(高清版)GBT 19423-2020 飼料中尼卡巴嗪的測(cè)定

ICS65.120GB/T19423—2020飼料中尼卡巴嗪的測(cè)定Determinationofnicarbazininfeeds國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)IGB/T19423—2020本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件代替GB/T19423—2003《飼料中尼卡巴嗪的測(cè)定高效液相色譜法》,與GB/T19423—-——增加了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法(見(jiàn)第5章);——更改了高效液相色譜法的檢出限，增加了定量限(見(jiàn)第1章，2003年版的第1章);—-—更改了高效液相色譜法的提取和凈化方法(見(jiàn)4.5.1、4.5.2,2003年版的7.1);—-—更改了高效液相色譜法的試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理(見(jiàn)4.6,2003年版的7.4)。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由全國(guó)飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC76)提出并歸口。本文件起草單位：廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品公共監(jiān)測(cè)中心、浙江省獸藥飼料監(jiān)察所、貴州省獸藥飼料檢測(cè)所。本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：1GB/T19423—2020飼料中尼卡巴嗪的測(cè)定本文件描述了飼料中尼卡巴嗪的高效液相色譜和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。本文件高效液相色譜法中配合飼料、濃縮飼料的檢出限為0.5mg/kg,定量限為1mg/kg,添加劑2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T20195動(dòng)物飼料試樣的制備本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4高效液相色譜法試樣中的尼卡巴嗪用甲醇-乙腈混合溶液提取，經(jīng)MAX固相萃取小柱凈化后，用高效液相色譜儀4.2.3提取溶液：甲醇十乙腈=50+50。4.2.480%乙腈溶液：準(zhǔn)確量取80mL乙腈(44.2.64%甲酸乙腈溶液：準(zhǔn)確量取4mL甲酸，用乙腈(4.2.2)稀釋并定容至100mL,混勻。不低于99%)標(biāo)準(zhǔn)品10mg(精確至0.01mg)于10mL容量瓶中，加入2mL二甲基亞砜溶解，用乙腈2GB/T19423—20204.2.9標(biāo)準(zhǔn)系列溶液：準(zhǔn)確移取適量標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(4.2.8)于10mL容量瓶中，用80%乙腈溶液4.3.3渦漩混合器。4.3.5超聲波清洗機(jī)。4.3.7固相萃取裝置。平行做兩份試驗(yàn)。稱取試樣2g(添加劑預(yù)混合飼料0.2g～1g,尼卡巴嗪含量小于10mg),精確至0.001g,于50mL離心管中，準(zhǔn)確加入25mL提取溶液(4.2.3),渦漩混勻1min,置于50℃水浴超聲提取20min,每隔5min充分振蕩一次。于8000r/min離心5min。取上清液于50mL離心管中，殘?jiān)?5mL提取溶液(4.2.3)重復(fù)提取一次，合并兩次提取液，混勻。準(zhǔn)確移取5mL提取液于15mL離注：當(dāng)添加劑預(yù)混合飼料中尼卡巴嗪含量大于1%時(shí)，建議適當(dāng)減少稱樣量(試樣中約相當(dāng)于尼卡巴嗪含量10mg)進(jìn)行測(cè)定。MAX固相萃取小柱(4.2.10)先用3mL提取溶液(4.2.3)預(yù)淋洗。將4.5.1得到的試樣待凈化溶液全部過(guò)柱，抽干。用5mL4%甲酸乙腈溶液(4.2.6)洗脫，收集洗脫液，于50℃水浴中氮?dú)獯抵辽儆谝合嗌V儀測(cè)定。3GB/T19423—20204.5.3.2標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和試樣溶液測(cè)定在儀器的最佳條件下，分別取標(biāo)準(zhǔn)系列溶液(4.2.9)和4.5.2得到的試樣溶液上機(jī)測(cè)定。尼卡巴嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液的高相液相色譜圖見(jiàn)附錄A。以保留時(shí)間定性，試樣溶液中尼卡巴嗪保留時(shí)間應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中尼卡巴嗪的保留時(shí)間一致，其相對(duì)偏差在±2.5%之內(nèi)。以尼卡巴嗪標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中的濃度為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)不應(yīng)低于0.99。試樣溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液中尼卡巴嗪的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍內(nèi)，如超出線性范圍，應(yīng)將試樣提取液用提取溶液(4.2.3)稀釋(稀釋倍數(shù)n)至線性范圍內(nèi)，重新試驗(yàn)。