一輪復習課件：選修1生物技術(shù)

考點1傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用果酒和果醋的制作〔一〕果酒制作的原理知識要點1.酵母菌的兼性厭氧生活方式2.發(fā)酵需要的適宜條件3.傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)所使用的酵母菌的來源酵母菌的代謝類型

酵母菌是種兼性厭氧型微生物，在有氧時進行有氧呼吸，快速繁殖。C6H12O6+6O26CO2+6H2O

無氧條件下，酵母菌進行酒精發(fā)酵。C6H12O62C2H5OH+2CO2酵母菌在20OC、缺氧、呈酸性的條件下能大量繁殖〔絕大多數(shù)其他微生物在該環(huán)境條件下那么會受到抑制〕酵母菌發(fā)酵的條件

傳統(tǒng)的發(fā)酵方法酵母菌的來源閱讀教材第3頁〔二〕果醋制作的原理知識要點1.酒變醋的原理2.控制發(fā)酵條件的作用問題思考〔為什么米酒有時會變酸〕酒變醋的原理

在醋酸菌的作用下，酒首先被氧化成乙醛，進而被氧化成乙酸。CH3COOH＋H2OC2H5OH+O2

醋酸菌是種好氧細菌，對氧氣的含量特別的敏感。醋酸菌的最適生長溫度為30～35OC。醋酸菌的代謝類型及生活條件一、實驗設(shè)計請你根據(jù)以下圖〔實驗流程示意圖〕和提供的資料〔閱讀教材3～4中的“發(fā)酵裝置的設(shè)計”〕，思考有關(guān)問題，然后進行實驗設(shè)計，并寫出詳細的實驗方案。挑選葡萄沖洗榨汁酒精發(fā)酵果酒醋酸發(fā)酵果醋在進行實驗設(shè)計時，請認真閱讀教材第4頁中的“操作提示”。在設(shè)計方案中一定表達出“操作提示”中的有關(guān)事項及“旁欄思考”中的有關(guān)問題。應(yīng)該先沖洗，然后再除去枝梗，以防止除去枝梗時引起葡萄破損，增加被雜菌污染的時機。你認為應(yīng)該先沖洗葡萄還是先除去枝梗？你認為應(yīng)該從哪些方面防止發(fā)酵液被污染？

需要從發(fā)酵制作的過程進行全面的考慮。例如，榨汁機、發(fā)酵裝置要清洗干凈；每次排氣時只需擰松瓶蓋、不要完全揭開瓶蓋等。

制葡萄酒和葡萄醋時，為什么要將溫度分別控制在18~25℃和30～35℃？

20℃左右最適合酵母菌繁殖，因此需要將溫度控制在其最適溫度范圍內(nèi)。而醋酸菌是嗜溫菌，最適生長溫度為30～35℃，因此要將溫度控制在30～35℃。

制葡萄醋時，為什么要適時通過充氣口充氣？

醋酸菌是好氧菌，在將酒精變?yōu)榇姿釙r需要氧的參與，因此要適時向發(fā)酵液中充氣。

實驗案例制作葡萄酒和葡萄醋

1.對發(fā)酵瓶、紗布、榨汁機、盛葡萄汁的器皿等實驗用具進行清洗并消毒。先用溫水反復沖洗幾次,再用體積分數(shù)為75%的酒精擦拭消毒，晾干待用。

2.取葡萄500g，用清水沖洗葡萄1～2遍，除去污物并去除枝梗和腐爛的子粒。3.用榨汁機榨取葡萄汁后，將其裝入發(fā)酵瓶中〔裝置參見教材圖1-4b〕，或?qū)⑵咸汛虺蓾{后，用潔凈的紗布過濾至發(fā)酵瓶中，蓋好瓶蓋。如果沒有適宜的發(fā)酵裝置，可以用500mL的塑料瓶替代，但注入的果汁量不要超過塑料瓶總體積的2/3。

4.將發(fā)酵瓶置于適宜的溫度下發(fā)酵。5.由于發(fā)酵旺盛期CO2的產(chǎn)量非常大，因此需要及時排氣，防止發(fā)酵瓶爆裂。如果使用簡易的發(fā)酵裝置，如瓶子〔最好選用塑料瓶〕，每天要擰松瓶蓋2～4次，進行排氣。

