞結(jié)合的特異性選出細(xì)胞，并進(jìn)

行單細(xì)胞培養(yǎng).

6）細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇

7）大規(guī)模單克隆抗體的制備選出的陽性細(xì)胞株應(yīng)及早進(jìn)行抗體制備，因為融合細(xì)胞隨培養(yǎng)時間延長，發(fā)生污染、

染包體丟失和細(xì)胞死亡的機(jī)率增加。抗體制備有兩種方法。?是增量培養(yǎng)法，即將雜交瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)，在培養(yǎng)液

中分離單克隆抗體。該法需用特殊的儀器設(shè)備，?般應(yīng)用無血清培養(yǎng)基，以利于單克隆抗體的濃縮和純化。最普遍采

用的是小鼠腹腔接種法。選用BALB/c小鼠或其親代小鼠，先用降植烷或液體石蠟行小鼠腹腔注射，一周后將雜交瘤細(xì)

胞接種到小鼠腹腔中去。通常在接種一周后即有明顯的腹水產(chǎn)生，每只小鼠可收集5?10ml的腹水，有時甚至超過40ml。

該法制備的腹水抗體含量高，每毫升可達(dá)數(shù)毫克甚至數(shù)卜毫克水平。此外，腹水中的雜蛋白也較少，便于抗體的純化。

7.HAT篩選雜交瘤細(xì)胞的原理（書或PPT,必考）。

第四章酶工程制藥

酶化學(xué)修飾：通過主鏈有切割、剪切和側(cè)鏈基團(tuán)有化學(xué)修飾對酶蛋白進(jìn)行分子改造，以改變其理化性質(zhì)和生物活性。

這種應(yīng)用化學(xué)方法對酶分子施行種種“手術(shù)”的技術(shù)稱為酶分子的化學(xué)修飾。

酶工程：是酶學(xué)和工程學(xué)相互滲透發(fā)展而成的一門新的技術(shù)科學(xué)，他是從運(yùn)用的目的出發(fā)研究酶.運(yùn)用酶的特異性功能

并通過工程化將相應(yīng)原料轉(zhuǎn)化成有用物質(zhì)的技術(shù)。

固定化酶：是指限制或固定于特定空間位置的酶，具體來說，是指經(jīng)物理或化學(xué)方法處理，使酶變成不易隨水流失即

運(yùn)動受到限制，而又能發(fā)揮催化作用的酶制劑，制備固定化酶的過程稱為酶的固定化。

固定化細(xì)胞：將細(xì)胞限制或定位于特定空間位置的方法稱為細(xì)胞固定化技術(shù)，被限制或定位于特定空間位置的細(xì)胞稱

為固定化細(xì)胞。

1.優(yōu)良的產(chǎn)酶菌株應(yīng)滿足哪些要求：

答：1）繁殖快，產(chǎn)酶量高，能的性質(zhì)應(yīng)符合使用要求，最好是產(chǎn)生胞外酶的菌2）不是致病菌，在系統(tǒng)發(fā)育上與病原

體無關(guān)，也不產(chǎn)生有毒物質(zhì)3）產(chǎn)酶性能穩(wěn)定，不易變異退化，不易感染噬菌體4）能利用廉價的原料，發(fā)酵周期短，

易于培養(yǎng)

2.固定化酶的優(yōu)點：

答：D可以較長時間內(nèi)多次使用，醒的穩(wěn)定性高。2）反應(yīng)后，醒與底物和產(chǎn)物易于分開，易于純化，產(chǎn)品質(zhì)量高。

