生物安全第三等級(jí)實(shí)驗(yàn)室操作程序

生物平安第三等級(jí)實(shí)驗(yàn)室人員訓(xùn)練實(shí)驗(yàn)室操作程序95.3.20版ChainofInfectionPersonalProtectiveEquipmentImmunizationSurveillancePracticesEquipment/FacilityBarriersBarriersPrimarybarrier(主要屏障)：直接隔離人員與對(duì)人員有害的生物材料之防護(hù)設(shè)備Personalprotectiveequipment:口罩、防護(hù)衣、手套Laboratoryequipment:平安櫃、排氣櫃SecondaryBarrier(二級(jí)屏障〕環(huán)境設(shè)施與工程設(shè)計(jì)前室、獨(dú)立HVAC系統(tǒng)RiskGroupRGIndividualriskCommunityriskProphylaxisortreatment1NoorverylowNoorverylow2ModerateLowUsuallyavailable3HighLowUsuallyavailable4HighHighUsuallyNoneChainofInfectionPersonalProtectiveEquipmentImmunizationSurveillancePracticesEquipment/FacilityRoutesofinfectionMouthaerosolspillhandWound/cutEyePracticesMouthaerosolspillhandEyeWound/cutMouthSkinThroughacut,staborsplashWashimmediatelywithwaterfor5min.Eyesflushwithwateronlyfor10min.Cuts,stabscrubareatobleedRemoveglovesorclothingifrequiredReportaccidentandseekmedicalaidandfollowupSkinPenetratingrubberseptumvialsOpeningpop-toptubesSonicatingtissuesPipettingliquidsCentrifugationVortexingormixingliquidSplash/spillAerosolsEyePipettingPluggedwithcottonMixcarefullyClosetomediumCentrifugationClosedcontainersIntheBSCifneededWellbalancedVortexingCoverspillusingpaperPouronbleachWaitfor10min.PlacespilledmaterialintobiohazardbagCleanupSpillHandPersonalProtectiveEquipmentPersonalProtectiveEquipmentMouthaerosolspillhandEyeWound/cutHand

SafetyglassesSafetygogglesFaceshieldsEyeOvergownShoecoversSurgicalscrubsuitsLaboratorycoatPlasticapronsHeadcoverSkinAerosolsrespirator/maskHalffacerespiratorandcartridgesFullfacerespiratorandsuppliedairBiosafetyCabinetHEPAFilter

“Highefficiencyparticulateair〞filterTrapsparticulatesonlyEfficiencyof99.97%withparticles0.3umBSCClassIClassIITypeA170%ofairrecirculatedwithinthecabinet30%exhaustedthroughtheHEPAfilterintotheroomTypeA2(B3)SameasA1exceptairisexhaustedoutsidethroughathimbleunitconnection.TypeB130%ofairrecirculated70%exhaustedthroughtheHEPAfiltertotheoutsideviaahardductTypeB2NorecirculationwithtotalexhaustthroughtheHEPAfiltertotheoutsideviaahardductClassIITypeB1ClassIITypeB2ClassIITypeB3ClassIIIFacilities設(shè)施動(dòng)線：阻隔區(qū)與平安區(qū)充足的標(biāo)示MSDS,Sign氣流方向:cleantodirty負(fù)壓InOutGowningDeGowningChangeCloth人員動(dòng)線(FlowofPersonnel)TBP2TBP2-A染色區(qū)TBP3-BBUFFER-2TBP3P3-AA/L-2A/L-14CRefrigBUFFER-1WaterBathVIRUSP3VIRUSP2CELLCULTURERackBSCDeconAutoclaveDeconAutoclaveWasteCORRIDOR-80CFreezerIncubatorMicro-ScopeCentrifugeClosetVirusP3MaterialsFlow4CRefrigWaterBathVIRUSP3VIRUSP2CELLCULTURERackBSCBUFFER-1DeconAutoclaveDeconAutoclaveWasteCORRIDOR-80CFreezerTBP2TBP2-ASTAINTBP3-BBUFFER-2TBP3P3-AIncubatorMicro-ScopeCentrifugeClosetA/L-2A/L-1物品動(dòng)線(FlowofMaterials)4CRefrigWaterBathVIRUSP3VIRUSP2CELLCULTURERackBSCBUFFER-1DeconAutoclaveDeconAutoclaveWasteCORRIDOR-80CFreezerTBP2TBP2-ASTAINTBP3-BBUFFER-2TBP3P3-AIncubatorMicro-ScopeCentrifugeClosetA/L-2A/L-1WasteFlow廢棄物動(dòng)線(FlowofWaste)P3Lab.Class100K20times/hr21±2℃60±10%RHCarridor12times/hr23±2℃P2Lab.Class100K20times/hr21±2℃60±10%RH-12.5PaVIRUSP3VIRUSP2CELLCULTUREBUFFER-1WasteCORRIDORTBP2TBP2-ASTAINTBP3-BBUFFER-2TBP3P3-AA/L-2A/L-1DeconAutoclaveDeconAutoclave氣流示意圖(FlowofAir)IndividualworkersresponsibilitiesThatmeansYOU!前言目的：為防範(fàn)院內(nèi)生物危害第三等級(jí)生物材料，因人為疏失、操作失當(dāng)或不正確使用器具或設(shè)備，造成實(shí)驗(yàn)室意外，導(dǎo)致環(huán)境污染及院內(nèi)感染，訂定此操作程序，以防止或?qū)⒖赡艿奈ｋU(xiǎn)降至最低。實(shí)驗(yàn)室平安的關(guān)鍵在於工作者對(duì)工作特性的認(rèn)知及良好的工作習(xí)慣生物平安是每一位實(shí)驗(yàn)室工作者的責(zé)任。為了維持平安的工作環(huán)境，每一位工作人員都需要遵守本操作程序的規(guī)定。違反規(guī)定者應(yīng)通報(bào)生物平安官處理。實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目-病毒實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目-結(jié)核菌準(zhǔn)備程序進(jìn)出入管制：利用刷卡門禁管制人員進(jìn)出入個(gè)人防護(hù)實(shí)驗(yàn)室功能進(jìn)出入管制生物平安第三等級(jí)實(shí)驗(yàn)室操作時(shí)每次至少兩人同時(shí)在實(shí)驗(yàn)室，並且有一人在走道監(jiān)控監(jiān)視器，於設(shè)施使用及人員進(jìn)出紀(jì)錄表簽名〔附表一〕在監(jiān)視系統(tǒng)設(shè)定允許進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。工務(wù)維修人員、實(shí)習(xí)學(xué)生、參觀或觀摩人員進(jìn)入生物平安第三等級(jí)實(shí)驗(yàn)室，必須有平安訓(xùn)練紀(jì)錄〔附表三〕，並有合格人員全程監(jiān)督，未經(jīng)訓(xùn)練不準(zhǔn)操作。操作特定實(shí)驗(yàn)須有操作訓(xùn)練紀(jì)錄，並有合格人員監(jiān)督。