《微生物基》課件-單元五 微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基

微生物學基礎(chǔ)單元五微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基項目一微生物的營養(yǎng)

1基本概念營養(yǎng)物質(zhì)：可被微生物利用作為分解代謝和合成代謝的一切物質(zhì)；營養(yǎng)物質(zhì)的作用：參與細胞組成；構(gòu)成酶的活性成分與物質(zhì)運輸系統(tǒng)；提供機體進行各種生理活動所需要的能量。一、微生物的六種營養(yǎng)要素

２微生物細胞的元素組成主要元素：碳、氫、氧、氮、磷、硫；

作用：a)C、H、O、N是生命體最基本的組成元素；b)S是蛋白質(zhì)的重要組成元素；c)P是組成核酸和ATP不可缺少的元素；d)6種占細胞干質(zhì)量的97%;微量元素：鉀、鎂、鈣、鐵、鋅、錳、鈉、氯、鉬、硒、鈷、銅、鎢、鎳、硼等；微生物細胞利用這些化學元素物質(zhì)制造其細胞物質(zhì)和組分，并進一步將它們組織成為細胞結(jié)構(gòu)。一、微生物的六種營養(yǎng)要素

２微生物細胞的元素組成微生物細胞中幾種主要元素的含量（干重的百分數(shù)）：一、微生物的六種營養(yǎng)要素

元素細菌酵母菌霉菌

碳5049.847.9

氮1512.45.2

氫86.76.7

氧2031.140.2

磷3—

—

硫1—

—

３微生物細胞的化學組成化學組成：一、微生物的六種營養(yǎng)要素

３微生物細胞的化學組成化學組成比例：細胞的化學組成也是配制微生物培養(yǎng)基的主要依據(jù)；一、微生物的六種營養(yǎng)要素

主要成分細菌酵母菌霉菌水分75~8570~8085~90（占細胞鮮重的%）蛋白質(zhì)50~8032~7514~15占細碳水化合物12~2827~637~40胞干脂肪5~202~154~40重的核酸10~206~81%無機鹽2~303.8~76~12

４微生物的6大營養(yǎng)要素概述６大營養(yǎng)要素：碳源，氮源，能源，無機鹽，生長因子，水；營養(yǎng)要素的功能：構(gòu)成細胞結(jié)構(gòu)組分和代謝產(chǎn)物的原料；提供能量；調(diào)節(jié)新陳代謝；無論從元素水平還是營養(yǎng)要素水平，微生物的營養(yǎng)要求與攝食型的動物（含人類）和光合自養(yǎng)型的植物都十分接近；生物之間存在“營養(yǎng)上的統(tǒng)一性”。一、微生物的六種營養(yǎng)要素

５微生物6大營養(yǎng)要素－碳源碳源（carbonsource）：凡是提供微生物營養(yǎng)所需的碳元素（碳架）的營養(yǎng)源，稱為碳源；碳源譜：從微生物的整體來看，可利用的碳源物質(zhì)的范圍稱碳源譜；碳源作用：構(gòu)成細胞成分（需要量最大的元素，50%）；為異養(yǎng)型微生物提供能源；形成代謝產(chǎn)物和儲藏物。一、微生物的六種營養(yǎng)要素

５微生物6大營養(yǎng)要素－碳源碳源譜：從微生物的整體來看，可利用的碳源物質(zhì)的范圍稱碳源譜；一、微生物的六種營養(yǎng)要素

５微生物6大營養(yǎng)要素－碳源微生物碳源特點：根據(jù)微生物利用有機碳或無機碳，可將微生物分為：異養(yǎng)微生物（有機碳）、自養(yǎng)微生物（無機碳）；碳源譜廣（微生物>>植物>動物）；最適碳源：C.H.O型，糖類（異養(yǎng)微生物）；最適碳源：糖>醇>有機酸>脂類最適糖類：單糖>雙糖>多糖最適單糖：已糖>戊糖最適多糖：淀粉>纖維素>木質(zhì)素、幾丁質(zhì)一、微生物的六種營養(yǎng)要素

５微生物6大營養(yǎng)要素－碳源微生物碳源特點：微生物對碳源利用具有選擇性，如葡萄糖（速效碳源）和乳糖（遲效碳源）混合存在時，首先利用葡萄糖；酚、氰化物等物質(zhì)對人類有毒，卻是某些微生物如諾卡氏菌和一些霉菌等美味佳肴；異養(yǎng)微生物：碳源也是能源（雙功能營養(yǎng)物）；微生物不同，利用上述含碳化合物的能力不同，如假單胞菌屬中的某些種可以利用90種以上的不同類型的碳源物質(zhì)；而某些甲基營養(yǎng)型細菌只能利用甲醇或甲烷等一碳化合物進行生長。一、微生物的六種營養(yǎng)要素

５微生物6大營養(yǎng)要素－碳源實驗室配制微生物培養(yǎng)基常用碳源：葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉；微生物工業(yè)發(fā)酵中用做碳源的原料：傳統(tǒng)種類：糖類（單糖，飴糖）、淀粉（玉米粉、山芋粉、野生植物 淀粉等）、麩皮、各種米糠等；代糧發(fā)酵：纖維素、石油、CO2、H2；一、微生物的六種營養(yǎng)要素

６微生物6大營養(yǎng)要素－氮源氮源：凡是提供微生物營養(yǎng)所需的氮元素的營養(yǎng)源，稱為氮源；功能：a.構(gòu)成細胞組分（需要量僅次于碳源，~12%），提供微生物合成蛋白質(zhì)的原料；b.構(gòu)成代謝產(chǎn)物；c.某些自養(yǎng)菌的能源（如硝化細菌：氨和亞硝酸鹽兼氮源和能源）；

一、微生物的六種營養(yǎng)要素

６微生物6大營養(yǎng)要素－氮源微生物的氮源譜：一、微生物的六種營養(yǎng)要素

類型元素水平化合物水平培養(yǎng)基原料水平有機氮N·C·H·O·X復雜蛋白質(zhì)、核酸等牛肉膏、酵母膏、餅粕粉、蠶蛹粉等N·C·H·O尿素、一般氨基酸、簡單蛋白質(zhì)等尿素、蛋白胨、明膠等無機氮N·HNH3、銨鹽等(NH4)2SO4等N·O硝酸鹽等KNO3等NN2空氣