3）反應(yīng)條件易于控制。4）的的利用率高?5）比水溶性醐更適合于多酶反應(yīng)。

3.物理吸附法制備固定化酶的優(yōu)缺點：

優(yōu)點：操作簡單，可選用不同電荷和不同形狀的載體，固定化過程和純化過程同時實現(xiàn)，酶失活后載體仍可以再生。

缺點：最適吸附酶量五規(guī)律可循，對不同的載體和不同酶的吸附條件不同，吸附量和酶活力不一定成平行關(guān)系，同時

載體與載體之間結(jié)合力不強(qiáng)，酶易于脫落，導(dǎo)致前活力下降并污染產(chǎn)物。

4.共價結(jié)合法制備固定化酶的優(yōu)點和缺點；

答：能以共價鍵結(jié)合于載體上即將的分子上非活性部位功能團(tuán)與載體表面反應(yīng)基團(tuán)進(jìn)行共價結(jié)合的方法。

優(yōu)點：酶與載體結(jié)合牢固，穩(wěn)定性好。

缺點：條件苛刻，操作復(fù)雜，而且采用了比較強(qiáng)烈的反應(yīng)條件，會引起酶蛋白的高級結(jié)構(gòu)的變化，破壞活性中心，所

以往往不能得到比活高的固定化酶，甚至底物的專一性等酶的性質(zhì)也會發(fā)生變化。

5.固定化細(xì)胞的優(yōu)點和缺點：

優(yōu)點：a.無需進(jìn)行酶的分離純化。b.細(xì)胞保持酶的原始狀態(tài)，固定化過程中酶的回收率高。c.細(xì)胞內(nèi)酶比固定化酶穩(wěn)

定性更高。d.細(xì)胞內(nèi)醐的輔能因子可以自動更生。e.細(xì)胞本身含多的體系，可催化?系列反應(yīng)。f抗污染能力強(qiáng).

缺點：a.利用的僅是細(xì)胞內(nèi)酶，而細(xì)胞多種酶的存在，會形成不需要的副產(chǎn)物。b.細(xì)胞膜.細(xì)胞壁和載體都存在著擴(kuò)散

限制作用。c.我體形成的孔隙大小影響高分子底物的通透性。

第四章發(fā)酵工程制藥

發(fā)酵工程：又稱為微生物工程，是利用微生物制造工業(yè)原料與工業(yè)產(chǎn)品，并提供服務(wù)的技術(shù)。

誘變劑：能誘發(fā)基因突變并使突變率提高到超過自發(fā)突變水平的物理化學(xué)因子都稱為誘變劑。

補(bǔ)料分批培養(yǎng)：補(bǔ)料分批培養(yǎng)是將種子接入發(fā)酵反應(yīng)器中進(jìn)行培養(yǎng)，經(jīng)過一段時間，間歇或連續(xù)地補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基，

使菌體進(jìn)一步生長的培養(yǎng)方法。

分批式操作：將細(xì)胞和培養(yǎng)基一次性加入反應(yīng)器內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，細(xì)胞不斷增長，產(chǎn)物不斷形成，最后將培養(yǎng)基取出，培

養(yǎng)結(jié)束的方法。

連續(xù)培養(yǎng)：連續(xù)培養(yǎng)是將種子接入發(fā)酵反應(yīng)器中，攪拌培養(yǎng)至菌體濃度達(dá)到?定程度后，開動進(jìn)料和出料蠕動泵，以

一定稀釋率進(jìn)行不間斷培養(yǎng)。

質(zhì)粒的分裂不穩(wěn)定：通常將質(zhì)粒不穩(wěn)定性分為兩類:一類是結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定性,也就是質(zhì)粒山于堿基突變、缺失、插入等引

起的遺傳信息變化;另一類是分離不穩(wěn)定性,指在細(xì)胞分裂過程中質(zhì)粒不能分配到子代細(xì)胞中，從而使部分子代細(xì)胞不帶

質(zhì)粒（即P-細(xì)胞）。在連續(xù)和分批培養(yǎng)過程中均能觀察到此兩類現(xiàn)象發(fā)生。一般情況下具有質(zhì)粒的細(xì)胞（即P+細(xì)胞）需要

合成較多的DNA、RNA和蛋白質(zhì)，因此其比生長速率低于P-細(xì)胞，從而P-細(xì)胞一旦形成能較快速地生長繁殖并占據(jù)培養(yǎng)

物中的大多數(shù)。

1.微生物發(fā)酵主要有哪些方式？各具有什么特點？

（-）分批發(fā)酵：是將全部物料一次投入到反應(yīng)器中，經(jīng)滅菌，接種，經(jīng)過若干時間的發(fā)酵后再將發(fā)酵液一次放出的