院外人員進(jìn)入需填寫參訪紀(jì)錄〔附表一d〕準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)用器材〔附表一a〕於人員進(jìn)出紀(jì)錄表勾選工作項(xiàng)目，並逐項(xiàng)核對(duì)實(shí)驗(yàn)器材清單實(shí)驗(yàn)用器材及儀器紀(jì)錄表經(jīng)由傳遞箱送入室內(nèi)。於人員進(jìn)出紀(jì)錄表登錄日期、時(shí)間及工作項(xiàng)目。個(gè)人防護(hù)使用個(gè)人防護(hù)用具：進(jìn)入緩衝室〔入〕，依標(biāo)示穿隔離衣、穿鞋套、載N95口罩、戴手術(shù)帽、戴外科口罩、戴外科長(zhǎng)手套、戴手套。禁止攜帶進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目嚴(yán)禁攜帶私人手機(jī)入內(nèi)使用。取下手錶、手環(huán)、戒指、耳環(huán)及髮飾。脫下影響穿著防護(hù)衣之個(gè)人外套。實(shí)驗(yàn)室功能確定實(shí)驗(yàn)室內(nèi)氣流方向及換氣量氣流方向氣流方向是從無生物材料污染區(qū)域至污染可能程度增加的區(qū)域〔走道→緩衝室→實(shí)驗(yàn)室〕，可用一張薄紙測(cè)試換氣量進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室前，於中央監(jiān)控系統(tǒng)啟動(dòng)為正常模式，換氣量12次/時(shí)以上。實(shí)驗(yàn)結(jié)束後，於中央監(jiān)控系統(tǒng)設(shè)定為節(jié)能模式。工程人員至少每年測(cè)量一次氣流量的變化中央監(jiān)控系統(tǒng)分層管制〔見附件六〕確定實(shí)驗(yàn)室內(nèi)負(fù)壓為3.5mmAq-5mmAq查看實(shí)驗(yàn)室外負(fù)壓壓力表顯示值是否在設(shè)定範(fàn)圍內(nèi)。遵守人員、物品、廢棄物動(dòng)線實(shí)驗(yàn)程序個(gè)人平安衛(wèi)生生物平安櫃的使用生物平安櫃外的實(shí)驗(yàn)其他設(shè)備的使用個(gè)人平安衛(wèi)生操作中手有任何污染之虞時(shí)，立刻更換外層手套。使用震盪器混合感染性液體時(shí)，手應(yīng)執(zhí)試管高於液面適當(dāng)之高度處，混合液體才不會(huì)衝到蓋子。使用室內(nèi)通話機(jī)、無線電話機(jī)必須先脫去外層手套才可手持話機(jī)通話。生物平安櫃的使用(I)實(shí)驗(yàn)操作前，確定生物平安櫃氣流方向正確，負(fù)壓正常至少先開機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)5分鐘，確認(rèn)氣流穩(wěn)定後再開始實(shí)驗(yàn)操作。在生物平安櫃內(nèi)操作時(shí)，防止破壞操作口之空氣屏障〔AirBarrier〕手盡可能減少進(jìn)出動(dòng)作，不能防止時(shí)進(jìn)出動(dòng)作要緩和，手臂進(jìn)出時(shí)與生物平安櫃面板垂直。進(jìn)出後須等1分鐘，氣流穩(wěn)定後後才開始操作。防止其他人員在同一空間內(nèi)移動(dòng)或開關(guān)門生物平安櫃的使用(II)生物平安櫃內(nèi)不可以有東西阻檔氣柵〔Grills〕盡量在離氣柵約10公分距離處操作實(shí)驗(yàn)不可將物品儲(chǔ)存於生物平安櫃內(nèi)生物平安櫃內(nèi)不可放置太多物品，以免影響氣流生物平安櫃的使用(III)實(shí)驗(yàn)操作完畢生物平安櫃至少持續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)5分鐘，使污染空氣完全去除才可關(guān)機(jī)用含消毒液之紗布清潔生物平安櫃工作檯再用含無菌水的紗布擦拭幾次，以免不銹鋼腐蝕所有感染性廢棄物都必須丟棄在可滅菌之廢棄物容器，並置於生物平安操作櫃中，實(shí)驗(yàn)結(jié)束後綁緊並取出滅菌關(guān)機(jī)後開UV燈。生物平安櫃外操作的實(shí)驗(yàn)所有與傳染源有關(guān)的開放操作，都應(yīng)在個(gè)人保護(hù)設(shè)施內(nèi)的生物平安櫃或其他物理個(gè)人保護(hù)設(shè)備中進(jìn)行，不許在開放的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上進(jìn)行工作。