６微生物6大營養(yǎng)要素－氮源實驗室常用的氮源：有碳酸銨、硝酸鹽、硫酸銨、胰酪蛋白、尿素、蛋白胨、牛肉膏、酵母膏等；生產(chǎn)上常用的氮源：有硝酸鹽、銨鹽、尿素、氨以及蛋白含量較高的魚粉、蠶蛹粉、黃豆餅粉、花生餅份、玉米漿、麩皮等；

一、微生物的六種營養(yǎng)要素

６微生物6大營養(yǎng)要素－氮源微生物利用氮源的特點：氮源主要不提供能量(除硝化細菌等少數(shù)外)；最適氮源：NHCO>NH>NO>N2；遲效氮源：蛋白氮必須通過水解之后降解成胨、肽、氨基酸等才能被機體利用，有利于代謝產(chǎn)物的形成；速效氮源：無機氮源或以蛋白質(zhì)降解產(chǎn)物形式存在的有機氮源可以直接被菌體吸收利用，有利于機體的生長；氨基酸異養(yǎng)型微生物（營養(yǎng)缺陷型）：有些微生物沒有將無機氮合成有機氮的能力，它們不能把尿素、銨鹽等這些無機氮源自行合成他們生長所需的氨基酸，而需要從外界吸收現(xiàn)成的氨基酸作為氮源才能生長。一、微生物的六種營養(yǎng)要素

７微生物6大營養(yǎng)要素－能源微生物的能源：指能為微生物的生命活動提供最初能量來源的營養(yǎng)物或輻射能；微生物的能源譜：如下；一、微生物的六種營養(yǎng)要素

能源譜｛化學物質(zhì)輻射能｛化能異養(yǎng)微生物的能源（同碳源）有機物無機物化能自養(yǎng)微生物的能源（不同于碳源）光能自養(yǎng)和光能異養(yǎng)微生物的能源

７微生物6大營養(yǎng)要素－能源微生物能源的特點：化能自養(yǎng)微生物的能源物質(zhì)：都是一些還原態(tài)的無機物質(zhì)，例如：NH4+、NO2-、S、H2S、H2、Fe2+等，氧化后產(chǎn)生能源供細菌細胞使用；能利用這些物質(zhì)作為能源的全部是細菌，如：硝酸細菌、亞硝酸菌、硫化細菌、硫細菌、鐵細菌、硫細菌、氫細菌和鐵細菌等；這些無機養(yǎng)料常常是雙功能的（如：NH4+既是硝酸細菌的能源，又是它的氮源）。單功能營養(yǎng)物：如輻射能，只為光能微生物提供能源；雙功能營養(yǎng)物：葡萄糖(C源，能源)；NH4+是硝酸細菌的能源和氮源；三功能營養(yǎng)物：有機營養(yǎng)物常有三功能作用，既是異養(yǎng)微生物的能源，又是它們的碳源或氮源；一、微生物的六種營養(yǎng)要素

８微生物6大營養(yǎng)要素－無機鹽概念：是微生物生長必不可少的一類營養(yǎng)物質(zhì)，它們?yōu)闄C體生長提供多種重要的生理功能，包括大量元素和微量元素；大量元素：P、S、K、Mg、Na、Ca等（生長所需濃度10-3~10-4mol/L）；微量元素：Fe、Zn、Mn、Mo、Co、Cu、Ni等（生長所需濃度10-6~10-8mol/L）；一般微生物生長所需要的無機鹽有：硫酸鹽、磷酸鹽、氯化物以及含有鈉、鉀、鎂、鐵等金屬元素的化合物；配制培養(yǎng)基時，大量元素一般首選K2HPO4、MgSO4等，可同時提供4種大量元素；常用天然水、自來水來配制培養(yǎng)基以提供各種微量元素。一、微生物的六種營養(yǎng)要素

８微生物6大營養(yǎng)要素－無機鹽無機鹽的生理功能：一、微生物的六種營養(yǎng)要素

８微生物6大營養(yǎng)要素－無機鹽各種無機鹽的具體生理功能：一、微生物的六種營養(yǎng)要素

９微生物6大營養(yǎng)要素－生長因子概念：是一類對微生物正常生活所不可缺少而需要量又不大的物質(zhì)；微生物自身不能用簡單的碳源或氮源合成，或合成量不足以滿足機體生長需要的有機營養(yǎng)物質(zhì)；需外界加入的；不同微生物需求的生長因子的種類和數(shù)量不同；缺乏合成生長因子能力的微生物稱為“營養(yǎng)缺陷型”微生物；一、微生物的六種營養(yǎng)要素

９微生物6大營養(yǎng)要素－生長因子微生物所需生長因子主要包括：維生素、氨基酸、嘌呤和嘧啶（堿基）及其衍生物，此外還有甾醇、胺類、脂肪酸等；微生物所需的生長因子會隨著培養(yǎng)條件的變化而變化，前體物質(zhì)、通氣量、PH、溫度等都會對其產(chǎn)生影響；微生物所需生長因子的作用：作為輔酶或輔基參與代謝；核酸和蛋白質(zhì)的成分；一、微生物的六種營養(yǎng)要素

９微生物6大營養(yǎng)要素－生長因子有些微生物缺乏合成維生素的能力，維生素大部分是構(gòu)成酶的輔基或輔酶，需要量很少，但是缺少維生素微生物不能正常生長；有些微生物缺乏或喪失合成某種或某些氨基酸的酶，所以不能合成生長所必需的氨基酸，這類微生物被稱為“氨基酸缺陷型”；一、微生物的六種營養(yǎng)要素

微生物生長因子需要量（ml-1）III型肺炎鏈球菌

膽堿 6ug 金黃色葡萄球菌

硫胺素 0.5ng 白喉棒桿菌

β-丙氨酸1.5ug 破傷風梭狀芽孢桿菌尿嘧啶 0-4ug 腸膜狀串珠菌

吡哆醛 0.025ug

９微生物6大營養(yǎng)要素－生長因子根據(jù)微生物對生長因子的需要的不同，可分為三種類型：生長因子自養(yǎng)型微生物：能自行合成不需要從外界吸取，如大多數(shù)真菌、放線菌和不少細菌；生長因子異養(yǎng)型微生物：喪失合成能力或合成能力有限，必須從外界吸取才能維持正常的生長，如乳酸菌、動物至病菌、支原體、原生動物；生長因子過量合成微生物：能合成并分泌某些維生素等生長因子，可用于維生素等生產(chǎn)菌；一、微生物的六種營養(yǎng)要素