單點(diǎn)校準(zhǔn)定量時(shí)，試樣溶液中尼卡巴嗪的濃度與標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度相差不超過(guò)30%。4.6試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理試樣中尼卡巴嗪的含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)。多點(diǎn)校準(zhǔn)按公式(1)計(jì)算，單點(diǎn)校準(zhǔn)按公式(2)計(jì)算：…………(1)式中：w————試樣中尼卡巴嗪的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);p;——從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的試樣溶液中尼卡巴嗪的質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);V試樣提取溶液的總體積，單位為毫升(mL);V?——試樣定容的體積，單位為毫升(mL);V?--——用于凈化的試樣提取液的體積，單位為毫升(mL);m——試樣的質(zhì)量，單位為克(g);n——超出線性范圍后，需要進(jìn)一步稀釋的倍數(shù)。 (2)w———試樣中尼卡巴嗪的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);A——試樣溶液中尼卡巴嗪的峰面積；V?——試樣提取溶液的總體積，單位為毫升(mL);V?——試樣定容的體積，單位為毫升(mL);p——標(biāo)準(zhǔn)溶液中尼卡巴嗪的質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);A?！獦?biāo)準(zhǔn)溶液中尼卡巴嗪的峰面積；V?-——用于凈化的試樣提取液的體積，單位為毫升(mL);m——試樣的質(zhì)量，單位為克(g);n——超出線性范圍后，需要進(jìn)一步稀釋的倍數(shù)。測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。4GB/T19423—20204.7精密度在重復(fù)性條件下，兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果與其算術(shù)平均值的絕對(duì)差值不大于該算術(shù)平均值的10%。5液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法試樣中的尼卡巴嗪用甲醇-乙腈混合溶液提取，經(jīng)MAX固相萃取小柱凈化后，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)5.2試劑或材料除非另有規(guī)定，僅使用分析純?cè)噭?.2.3提取溶液：甲醇十乙腈=50+50。5.2.4氫氧化鈉溶液(0.2mol/L):準(zhǔn)確量取0.8g氫氧化鈉，用水稀釋并定容至100mL,混勻。5.2.54%甲酸乙腈溶液：準(zhǔn)確量取4mL甲酸，用乙腈(5.2.2)稀釋并定容至100mL,混勻。5.2.7標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(10μg/mL):準(zhǔn)確5.2.8標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(1pg/mL):準(zhǔn)確量取標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(5.2.7)1.0mL,置于10mL容量瓶中，用乙腈(5.2.2)稀釋至刻度，于—18℃以下保存，有效期為1個(gè)月。5.2.9MAX固相萃取小柱：60mg/3mL,或性能相當(dāng)者。5.3儀器設(shè)備5.3.3渦漩混合器。5.3.4超聲波清洗機(jī)。5.3.5冷凍離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于8000r/min。5.3.6固相萃取裝置。按GB/T20195制備樣品，至少200g,粉碎使其全部通過(guò)0.42mm孔徑的分磨口瓶中保存，備用。選取與待測(cè)樣品類(lèi)型相同，均勻一致，且在待測(cè)物保留時(shí)間處儀器響應(yīng)值小于方法定量限30%的飼料樣品，作為空白樣品。5.5試驗(yàn)步驟平行做兩份試驗(yàn)。稱取試樣2g(添加劑預(yù)混合飼料1g),精確至0.001g,于50mL離心管中，準(zhǔn)確加入25mL提取溶液(5.2.3),渦漩混勻1min,置于50℃水浴超聲提取20min,每隔5min充分振蕩一5GB/T19423—2020次。于8000r/min離心5min。取上清液于100mL容量瓶中，殘?jiān)?5mL提取溶液(5.2.3)重復(fù)提注：當(dāng)添加劑預(yù)混合飼料中尼卡巴嗪含量大于1%時(shí)，建議適當(dāng)減少稱樣量(試樣中約相當(dāng)于尼卡巴嗪含量10mg)MAX固相萃取小柱(5.2.9)先用3mL提取溶液(5.2.3)預(yù)淋洗。將5.5.1得到的試樣待凈化溶液稱取基質(zhì)空白試樣，按照5.5.1和5.5.2處理得到空白試樣溶液。取適量的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(5.2.8),以空白基質(zhì)溶液進(jìn)行稀釋?zhuān)渲瞥少|(zhì)量濃度分別為0.04ng/mL、0.1ng/mL、0.2ng/mL、1ng/mL、乙腈。梯度洗脫程序見(jiàn)表1。時(shí)間minA%B%6GB/T19423—2020干燥氣流量：氮?dú)?00L/h。