含病毒或結(jié)核菌之生物材料假設(shè)需凍結(jié)時(shí)，解凍前應(yīng)先套上塑膠袋才可放進(jìn)37℃恆溫水槽解凍，以防培養(yǎng)瓶龜裂並四處流散。將氣霧減至最低的方法培養(yǎng)液之更換或?qū)⑸锨逡阂浦亮硪蝗萜饔梦芑蛘鸨U器混合液體滴加細(xì)菌懸浮液於固體培養(yǎng)基外表或製作染色抹片含病毒或結(jié)核菌之器具〔培養(yǎng)管、培養(yǎng)瓶、吸管或微吸管頭〕掉落檢體或菌液濺灑將可能含病毒或結(jié)核菌之檢體切碎或磨碎離心時(shí)試管破裂由注射器推出感染性液體吸管輔助器之使用使用具過濾器之吸管輔助器。使用過之吸管應(yīng)退棄於含消毒液之容器。使用時(shí)因不慎受污染，應(yīng)立即消毒處理並更換過濾膜，以防他人因不知而繼續(xù)使用。過濾膜應(yīng)有備份置於實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。微吸管頭之使用應(yīng)選用有Filter之微吸管頭。使用過之微吸管頭應(yīng)應(yīng)退棄於含消毒液之容器。離心機(jī)之使用確認(rèn)離心機(jī)蓋具平安設(shè)計(jì)裝置。檢視離心套管氣密蓋或Rotor蓋圓型墊環(huán)是否裝妥。確認(rèn)裝在水平離心頭之套管是否一樣。確認(rèn)所要用之離心管材質(zhì)是否符合所要的轉(zhuǎn)速或離心力。平衡套管及離心物重量。確認(rèn)套管與檢體已裝妥並成對(duì)角線位置。啟動(dòng)離心，使用高轉(zhuǎn)速離心時(shí)應(yīng)緩緩加速，不可急速轉(zhuǎn)到所要之轉(zhuǎn)速。完全停止前不可打開離心機(jī)超低溫冰櫃採(cǎi)用2.0ml保存管保存，封緊瓶口，容器外面清楚標(biāo)示內(nèi)容物。使用不銹鋼儲(chǔ)放架以便檢體之存取，減少佔(zhàn)用儲(chǔ)存空間。冰櫃內(nèi)結(jié)冰時(shí)，或至少每年去除一次。病毒實(shí)驗(yàn)室定期或每次進(jìn)入時(shí)記錄溫度；結(jié)核菌實(shí)驗(yàn)室每次進(jìn)入時(shí)紀(jì)錄溫度。冰櫃內(nèi)物品少時(shí)應(yīng)置放冰寶〔冷媒劑〕，以維持溫度之穩(wěn)定。取出之冰寶須滅菌丟棄。冰箱儲(chǔ)放冰箱內(nèi)之培養(yǎng)基、緩衝液等液體類容器應(yīng)緊閉瓶口並標(biāo)示內(nèi)容物、日期及儲(chǔ)放者。冰箱內(nèi)置一溫度計(jì)以便溫度觀測(cè)及記錄。實(shí)驗(yàn)告一階段應(yīng)整理冰箱內(nèi)之存放物，不用的東西一律高壓滅菌處理。冰箱內(nèi)禁放具爆炸性之化學(xué)品。二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)容器外表應(yīng)標(biāo)示培養(yǎng)物以利識(shí)別。隨時(shí)注意二氧化碳桶壓力錶，特別是例假日之前，防止二氧化碳耗盡影響培養(yǎng)物之生長(zhǎng)。有培養(yǎng)物滲漏、污染時(shí)立即去除消毒。恆溫水槽注意水位不可低於電熱管，隨時(shí)添加水量定期清洗恆溫水槽。下班之前關(guān)閉不用的水槽加熱器。有感染物污染時(shí)水溫調(diào)高到75℃持續(xù)加溫一小時(shí)，待溫度降下後加消毒液，清洗，更換蒸餾水。傳遞箱定期擦拭傳遞箱內(nèi)及UV紫外線燈管。定期檢測(cè)燈管紫外線強(qiáng)度，必要時(shí)更換燈管確保殺菌效果。工作中不可開紫外燈。尖銳物/玻璃製品實(shí)驗(yàn)操作過程盡可能防止使用易傷手之尖銳物。非使用注射器不可時(shí)，用過之針頭不可套回針套。開冷凍乾燥菌種前，安瓶需先用玻璃切割器，切割欲折斷部位，〔手要戴防割材質(zhì)手套〕，酒精棉擦拭後安瓶插入套管內(nèi)，外面覆蓋滅菌紗布，才可折斷安瓶。使用注射器抽取感染性液後，如需排除氣泡局部，針頭必須朝上，插入底部填塞棉花之滅菌短試管，以防止產(chǎn)生氣霧。工作中意外割傷，應(yīng)立即作處理並向平安管理人及實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人報(bào)告及製作記錄，以利追蹤監(jiān)視。結(jié)束程序除污程序生物危害廢棄物之處理兩面操作高壓蒸氣滅菌鍋之使用實(shí)驗(yàn)室平安個(gè)人衛(wèi)生除污程序當(dāng)天工作完，現(xiàn)場(chǎng)必須整理乾淨(jìng)使用