９微生物6大營養(yǎng)要素－生長因子如何為微生物生長提供生長因子？通過天然培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基提供：酵母膏（19種氨基酸，維生素）、玉米漿（20種氨基酸，6種維生素）、肝浸汁、麥芽汁；通過合成培養(yǎng)基提供：添加配制的維生素復合液。一、微生物的六種營養(yǎng)要素

10微生物6大營養(yǎng)要素－水水分是生物細胞的主要化學成分，其重要的生理功能表現(xiàn)在下列幾個方面：細胞的構(gòu)成成分；一系列生理生化反應的反應介質(zhì)，參與許多生理生化反應；有效地控制細胞內(nèi)的溫度變化；起到溶劑與運輸介質(zhì)的作用；維持蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子穩(wěn)定的天然構(gòu)象；一、微生物的六種營養(yǎng)要素

10微生物6大營養(yǎng)要素－水水在細胞中有兩種存在形式：結(jié)合水和游離水；不同細胞及細胞結(jié)構(gòu)中游離水的含量有較大差別：一、微生物的六種營養(yǎng)要素

10微生物6大營養(yǎng)要素－水游離水的含量可用水活度aw（Wateractivity）表示；水活度定義：一定的溫度條件下，溶液的蒸汽壓（材料上部蒸氣相中水濃度）與純水的蒸汽壓（即純水上部蒸氣相中水濃度）之比，

w=/o；（表示溶液的蒸汽壓；o表示純水的蒸汽壓）；微生物在w為0.63-0.99的環(huán)境條件下生長，特定微生物對

w的要求是一定的；一、微生物的六種營養(yǎng)要素

幾類微生物生長最適

w微生物

w一般細菌0.91酵母0.88霉菌0.80噬鹽細菌0.70噬鹽真菌0.65嗜高滲酵母0.60微生物學基礎(chǔ)單元五微生物的營養(yǎng)和培養(yǎng)基項目一微生物的營養(yǎng)

1營養(yǎng)類型分類按碳源的不同分類：動物屬于異養(yǎng)型生物，植物屬于自養(yǎng)型，而微生物既有異養(yǎng)型的也有自養(yǎng)型的，大多數(shù)微生物屬于異養(yǎng)型生物，少數(shù)微生物屬于自養(yǎng)型生物。二、微生物的營養(yǎng)類型

項目一微生物的營養(yǎng)

1營養(yǎng)類型分類按能源的不同分類：動物和大部分微生物屬于化能營養(yǎng)型生物，它們從物質(zhì)的氧化過程中獲得能量，植物和少部分微生物屬于光能營養(yǎng)型生物二、微生物的營養(yǎng)類型

1營養(yǎng)類型分類按氫供體的不同分類：氫供體指氧化還原反應中脫去氫被氧化的那個物質(zhì)，即還原劑，由于脫氫實際上是脫下一個質(zhì)子和一個電子(氫=質(zhì)子+電子)，故也可統(tǒng)稱為供電子體；供氫體不一定含有氫，只要是還原劑，都可以叫氫供體；二、微生物的營養(yǎng)類型

２四種基本營養(yǎng)類型按微生物所利用碳源、能源的不同，可分為四種基本營養(yǎng)類型：光能自養(yǎng)型（光能無機營養(yǎng)型）光能異養(yǎng)型（光能有機營養(yǎng)型）化能自養(yǎng)型（化能無機營養(yǎng)型）化能異養(yǎng)型（化能有機營養(yǎng)型）二、微生物的營養(yǎng)類型

３光能自養(yǎng)型（光能無機營養(yǎng)型）碳源：以C02作為唯一碳源或主要碳源；能源：光能；氫供體：無機物（如H2、H2S、S等），使CO2還原為細胞物質(zhì)；光能自養(yǎng)型微生物包括：

產(chǎn)氧光合作用類：藻類、藍細菌（含葉綠素）與高等植物一樣，以水為供氫體（電子供體），進行產(chǎn)氧型的光合作用，能使光能轉(zhuǎn)變成化學能（ATP），并合成細胞物質(zhì)；

二、微生物的營養(yǎng)類型

３光能自養(yǎng)型（光能無機營養(yǎng)型）光能自養(yǎng)型微生物包括：

產(chǎn)氧光合作用類：藻類、藍細菌（含葉綠素）；不產(chǎn)氧光合作用類：紫硫細菌、綠硫細菌（含菌綠素）；光合作用時以H2S、S等還原態(tài)硫化物為供氫體，產(chǎn)生細胞物質(zhì)，并伴隨硫元素的產(chǎn)生。二、微生物的營養(yǎng)類型

４光能異養(yǎng)型（光能有機營養(yǎng)型）碳源：CO2及簡單有機物；能源：光能；氫供體：有機物，通過光能將CO2還原為細胞物質(zhì)；例：紅螺菌屬中的一些細菌屬于此種營養(yǎng)類型（異丙醇作為供氫體），將CO2還原成細胞物質(zhì)，同時積累丙酮：光能自養(yǎng)型和光能異養(yǎng)型微生物可利用光能生長，在地球早期生態(tài)環(huán)境的演化過程中起重要作用；目前在高濃度有機廢水的處理中應用意義重大。二、微生物的營養(yǎng)類型

５化能自養(yǎng)型（化能無機營養(yǎng)型）碳源：CO2或碳酸鹽；能源：無機物氧化釋放的化學能；氫供體：無機物（H2、H2S、Fe2+、NH3或NO2-），使CO2還原成細胞物質(zhì)；這類微生物主要有硫化細菌、硝化細菌、氫細菌與鐵細菌；它們在自然界物質(zhì)轉(zhuǎn)換過程中起著重要的作用。例：硝化細菌通過氧化NH4+、NO2-產(chǎn)生能量。二、微生物的營養(yǎng)類型