6-8d以后，可以開始進行取樣檢驗工作。例如，可以檢驗酒味、酒精的含量、進行酵母菌的鏡檢等工作。7.當果酒制成以后，可以在發(fā)酵液中參加醋酸菌或醋曲，然后將裝置轉(zhuǎn)移至30～35℃的條件下發(fā)酵，適時向發(fā)酵液中充氣。如果找不到醋酸菌菌種或醋曲，可嘗試自然接種，但效果不是很好。如果沒有充氣裝置，可以將瓶蓋翻開，在瓶口蓋上紗布，以減少空氣中塵土等的污染。二、結(jié)果分析與評價

發(fā)酵后取樣，通過嗅味和品嘗進行初步鑒定。此外，還可用顯微鏡觀察酵母菌，并用重鉻酸鉀檢驗酒精的存在。如果實驗結(jié)果不理想，請學生分析失敗原因，然后重新制作。首先通過觀察菌膜的形成、嗅味和品嘗進行初步鑒定，再通過檢測和比較醋酸發(fā)酵前后的pH作進一步的鑒定。此外，還可以通過在顯微鏡下觀察發(fā)酵液中是否有醋酸菌，并統(tǒng)計其數(shù)量作進一步鑒定。〔一〕果酒的制作是否成功〔二〕果醋的制作是否成功三、課題延伸用重鉻酸鉀檢測酒精的產(chǎn)生原理：在酸性條件下，重鉻酸鉀與酒精反響呈現(xiàn)灰綠色。

操作：試管發(fā)酵液〔2mL〕3滴H2SO4〔3mol/L〕3滴重鉻酸鉀〔飽和溶液〕振蕩振蕩觀察

為了更有說服力，檢測時可進行對照實驗〔用未經(jīng)發(fā)酵的葡萄汁取代發(fā)酵液作為對照組〕四、相關(guān)連接1.為了獲得搞品質(zhì)的果酒，更好地抑制其他微生物的生長，可用人工培養(yǎng)的酵母菌。2.制作果醋時，可直接在果酒中參加醋酸菌?！簿唧w內(nèi)容請閱讀教材第5頁“相關(guān)連接”〕腐乳的制作腐乳制作的原理閱讀教材第6頁，答復以下問題：1.豆腐長白毛是怎么一回事？

豆腐上生長的白毛是毛霉的白色菌絲。嚴格地說是直立菌絲，此外在豆腐中還有匍匐菌絲。2.材料中的王致和為什么要用鹽將長毛的豆腐腌起來？鹽能防止雜菌污染，防止豆腐腐敗。3.我們平常吃的豆腐，哪種適合用來做腐乳？

含水量為70%左右的豆腐適于作腐乳。用含水量過高的豆腐制腐乳，不易成形。4.吃腐乳時，你會發(fā)現(xiàn)腐乳外部有一層致密的“皮”。這層“皮”是怎樣形成的呢？它對人體有害嗎？它的作用是什么？“皮”是前期發(fā)酵時在豆腐外表上生長的菌絲〔匍匐菌絲〕，它能形成腐乳的“體”，使腐乳成形?！捌ぁ睂θ梭w無害。腐乳的制作過程中有多種微生物參與了發(fā)酵〔如青霉、曲霉、毛霉、酵母等〕，其中起主要作用的是毛霉。他們能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成多肽和氨基酸，將脂肪分解成甘油和脂肪酸。一、實驗設(shè)計請你根據(jù)以下圖〔實驗流程示意圖〕和提供的三個資料，結(jié)合教材第8頁中的“操作提示”進行實驗設(shè)計，并寫出詳細的實驗方案。讓豆腐上長出毛霉加鹽腌制加鹵湯裝瓶密封腌制1.鹽的用量：〔三〕不同條件對腐乳風味和質(zhì)量的影響

鹽可抑制其他雜菌的生長，但鹽過多，太咸，也會影響腐乳的品質(zhì)。2.酒的用量：酒的含量應(yīng)控制在12％左右，酒的含量過高會使腐乳成熟的時間延長，含量過少缺乏以抑制微生物生長，可能導致豆腐腐敗。3.發(fā)酵的溫度：

溫度應(yīng)控制在20OC左右，溫度過高，其他微生物生長，可能導致豆腐腐敗，過低，腐乳成熟時間延長。4.發(fā)酵的時間：

時間過長過短都會影響腐乳的品質(zhì)。制作泡菜并檢測亞硝酸鹽含量〔一〕乳酸菌發(fā)酵乳酸菌〔種類很多，常見有乳酸鏈球菌和乳酸桿菌〕是種厭氧細菌，在無氧的條件下，將葡萄糖分解成乳酸。

