微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)+高二下學期生物人教版（2019）選擇性必修3

第1章第2節(jié)二微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)1分離特定種類的微生物實驗室分離微生物的原理；選擇培養(yǎng)基的概念。二微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)2對微生物進行計數(shù)稀釋涂布平板法的步驟；微生物計數(shù)的方法。資料

PCR是體外擴增DNA片段的聚合酶鏈式反應，此項技術要求使用耐高溫的DNA聚合酶。1973年，科學家從美國黃石國家公園的熱泉中篩選出水生棲熱菌，進而從這種菌中提取出耐高溫的DNA聚合酶。任務一分離特定種類的微生物1、水生棲熱菌被篩選出來的條件是什么？提示水生棲熱菌能在70～80℃的高溫條件下生存，而絕大多數(shù)微生物在此條件下不能生存。2、這對實驗室篩選微生物有什么啟示？提示提供有利于目的菌生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度和pH等），同時抑制或阻止其他微生物的生長。任務一分離特定種類的微生物選擇培養(yǎng)基在微生物學中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱為選擇培養(yǎng)基。任務一分離特定種類的微生物現(xiàn)學現(xiàn)用一：

地球上的植物每年產(chǎn)生的纖維素超過70億噸，其中40%~60%能被土壤中某些微生物分解利用，這是因為它們能夠產(chǎn)生纖維素酶。對這些酶的研究與應用，使人們能夠利用秸稈等生產(chǎn)酒精，用纖維素酶處理服裝面料等。任務一分離特定種類的微生物1）你打算到什么環(huán)境中去尋找纖維素分解菌？提示纖維素分解菌大多數(shù)分布在富含纖維素的環(huán)境中，尋找纖維素分解菌時，可以選擇纖維素豐富的環(huán)境，如樹林中多年落葉形成的腐殖土等。任務一分離特定種類的微生物2）有同學說，可以把濾紙埋在土壤中，一段時間后，再從已腐爛的濾紙上篩選纖維素分解菌。提示這是人工設置適合纖維素分解菌生存的環(huán)境，腐爛的濾紙上很可能有纖維素分解菌。任務一分離特定種類的微生物現(xiàn)學現(xiàn)用二：

尿素含氮量高，是一種重要的氮肥。尿素施入土壤后，會被土壤中的某些細菌分解成氨，氨再轉化為NO??、NH4+等被植物吸收。這些細菌能合成脲酶，脲酶催化尿素分解產(chǎn)生氨，氨可作為細菌生長的氮源。任務一分離特定種類的微生物1）如何篩選能分解尿素的細菌？提示設計一種選擇培養(yǎng)基，用尿素作為唯一氮源，可以將分解尿素的細菌分離出來。2）怎么證明選擇培養(yǎng)基具有選擇作用？提示設置一個完全培養(yǎng)基作為對照，若完全培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)多于該選擇培養(yǎng)基，則該培養(yǎng)基具有選擇作用。任務一分離特定種類的微生物1、稀釋涂布平板法任務二對微生物進行計數(shù)1、稀釋涂布平板法任務二對微生物進行計數(shù)1、稀釋涂布平板法任務二對微生物進行計數(shù)1）設置空白對照組的目的是什么？提示檢測培養(yǎng)基滅菌是否徹底，保證實驗結果的準確性。2）稀釋涂布平板法的統(tǒng)計原理？提示當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個單菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。任務二對微生物進行計數(shù)

①為了保證結果準確，一般選擇菌落數(shù)在30-300的平板進行計數(shù)。

②為了增強實驗的說服力，應至少對3個平板進行重復計數(shù)，然后求出平均值。

③分析實驗結果時，如果重復組結果相差太大，表示操作有誤，需要重新實驗。任務二對微生物進行計數(shù)3）稀釋涂布平板法統(tǒng)計的細菌數(shù)量準確嗎？提示

稀釋涂布平板法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目少，這是因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上的觀察到的只是一個菌落。任務二對微生物進行計數(shù)4）如何從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)？提示每克樣品中的菌落數(shù)=（C÷V）×MC：某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)V：涂布平板時所用的稀釋液的體積M：稀釋倍數(shù)任務二對微生物進行計數(shù)

（2020年全國卷I節(jié)選）實驗中初步估測搖瓶M中細菌數(shù)為2×107個/mL，若要在每個平板上涂布100μL稀釋后的菌液，且保證每個平板上長出的菌落數(shù)不超過200個，則至少應將搖瓶M中的菌液稀釋_____________倍。提示每克樣品中的菌落數(shù)=（C÷V）×M

2×107=（200÷0.1）×MM=1×104任務二對微生物進行計數(shù)1×1042、顯微鏡直接計數(shù)提示

顯微鏡直接計數(shù)不能區(qū)分死菌與活菌，因此統(tǒng)計的結果一般是活菌數(shù)和死菌數(shù)的總和，統(tǒng)計結果往往比實際值偏大。任務二對微生物進行計數(shù)

1、允許特定種類微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱為選擇培養(yǎng)基。2、制備以尿素作為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基是篩選分解尿素細菌的基礎。3、可以利用稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計數(shù)的方法對微生物進行計數(shù)。小結從下列項目中選做一個：1.空氣中微生物總數(shù)的檢測；2.水中細菌總數(shù)的檢測；3.牛奶中細菌的分離與計數(shù)；4.土壤中真菌（或放線菌）的分離與計數(shù)。到社會中去1、根據(jù)選擇培養(yǎng)