５化能自養(yǎng)型（化能無機營養(yǎng)型）硫化細菌：通過氧化還原態(tài)的無機硫化物（H2S、S、S2O32-、SO32-）獲得能量（硫桿菌屬，硫微螺菌屬）。二、微生物的營養(yǎng)類型

５化能自養(yǎng)型（化能無機營養(yǎng)型）鐵細菌：氧化Fe2+為Fe3+獲取能量并同化CO2；氫細菌：具有氫化酶，從氫的氧化獲取能量，同化CO2。二、微生物的營養(yǎng)類型

６化能異養(yǎng)型（化能有機營養(yǎng)型）碳源：有機物（如淀粉、糖類、纖維素、有機酸等）；能源：有機物氧化釋放的化學能，有機物通常既是碳源也是能源；氫供體：有機物；大多數(shù)細菌、真菌、原生動物都是化能異養(yǎng)型微生物；所有致病微生物均為化能異養(yǎng)型微生物；根據(jù)化能異養(yǎng)型微生物利用有機物的特性，又可以將其分為下列類型：腐生型微生物：利用無生命活性的有機物作為生長的碳源；寄生型微生物：寄生在活的細胞內(nèi)，從寄生體內(nèi)獲得生長所需要的營養(yǎng)物質(zhì)；在腐生型和寄生型之間還存在中間類型：兼性腐生型、兼性寄生型。

二、微生物的營養(yǎng)類型

７四種基本營養(yǎng)類型微生物四種基本營養(yǎng)類型對比：二、微生物的營養(yǎng)類型

營養(yǎng)類型電子供體

碳源能源

例樣光能無機營養(yǎng)型（光能自養(yǎng)型）H2,H2S,S,H2OCO2光能紅硫細菌，藍細菌，藻類光能有機營養(yǎng)型（光能異養(yǎng)型）有機物有機物光能紅螺細菌化能無機營養(yǎng)型（化能自養(yǎng)型）H2,H2S,Fe2+，

NH3或NO2-CO2化學能（無機物氧化）氫細菌，硫桿菌，硝化細菌，大多數(shù)產(chǎn)甲烷菌化能有機營養(yǎng)型（化能異養(yǎng)型）有機物

有機物化學能（有機物氧化）大多數(shù)微生物，原生動物

８關(guān)于營養(yǎng)類型的定義自養(yǎng)微生物：不依賴任何有機營養(yǎng)物即可正常生活的微生物；異養(yǎng)微生物：至少需要提供一種有機物才能滿足其正常營養(yǎng)要求的微生物（即其碳源必須是有機物，供氫體是有機物，能源可以是氧化有機物或利用日光能）。二、微生物的營養(yǎng)類型

9營養(yǎng)物質(zhì)進入細胞的方式細胞膜是控制營養(yǎng)物質(zhì)進出細胞的主要屏障，具選擇性通透；營養(yǎng)物質(zhì)能否進入細胞取決于三個方面的因素：營養(yǎng)物質(zhì)的性質(zhì)（分子質(zhì)量，電負性，結(jié)構(gòu)等）；細胞所處的環(huán)境（溫度，pH值，滲透壓等）；微生物細胞的透過屏障（原生質(zhì)膜、細胞壁、莢膜等）；二、微生物的營養(yǎng)類型

9營養(yǎng)物質(zhì)進入細胞的方式根據(jù)物質(zhì)運輸過程的特點，可將營養(yǎng)物質(zhì)進入微生物細胞的方式分為：單純擴散(simplediffusion)促進擴散(facilitateddiffusion)主動運輸(activetransport)基團轉(zhuǎn)移(grouptranslocation)9營養(yǎng)物質(zhì)進入細胞的方式單純擴散(simplediffusion)：原生質(zhì)膜是一種半透性膜，營養(yǎng)物質(zhì)通過原生質(zhì)膜上的小孔，由高濃度的胞外環(huán)境向低濃度的胞內(nèi)進行擴散；特點：a.非特異性的營養(yǎng)物質(zhì)吸收方式，以濃度差為動力，高濃度向低濃度擴散；

b.營養(yǎng)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)不發(fā)生變化；c.運輸?shù)乃俾瘦^慢，與濃度差相關(guān)；d.屬物理擴散，不需能量，無載體蛋白參與；e.可運送的養(yǎng)料有限：水、脂肪酸、乙醇、甘油、苯、一些氣體分子(O2、CO2)及某些氨基酸（一定程度上）；僅限脂溶性、極性小的營養(yǎng)物質(zhì)；9營養(yǎng)物質(zhì)進入細胞的方式促進擴散(facilitateddiffusion)：營養(yǎng)物通過與細胞膜上載體蛋白的可逆性結(jié)合來加快其傳遞速度；特點：a.營養(yǎng)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)不發(fā)生變化；b.不消耗能量，故不能進行逆濃度運輸；c.運輸?shù)乃俾视砂麅?nèi)外該物質(zhì)的濃度差決定,速度快；d.需要細胞膜上的載體蛋白參與；e.被運輸?shù)奈镔|(zhì)與載體蛋白有高度的特異性；養(yǎng)料濃度過高時,與載體蛋白出現(xiàn)飽和效應。f.運送物質(zhì)：糖、氨基酸（真核微生物中作用明顯），甘油（沙門氏菌）。9營養(yǎng)物質(zhì)進入細胞的方式促進擴散模式圖9營養(yǎng)物質(zhì)進入細胞的方式主動運輸：在能量的推動下，通過膜上特殊載體蛋白逆養(yǎng)料濃度梯度吸收營養(yǎng)物質(zhì)的過程；特點：a.消耗能量；

b.逆濃度運輸；c.需要載體蛋白參與；d.對被運輸?shù)奈镔|(zhì)有高度的立體專一性；e.被運輸?shù)奈镔|(zhì)在轉(zhuǎn)移的過程中不發(fā)生任何化學變化；9營養(yǎng)物質(zhì)進入細胞的方式基團轉(zhuǎn)移：一種特殊的主動運輸，營養(yǎng)物質(zhì)在運輸?shù)倪^程中發(fā)生了化學變化（如糖在運輸?shù)倪^程中發(fā)生了磷酸化），其余特點與主動運輸相同；特點：a.需能量；