尼卡巴嗪的定性、定量離子對(duì)及其他參考質(zhì)譜條件等見(jiàn)表2。表2尼卡巴嗪的定性、定量離子對(duì)及其他參考質(zhì)譜條件被測(cè)物名稱監(jiān)測(cè)離子對(duì)錐孔電壓V碰撞能量尼卡巴嗪“為定量離子。5.5.4.3基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和試樣溶液測(cè)定在儀器的最佳條件下，分別取基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)系列溶液(5.5.3)和5.5.2得到的試樣溶液上機(jī)測(cè)定。尼卡巴嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液定量離子質(zhì)量色譜圖見(jiàn)附錄B。5.5.4.4定性在相同試驗(yàn)條件下，試樣溶液與基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中尼卡巴嗪的保留時(shí)間相對(duì)偏差應(yīng)在±2.5%之內(nèi)。根據(jù)表2選擇的定性離子對(duì)，比較試樣譜圖中尼卡巴嗪定性離子的相對(duì)離子豐度與濃度接近的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中對(duì)應(yīng)的定性離子的相對(duì)離子豐度，若偏差不超過(guò)表3規(guī)定的范圍，則可判定為樣品中存在對(duì)應(yīng)的尼卡巴嗪。表3定性測(cè)定時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度/%20～50(含)10～20(含)最大允許偏差/%士20士25以尼卡巴嗪基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的濃度為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)不應(yīng)低于0.99。試樣溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液中尼卡巴嗪的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍內(nèi)，如超出線性范圍，應(yīng)重新試驗(yàn)或?qū)⒃嚇尤芤汉突|(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液用提取溶液(5.2.3)稀釋(稀釋倍數(shù)n)至線性范圍內(nèi)，重新測(cè)定。單點(diǎn)校準(zhǔn)定量時(shí)，試樣溶液中尼卡巴嗪的濃度與標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度相差不超5.6試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理試樣中尼卡巴嗪的含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)。多點(diǎn)校準(zhǔn)按公式(3)計(jì)算，單點(diǎn)校準(zhǔn)按公式(4)計(jì)算：式中：w———試樣中尼卡巴嗪的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);………………(3)p;——從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的試樣溶液中尼卡巴嗪的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);V?——試樣提取溶液的總體積，單位為毫升(mL);V?——試樣定容的體積，單位為毫升(mL);7GB/T19423—2020m——試樣的質(zhì)量，單位為克(g);V?———用于凈化的試樣提取液的體積，單位為毫升(mL);n———超出線性范圍后，需要進(jìn)一步稀釋的倍數(shù)。 (4)式中：w———試樣中尼卡巴嗪的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);A———試樣溶液中尼卡巴嗪的峰面積；V?——試樣提取溶液的總體積，單位為毫升(mL);V?-——試樣定容的體積，單位為毫升(mL);p———標(biāo)準(zhǔn)溶液中尼卡巴嗪的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);As—-——標(biāo)準(zhǔn)溶液中尼卡巴嗪的峰面積；V?——用于凈化的試樣提取液的體積，單位為毫升(mL);m——試樣的質(zhì)量，單位為克(g);n——超出線性范圍后，需要進(jìn)一步稀釋的倍數(shù)。測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。5.7精密度在重復(fù)性條件下，兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果與其算術(shù)平均值的絕對(duì)差值不大于該算術(shù)平均值的15%。8(資料性)尼卡巴嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液的高效液相色譜圖尼卡巴嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液的高效液相色譜圖見(jiàn)圖A.1。檢測(cè)器A3501m1,00一0.750.50時(shí)門(mén)/min圖A.1尼卡巴嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.1μg/mL)的高效液相色譜圖9響應(yīng)值1/3.504/2594