操作方式。

特點：（1）對溫度的要求低，工藝操作簡單；（2）比較容易解決雜菌污染和菌種退化等問題；（3）對營養(yǎng)物的利用效

率較高，產(chǎn)物濃度也比連續(xù)發(fā)酵要高（4）人力、物力、動力消耗較大；（5）生產(chǎn)周期較長（6）生產(chǎn)效率低

（二）補(bǔ)料分批發(fā)酵：指在微生物分批發(fā)酵過程中,以某種方式向發(fā)酵系統(tǒng)中補(bǔ)加一定物料，但并不連續(xù)地向外放出

發(fā)酵液的發(fā)酵技術(shù)，是介于分批發(fā)酵和連續(xù)發(fā)酵之間的一種發(fā)酵技術(shù).

特點：1）可以解除底物的抑制、產(chǎn)物的反饋抑制和分解代謝物阻遏作用。2）可以減少菌體生長量，提高有用產(chǎn)物的

轉(zhuǎn)化率；3）菌種的變異及雜菌污染問題易控制；4）便于自動化控制

（三）連續(xù)發(fā)酵：是指以一定的速度向發(fā)酵罐內(nèi)添加新鮮培養(yǎng)基，同時以相同速度流出培養(yǎng)液，從而使發(fā)酵罐內(nèi)的液量維

持恒定的發(fā)酵過程。

特點：1）設(shè)備的體積可以減?。?）操作時間短，總的操作管理方便，便于自動化控制；3）產(chǎn)物穩(wěn)定，人力物力節(jié)省,

生產(chǎn)費(fèi)用低4）對設(shè)備的合理性和加料設(shè)備的精確性要求甚高；5）營養(yǎng)成分的利用較分批發(fā)酵差，產(chǎn)物濃度比分批發(fā)

酵低6）雜菌污染的機(jī)會較多，菌種易因變異而發(fā)生退化。

2.影響發(fā)酵的主要因素有哪些？如何對?發(fā)酵過程進(jìn)行控制？

（1）溫度溫度對微生物的影響是多方面的。首先，溫度影響酶的活性。在最適溫度范圍內(nèi)，隨著溫度的升高，菌體

生長和代謝加快，發(fā)酵反應(yīng)的速率加快。當(dāng)超過最適溫度范圍以后，隨著溫度的升高，酶很快失活，菌體衰老，發(fā)酵

周期縮短，產(chǎn)量降低。溫度也能影響生物合成的途徑。例如，金色鏈霉菌在30℃以下時，合成金霉素的能力較強(qiáng)，但

當(dāng)溫度超過35C時，則只合成四環(huán)素而不合成金霉素。此外，溫度還會影響發(fā)酵液的物理性質(zhì)，以及菌種對■營養(yǎng)物質(zhì)

的分解吸收等。因此，要保證正常的發(fā)酵過程，就需維持最適溫度。但菌體生長和產(chǎn)物合成所需的最適溫度不一定相

同。如灰色鏈霉菌的最適生長溫度是37℃,但產(chǎn)生抗生素的最適溫度是28℃。通常，必須通過實驗來確定不同菌種各

發(fā)酵階段的最適溫度，采取分段控制。

（2）pHpH能夠影響酶的活性，以及細(xì)胞膜的帶電荷狀況。細(xì)胞膜的帶電荷狀況如果發(fā)生變化，膜的透性也會改變,

從而有可能影響微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收及代謝產(chǎn)物的分泌。此外，pH還會影響培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的分解等。因此，

應(yīng)控制發(fā)酵液的pH。但不同菌種生長階段和合成產(chǎn)物階段的最適pH往往不同，需要分別加以控制。

在發(fā)酵過程中，隨著菌體對營養(yǎng)物質(zhì)的利用和代謝產(chǎn)物的積累，發(fā)酵液的pH必然發(fā)生變化。如當(dāng)尿素被分解時，發(fā)酵