b.需載體蛋白；

c.逆濃差運輸；

d.運輸具有專一性；

e.物質(zhì)在運送過程中發(fā)生磷酸化，磷酸基團來源于PEP(熱穩(wěn)定蛋白質(zhì));9營養(yǎng)物質(zhì)進入細胞的方式基團轉(zhuǎn)移運送機制：第一步：熱穩(wěn)載體蛋白(HPr)的激活：細胞內(nèi)高能化合物磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）的磷酸基團把HPr激活；第二步：糖被HPr磷酸化后運入膜內(nèi)：糖先與外膜表面的酶2結(jié)合，再被轉(zhuǎn)運到內(nèi)膜表面，這時，糖被P-HPr上的磷酸激活，并通過酶2的作用將糖-磷酸釋放到細胞內(nèi)。１０四種營養(yǎng)物運輸方式比較運輸方式比較：比較項目單純擴散促進擴散主動運輸基團轉(zhuǎn)位特異載體蛋白運輸速度物質(zhì)運輸方向胞內(nèi)外濃度運輸分子能量消耗運輸后物質(zhì)的結(jié)構(gòu)無慢由濃至稀相等無特異性不需要不變有快由濃至稀相等特異性不需要不變有快由稀至濃胞內(nèi)濃度高特異性需要不變有快由稀至濃胞內(nèi)濃度高特異性需要改變項目二微生物的培養(yǎng)基

1培養(yǎng)基概述定義：由人工配制的、適合于不同微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物用的營養(yǎng)物質(zhì)（混合養(yǎng)料）；特點：具備微生物所需要的五大營養(yǎng)要素（碳源、氮源、能源、無機鹽、生長因子、水），且應比例適當；一旦配成必須立即滅菌；

用途：促使微生物生長；積累代謝產(chǎn)物；分離微生物菌種；鑒定微生物種類；微生物細胞計數(shù)；菌種保藏；制備微生物制品。一、培養(yǎng)基

２培養(yǎng)基配制原則目的明確：培養(yǎng)基組分滿足微生物的需要；營養(yǎng)協(xié)調(diào)：營養(yǎng)物的濃度與比例應恰當；條件適宜：物理化學條件適宜（pH、滲透壓、水活度aw、氧化還原電勢）；經(jīng)濟節(jié)約：根據(jù)培養(yǎng)目的選擇原料及其來源。一、培養(yǎng)基

２培養(yǎng)基配制原則目的明確：即根據(jù)不同微生物的營養(yǎng)需要配制不同的培養(yǎng)基。不同營養(yǎng)類型的微生物，其對營養(yǎng)物的需求差異很大：如自養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基完全可以由簡單的無機物質(zhì)組成；異養(yǎng)型生物的培養(yǎng)基至少需要含有一種有機物質(zhì)，但有機物的種類需適應所培養(yǎng)菌的特點。按微生物的主要類群來說，它們所需要的培養(yǎng)基成分也不同：細菌：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基；放線菌：高氏一號培養(yǎng)基；真菌：查氏培養(yǎng)基；酵母菌：麥芽汁培養(yǎng)基。一、培養(yǎng)基

２培養(yǎng)基配制原則營養(yǎng)協(xié)調(diào)：營養(yǎng)物的濃度與比例應恰當；濃度：濃度過高——微生物的生長起抑制作用；

濃度過小——不能滿足微生物生長的需要；比例：a)．對于異養(yǎng)微生物，營養(yǎng)要素比例大致：水＞碳源＞氮源＞P、

S＞K、Mg＞生長因子；

b)．碳氮比（C/N）：直接影響微生物生長與繁殖及代謝物的形成與積累，故常作為考察培養(yǎng)基組成時的一個重要指標。c)．C/N定義：

d).氮源過多，會使菌體生長過旺，pH偏高，不利于代謝產(chǎn)物的積累；氮源不足，則菌體繁殖量少，影響產(chǎn)量；

f).碳源過多，易形成較低的pH；碳源不足，易引起菌體的衰老和自溶。

一、培養(yǎng)基

２培養(yǎng)基配制原則條件適宜：物理化學條件適宜；pH條件適宜：各類微生物的最適生長pH值各不相同；

在微生物的生長和代謝過程中，培養(yǎng)基的初始pH值會發(fā)生改變；

為了維持培養(yǎng)基pH的相對恒定，通常在培養(yǎng)基中加入pH緩沖劑，或在進行工業(yè)發(fā)酵時補加酸、堿。一、培養(yǎng)基

２培養(yǎng)基配制原則條件適宜：物理化學條件適宜；滲透壓條件適宜：等滲溶液：適宜微生物生長； 高滲溶液：細胞發(fā)生質(zhì)壁分離； 低滲溶液：細胞吸水膨脹，直至破裂；水活度aw條件適宜：aw=p/p0(p溶液蒸汽壓力，p0純水蒸汽壓力)；

a).純水a(chǎn)w為1.00,溶液中溶質(zhì)越多,aw越??；b).微生物一般在αw為0.60～0.99的條件下生長。一、培養(yǎng)基

２培養(yǎng)基配制原則條件適宜：物理化學條件適宜；氧化還原電勢條件適宜：度量培養(yǎng)基中的還原劑釋放電子或氧化劑接受電子趨勢的一種指標；不同類型微生物生長對氧化還原電位的要求不同：好氧微生物：+0.1伏以上可正常生長,以+0.3～+0.4伏為宜；厭氧微生物：低于+0.1伏條件下生長；兼性厭氧微生物：+0.1伏以上時進行好氧呼吸,+0.1伏以下時進行發(fā)酵；對微生物影響最大的是：分子氧和分子氫的濃度。一、培養(yǎng)基

２培養(yǎng)基配制原則經(jīng)濟節(jié)約：根據(jù)培養(yǎng)目的選擇原料及其來源；培養(yǎng)目的：a).是培養(yǎng)菌體還是積累代謝產(chǎn)物？

培養(yǎng)菌體時：氮源含量宜高（碳氮比低）

b).是實驗室種子培養(yǎng)還是大規(guī)模發(fā)酵？

種子培養(yǎng)時：精；規(guī)模發(fā)酵時：粗

c).代謝產(chǎn)物是初級代謝產(chǎn)物還是次級代謝產(chǎn)物？

次級代謝產(chǎn)物時：要加入特殊元素；一、培養(yǎng)基

３設計培養(yǎng)基的方法生態(tài)模擬法：調(diào)查所培養(yǎng)菌的生態(tài)條件，查看“嗜好”，對“癥”下料——初級天然培養(yǎng)基；查閱文獻法：查閱、分析文獻，調(diào)查前人的工作資料，借鑒人家的經(jīng)驗，以便從中得到啟發(fā)設計有自己特色的培養(yǎng)基配方；精心設計法：借助優(yōu)選法或正交試驗設計法等方法；實驗比較法：

a).不同培養(yǎng)基配方的選擇比較

b).單種成分來源和數(shù)量的比較

c).幾種成分濃度比例調(diào)配的比較

d).小型試驗放大到大型生產(chǎn)條件的比較

e).pH和溫度試驗一、培養(yǎng)基

３培養(yǎng)基的滅菌高壓蒸氣滅菌：一般培養(yǎng)基：1.05Kg/cm2,121.3℃,15-30min；

含糖培養(yǎng)基：0.56Kg/cm2,112.6℃,15-30min；過濾滅菌：對溫度敏感的營養(yǎng)成分；干熱空氣滅菌（160℃，2小時）：器皿的滅菌；無菌室的消毒：紫外光；化學藥物熏蒸（苯酚；高錳酸鉀+甲醛）。一、培養(yǎng)基

４培養(yǎng)基的分類按制備后培養(yǎng)基外觀的物理狀態(tài)分類：一、培養(yǎng)基

４培養(yǎng)基的分類按對培養(yǎng)基成分的了解程度來分類：一、培養(yǎng)基

４培養(yǎng)基的分類根據(jù)培養(yǎng)目的來分類：一、培養(yǎng)基

４培養(yǎng)基的分類根據(jù)用途不同分類：一、培養(yǎng)基

４培養(yǎng)基的分類根據(jù)所培養(yǎng)的微生物類群不同來分類：一、培養(yǎng)基

５培養(yǎng)基配方舉例細菌培養(yǎng)基——牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（nutrientbroth)：

放線菌培養(yǎng)基——高氏1號：霉菌培養(yǎng)基——查氏（zapek)培養(yǎng)基：酵母菌培養(yǎng)基——麥芽汁培養(yǎng)基：

一、培養(yǎng)基

麥芽汁（糖度10°Bx）1000mL,15~20g項目二微生物的培養(yǎng)基

1純培養(yǎng)方法定義：自然界中各種微生物混雜生活在一起，從混雜的樣品中分離所需的菌種（一種微生物）進行純培養(yǎng)的方法稱為分離純化；分離純化方法：平板分離法：a).平板劃線分離法b).平板涂布分離法c).平板稀釋分離法單細胞分離法選擇性培養(yǎng)基分離法二、微生物的純培養(yǎng)

２純培養(yǎng)方法－－平板劃線分離法平板劃線分離法：用無菌接種環(huán)挑取少量待分離的樣品，在無菌平板表面進行連續(xù)多次劃線，微生物細胞將隨著劃線次數(shù)的增加而降低，并逐步分散；

經(jīng)培養(yǎng)后，在劃線的最后部分，可得到由一個細胞生長繁殖而形成的

單個菌落，獲得純培養(yǎng)；操作方法：a).近火焰旁，左手拿皿底，右手拿接種環(huán)，挑取樣品在平板上劃線；

b).平行劃線或連續(xù)劃線；二、微生物的純培養(yǎng)

項目二微生物的培養(yǎng)基

３純培養(yǎng)方法－－平板涂布分離法平板涂布分離法：用無菌吸管吸取菌懸液加入無菌平板內(nèi)，再用無菌涂布棒將菌液輕輕涂布均勻；經(jīng)培養(yǎng)后挑取單個菌落鑒定，直至獲得純培養(yǎng)；

操作方法：a).將涂布棒浸在盛有酒精的燒杯中；

b).取不超過0.1mL的菌液，滴加到培養(yǎng)基表面；c).將涂布棒在火焰上滅菌后冷卻8~10s后涂布；

d).將涂布接種好的平板倒置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16~24h，挑取單個菌落移種至斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)好后４℃保存。

二、微生物的純培養(yǎng)

項目二微生物的培養(yǎng)基

４純培養(yǎng)方法－－平板稀釋分離法平板稀釋分離法：將待分離的樣品進行一系列的稀釋（如10-4、10-5、10-6…），取適宜稀釋度的菌液涂布培養(yǎng)；經(jīng)培養(yǎng)后挑取單個菌落鑒定，直至獲得純培養(yǎng)；

稀釋方法：用無菌吸管吸取1mL某個稀釋度的菌液加入到9mL無菌水中，即稀釋了10倍；

二、微生物的純培養(yǎng)

５純培養(yǎng)方法－－單細胞分離法單細胞分離法：借助于顯微鏡挑取器上的毛細吸管，在顯微鏡下對準某一個細胞后挑取，在接種到培養(yǎng)基上培養(yǎng)后即可得到純培養(yǎng)的方法；特點：對操作技術(shù)要求高；二、微生物的純培養(yǎng)

６純培養(yǎng)方法－－選擇性培養(yǎng)基分離法選擇性培養(yǎng)基分離法：在培養(yǎng)基中加入分離對象所需要的某種營養(yǎng)物質(zhì)，制成加富培養(yǎng)基，使極少量的篩選對象很快大量繁殖，達到富集目的；在培養(yǎng)基中加入抑菌物質(zhì)，抑制非目的菌生長，而使目的菌大量繁殖；對于專性寄生菌，必須把樣品接種到相應敏感宿主細胞中并多次重復移種，即可得到純的寄生菌。二、微生物的純培養(yǎng)

１微生物培養(yǎng)方法分類微生物培養(yǎng)方法分類：好氧培養(yǎng)和厭氧培養(yǎng)；固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)；實驗室中培養(yǎng)法和生產(chǎn)實踐中培養(yǎng)法；三、微生物的培養(yǎng)方法

２實驗室好氧固體培養(yǎng)法實驗室好氧固體培養(yǎng)法：主要有試管斜面、培養(yǎng)皿平板及較大型的克氏扁瓶、茄子瓶等培養(yǎng)方法；三、微生物的培養(yǎng)方法