液中的NH+4濃度就會上升，pH也隨之上升。在工業(yè)生產(chǎn)上，常采用在發(fā)酵液中添加維持pH的緩沖系統(tǒng)，或通過中

間補(bǔ)加氨水、尿素、碳酸鏤或碳酸鈣來控制pH。目前，國內(nèi)己研制出檢測發(fā)酵過程的pH電極，用于連續(xù)測定和記錄

pH變化，并由pH控制器調(diào)節(jié)酸、堿的加入量。

（3）溶解氧氧的供應(yīng)對需氧發(fā)酵來說，是一個關(guān)鍵因素。從葡萄糖氧化的需氧量來看，1mol的葡萄糖徹底氧化分

解，需6moi的氧；當(dāng)糖用于合成代謝產(chǎn)物時，1mol葡萄糖約需1.9mol的氧。因此，好氧型微生物對氧的需要量是

很大的，但在發(fā)酵過程中菌種只能利用發(fā)酵液中的溶解氧，然而氧很難溶于水。在101.32kPa.25℃時，氧在水中的溶

解度為0.26mmol/L。在同樣條件下，氧在發(fā)酵液中的溶解度僅為0.20mmol/L。而且隨著溫度的升高，溶解度還會下

降。因此，必須向發(fā)酵液中連續(xù)補(bǔ)充大量的氧，經(jīng)攪拌，可以提高氧在發(fā)酵液中的溶解度。

（4）泡沫在發(fā)酵過程中，通氣攪拌、微生物的代謝過程及培養(yǎng)基中某些成分的分解等，都有可能產(chǎn)生泡沫?發(fā)酵過

程中產(chǎn)生一定數(shù)量的泡沫是正?，F(xiàn)象，但過多的持久性泡沫對發(fā)酵是不利的。因為泡沫會占據(jù)發(fā)酵罐的容積，影響通

氣和攪拌的正常進(jìn)行，甚至導(dǎo)致代謝異常，因而必須消除泡沫。常用的消泡沫措施有兩類：一類是安裝消泡沫擋板，

通過強(qiáng)烈的機(jī)械振蕩，促使泡沫破裂；另一類是使用消泡沫劑。

（5）營養(yǎng)物質(zhì)的濃度發(fā)酵液中各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度，特別是碳氮比、無機(jī)鹽和維生素的濃度，會直接影響菌體的生

長和代謝產(chǎn)物的積累。如在谷氨酸發(fā)酵中，NH+4濃度的變化，會影響代謝途徑（見谷氨酸發(fā)酵）。因此，在發(fā)酵過程中，

也應(yīng)根據(jù)具體情況進(jìn)行控制。

3.發(fā)酵工程發(fā)展大體上可分為四個階段，簡述各階段的技術(shù)內(nèi)容，代表人物和主要產(chǎn)品

第一階段：20世紀(jì)以前時期，人類利用傳統(tǒng)的微生物發(fā)酵技術(shù)來生產(chǎn)葡萄酒、酒、醋，醬、奶酪等，生產(chǎn)規(guī)模小，主

要憑經(jīng)驗控制生產(chǎn)過程。代表人物巴斯德。

第二階段，1900-1940年期間，微生物培養(yǎng)技術(shù)不斷進(jìn)步，有力的推動了發(fā)酵工業(yè)的快速發(fā)展，能排除培養(yǎng)體系中的有

害微生物，能進(jìn)行大規(guī)模的工業(yè)生產(chǎn)發(fā)酵過程。代表產(chǎn)品是丙酮、丁醇，甘油，乳酸，檸檬酸等。

第三階段，發(fā)酵工業(yè)大發(fā)展時期。能對微生物進(jìn)行深層培養(yǎng)，可采用純種發(fā)酵，無菌操作技術(shù)成熟，生產(chǎn)規(guī)模巨大，

生產(chǎn)過程能有效控制，相應(yīng)的采用較復(fù)雜的工藝和設(shè)備。代表產(chǎn)品如青霉素，鏈霉素，紅霉素，氨基酸等。代表人物

是發(fā)現(xiàn)青霉素的英國