３實驗室好氧液體培養(yǎng)法實驗室好氧液體培養(yǎng)法：主要有試管液體培養(yǎng)法、淺層液體培養(yǎng)法、搖瓶培養(yǎng)法、臺式發(fā)酵罐法；三、微生物的培養(yǎng)方法

將培養(yǎng)液在培養(yǎng)皿底部鋪一薄層，封口后進行培養(yǎng)４實驗室厭氧固體培養(yǎng)法實驗室厭氧固體培養(yǎng)法：主要有亨蓋特厭氧試管技術(shù)、厭氧罐技術(shù)、厭氧手套箱技術(shù)；三、微生物的培養(yǎng)方法

５實驗室厭氧液體培養(yǎng)法實驗室厭氧液體培養(yǎng)法：在實驗室用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)厭氧菌時，一般采用加有還原劑的深層液體培養(yǎng)基，或同時在液面上封一層石蠟油或凡士林－石蠟油，可保證專性厭氧菌的生長。三、微生物的培養(yǎng)方法

６生產(chǎn)實踐中好氧固體和液體培養(yǎng)法生產(chǎn)實踐中好氧固體培養(yǎng)法：將接種過的固體基質(zhì)薄薄的攤鋪在容器表面，這樣，既使得微生物獲得充分的氧氣，又使微生物在生長過程中產(chǎn)生的熱量及時釋放；生產(chǎn)實踐中好氧液體培養(yǎng)法：淺盤培養(yǎng)法、發(fā)酵罐深層液體培養(yǎng)法。三、微生物的培養(yǎng)方法

７生產(chǎn)實踐中厭氧固體和液體培養(yǎng)法生產(chǎn)實踐中厭氧固體培養(yǎng)法：不多見；生產(chǎn)實踐中厭氧液體培養(yǎng)法：液體靜止密封培養(yǎng)法。三、微生物的培養(yǎng)方法

項目二微生物的培養(yǎng)基

1目的要求了解培養(yǎng)基的配制方法和技術(shù)，掌握其配制過程；了解培養(yǎng)基的幾種滅菌方法；能熟練配制各種培養(yǎng)基。四、項目實訓：培養(yǎng)基的制備

２基本原理是人工配制的適合微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的混合養(yǎng)料，其營養(yǎng)物質(zhì)有碳源、氮源、無機鹽、生長因子和水；不同微生物生長繁殖所需酸堿條件不同，如霉菌和酵母菌的pH偏酸，細菌和放線菌的pH微堿性，故配制培養(yǎng)基時，還要調(diào)節(jié)合適的pH；在液體培養(yǎng)基中加入瓊脂等凝固劑，就可配成固體培養(yǎng)基；任何培養(yǎng)基一經(jīng)配成，就應徹底滅菌備用；高壓蒸汽滅菌鍋滅菌時，在0.1MPa的壓力下，溫度可達121℃，維持15~20min，可殺死微生物的營養(yǎng)體和孢子。四、項目實訓：培養(yǎng)基的制備

３實訓用品藥品：牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、1mol/LHCl、1mol/LNaOH；儀器或其他用具：高壓蒸汽滅菌鍋、天平、藥匙、稱量紙；燒杯、量筒、玻棒、電爐；過濾裝置、三角瓶、試管、牛皮紙、棉線、記號筆。四、項目實訓：培養(yǎng)基的制備

４操作步驟以牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基為例：配制步驟：

四、項目實訓：培養(yǎng)基的制備

牛肉膏3.0g；蛋白胨10.0g；NaCl5.0g；瓊脂20g；水1000ml；pH7.4～7.6

４配制步驟第一步→稱量：按照配方要求，計算各種藥品所需要的量，正確稱取各種原料放于燒杯中；稱量注意事項：稱量前天平要預熱校正；用稱量紙稱量、稱量紙要去皮；藥匙要干凈，避免污染；培養(yǎng)基易吸潮，稱量要快；稱量完畢及時蓋好試劑瓶蓋。四、項目實訓：培養(yǎng)基的制備

４配制步驟第二步→溶解：在燒杯中加入所需水量，玻棒攪勻，加熱溶解；加熱過程中要不斷攪拌，直到營養(yǎng)物質(zhì)完全溶解，可適當補水；注意事項：電爐上要墊石棉網(wǎng)；要邊加熱邊攪拌，以防瓊脂糊底燒焦；控制好火力，避免溢出；若含淀粉，需先將淀粉用冷水調(diào)成糊狀后加熱。四、項目實訓：培養(yǎng)基的制備

４配制步驟第三步→調(diào)pH值：用1mol/LHCl、1mol/LNaOH調(diào)pH，用精密pH試紙對照；注意事項：用滴管逐滴加入，邊加邊攪拌；第四步→過濾：應趁熱用４層紗布過濾，過濾后應透明無沉淀，一般情況下，此步可省去；第五步→分裝：把配制好的培養(yǎng)基趁熱分裝到試管（制作斜面培養(yǎng)基用）或錐形瓶內(nèi)（制作平板培養(yǎng)基用）；分裝注意事項：管口和瓶口不要沾上培養(yǎng)基；試管裝量不要超過試管的1/5；錐形瓶裝量一般以其容積的1/2為宜。四、項目實訓：培養(yǎng)基的制備

４配制步驟第六步→加棉塞：棉塞大小、松緊要適當；

作用：過濾空氣中的微生物，避免污染；可使無菌空氣進入；注意事項：棉塞應采用新鮮干燥的普通棉花制作；棉塞總長度的3/5應在口內(nèi)；四、項目實訓：培養(yǎng)基的制備

４配制步驟第七步→包扎：在棉塞外包一層牛皮紙或雙層報紙（試管先用麻繩捆好），其外再用一道麻繩活結(jié)扎好，注明培養(yǎng)基名稱，配制日期，待滅菌；目的：防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞；注意事項：棉塞應采用新鮮干燥的普通棉花制作，不用脫脂棉，因為它容易吸水；棉塞總長度的3/5應在口內(nèi)；四、項目實訓：培養(yǎng)基的制備

４配制步驟第八步→滅菌：培養(yǎng)基配好后，應盡快滅菌；高壓蒸汽滅菌步驟：a).首先將內(nèi)層滅菌桶取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜；b).放回滅菌桶，并裝入待滅菌物品；注意不要裝得太擠，以免妨礙蒸汽流通而影響滅菌效果；c).加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)，再以兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣；d).打開電源加熱，并同時打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷空氣；待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時（0.1MPa），控制熱源，維持壓力至所需時間（20min）；e).滅菌所需時間到后，切斷電源，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當壓力表的壓力降至0之后，再打開排氣閥，旋松螺栓，打開蓋子，取出滅菌物品。四、項目實訓：培養(yǎng)基的制備

４配制步驟第九步→擱置斜面：培養(yǎng)基倒入試管中的量是試管容量的1/5左右（不超過1/4），然后把試管傾斜放置，使培養(yǎng)基呈斜面狀態(tài)，待其中的培養(yǎng)基冷卻凝固后使用；倒平板：平板平整，無凸起；平板無“掛壁”；培養(yǎng)基布滿整個平皿；培養(yǎng)基的量適宜；四、項目實訓：培養(yǎng)基的制備

1目的要求掌握幾種常見的微生物接種技術(shù)：斜面接種；穿刺接種；液體接種；劃線接種；了解無菌操作在微生物接種過程中的重要性：無菌操作技術(shù)：指在微生物實驗工作中，控制或防止各類微生物的污染及其干擾的一系列操作方法和有關(guān)措施；無菌操作重要性：a).保證待檢物品不被環(huán)境中微生物污染；

b).防止被檢微生物污染環(huán)境或感染操作人員。五、項目實訓：微生物的接種技術(shù)

項目二微生物的培養(yǎng)基

２基本原理將微生物的純培養(yǎng)物移植到培養(yǎng)基上的操作技術(shù)稱之為接種；接種是微生物實驗及科學研究中的一項最基本的操作技術(shù)，無論微生物的分離、培養(yǎng)、純化或鑒定以及有關(guān)微生物的形態(tài)觀察及生理研究都必須進行接種；接種的關(guān)鍵是要嚴格的進行無菌操作，如操作不慎引起污染，則實驗結(jié)果就不可靠，影響下一步工作的進行。五、項目實訓：微生物的接種技術(shù)

３實訓用品菌種：金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、酵母菌、黃曲霉；培養(yǎng)基：普通瓊脂斜面和平板、營養(yǎng)肉湯等；儀器及其他用具：酒精燈，玻璃鉛筆，火柴，試管架、接種環(huán)、接種針、接種鉤、滴管、移液管、三角型接種棒等接種工具。五、項目實訓：微生物的接種技術(shù)

４操作步驟－斜面接種斜面接種操作步驟：從已生長好的菌種斜面上或平板上挑取少量菌種移植至另一新鮮斜面培養(yǎng)基上的接種方法；第一步→貼標簽：接種前在試管上注明菌名、接種日期等，貼于距試管口2~3cm處；第二步→點燃酒精燈；第三步→接種：

五、項目實訓：微生物的接種技術(shù)

a).手持試管:將菌種管和待接斜面管用大姆指和其他四指握在左手中,中指位于兩管之間。斜面向上，盡量放平b).手旋松管塞c).接種環(huán)灼燒滅菌

４操作步驟－斜面接種第三步→接種：

五、項目實訓：微生物的接種技術(shù)

d).拔管塞：用右手的無名指、小指和手掌邊先后取下菌種管和待接試管的管塞，讓試管口緩緩過火滅菌(切勿燒得過燙)e).取菌:接種環(huán)冷卻，輕沾取少量菌體或胞子，然后將接種環(huán)移出菌種管，注意不要使接種環(huán)碰到管壁，取出后帶菌接種環(huán)不可通過火焰。

４操作步驟－斜面接種第三步→接種：

五、項目實訓：微生物的接種技術(shù)

f).接種:在火焰旁迅速將沾有菌種的接種環(huán)伸入待接斜面管。從斜面培養(yǎng)基底部向上作“Z”形來回密集劃線，勿劃破培養(yǎng)基；直線接種亦可。g).塞棉塞：取出接種環(huán)，灼燒試管口，并在火焰旁將管塞旋上；不要用試管去迎棉塞，以免試管在移動時納入不潔空氣。

h).將接種環(huán)灼燒滅菌，放下接種環(huán)，再將棉花塞旋緊。

４操作步驟－斜面接種第四步→培養(yǎng)：將已接種的細菌斜面放在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24h后觀察生長結(jié)果；真菌斜面于28℃培養(yǎng)，2~3d后觀察結(jié)果。

五、項目實訓：微生物的接種技術(shù)

５操作步驟－穿刺接種穿刺接種：用接種針從菌種斜面上挑取少量菌體并把它穿刺到固體或半固體的深層培養(yǎng)基中的接種方法；

用于厭氣性細菌培養(yǎng)、保藏菌種、檢查細菌的運動能力；只適宜于細菌和酵母菌的接種培養(yǎng)；

第一步→貼標簽；第二步→點酒精燈；五、項目實訓：微生物的接種技術(shù)

５操作步驟－穿刺接種第三步→穿刺接種：五、項目實訓：微生物的接種技術(shù)

５操作步驟－穿刺接種第四步→培養(yǎng)：將已接種的試管立于試管架上，細菌放在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后觀察生長結(jié)果；真菌于28℃培養(yǎng)，2~3d后觀察結(jié)果；具有運動能力的細菌，能沿著接種線向外運動而彌漫，形成的接種線粗而散，反之則細而密。五、項目實訓：微生物的接種技術(shù)

６操作步驟－液體接種液體接種：是一種用移液管、滴管或接種環(huán)等將菌液移接到液體三角燒瓶、試管或固體培養(yǎng)基中的一種接種方法；第一步→移液管包裝滅菌；第二步→取移液管；第三步→移菌液：取待接種培養(yǎng)液（左手拿待接種三角燒瓶培養(yǎng)液，右手小指和手掌邊拔出棉花塞，瓶口緩緩旋轉(zhuǎn)過火）→接種（將移液管伸入三角燒瓶內(nèi)，慢慢放出菌液，塞上棉塞）→移液管滅菌（5%石碳酸）；第三步→培養(yǎng)：三角燒瓶置于搖床上或恒溫箱內(nèi)，24h后觀察生長結(jié)果。五、項目實訓：微生物的接種技術(shù)

７操作步驟－劃線接種劃線