亞硝酸鹽分布廣泛，在食品加工業(yè)中常用作食品添加劑?！捕硜喯跛猁}膳食中少量的亞硝酸鹽一般不會危害人體健康，但攝入總量到達0.3～0.5g時會引起中毒；當攝入總量到達3g時會引起死亡。通常情況下，人體內(nèi)的亞硝酸鹽將隨尿液排除出體外。在特定的條件下〔適宜的pH、溫度和一定的微生物作用〕將轉(zhuǎn)變?yōu)閬喯醢?，從而具有致癌、致畸變和致突變作用。一、實驗設(shè)計請你根據(jù)以下圖〔實驗流程示意圖〕和提供的二個資料，結(jié)合教材第10～12頁中的“操作提示”進行實驗設(shè)計，并寫出詳細的實驗方案。原料加工修整、洗滌、晾曬、切分成條狀或片狀加鹽鹽水冷卻泡菜鹽水加調(diào)味料裝壇發(fā)酵成品測定亞硝酸鹽含量

見教材第10頁“泡菜壇的選擇”

二、具體操作〔一〕泡菜壇的選擇問題：不合格的泡菜壇為什么會引起蔬菜的腐爛？

泡菜壇漏氣，會使需氧型微生物大量繁殖，引起蔬菜腐爛。

見教材第11頁“腌制的條件”

〔二〕腌制的條件問題：為什么溫度過高、食鹽用量缺乏、腌制時間過短，容易造成細菌大量繁殖？溫度過高、食鹽用量缺乏，有利于其他細菌繁殖；腌制一定的時間以后，乳酸菌產(chǎn)生了大量的乳酸，從而抑制了其他微生物的生長，假設(shè)腌制時間不夠，乳酸含量不高，那么不能抑制其他微生物的繁殖。1.配置溶液

〔三〕測定亞硝酸鹽的操作〔1〕質(zhì)量濃度為4mg/mL的對氨基苯磺酸溶液：稱取0.4g對氨基苯磺酸溶于100mL體積分數(shù)為20％的鹽酸溶液中，避光保存?！?〕質(zhì)量濃度為2mg/mL的N—1—萘基乙二胺鹽酸鹽溶液：稱取0.2gN—1—萘基乙二胺鹽酸鹽溶于100mL的水中，避光保存。〔3〕質(zhì)量濃度為5ug/mL的亞硝酸鈉溶液：稱取0.1g于硅膠枯燥器中枯燥24小時的亞硝酸鈉，用水定溶至500mL。再取該溶液5mL稀釋至200mL?！?〕提取劑：稱取50g氯化鎘與50g氯化鋇，溶解于1000mL蒸餾水中，用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH至1?！?〕質(zhì)量濃度為2.5mol/L的氫氧化鈉溶液：稱取10g氫氧化鈉，用水定溶至100mL。將125g硫酸鋁［Al2(SO4)3·18H2O］溶解在1000mL蒸餾水中，形成氫氧化鋁膠狀物〔為促進膠狀物的形成，可適當參加氨水溶液，使pH為4〕。利用真空抽濾瓶對膠狀物進行真空抽濾，并用蒸餾水反復洗滌沉淀，直至洗滌液分別用氯化鋇或硝酸銀溶液檢驗不發(fā)生混濁為止。取下沉淀物，加適量蒸餾水，將膠狀物沉淀調(diào)至稀漿糊狀，搗勻備用?！?〕氫氧化鋁乳液：〔氫氧化鋁膠體能吸附泡菜汁液中的雜質(zhì)，使泡菜汁透明澄清，以便進行后續(xù)的顯色反響?！?.制備標準顯色液用刻度移液管分別吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0和1.5mL的亞硝酸鈉溶液置于50mL的比色管中〔相當于1、2、3、4、5、和7.5ug〕，另取一支比色管作為空白對照。在各管中分別參加2mL對氨基苯磺酸溶液，搖勻后靜置3min，各參加1mL的N—1—萘基乙二胺鹽酸鹽溶液，添加蒸餾水至50mL。搖勻后觀察顏色〔亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸反響后，與N—1—萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色〕的梯度的變化。3.制備樣品處理液將3壇泡菜作好標記，分別作如下處理：稱取0.4kg泡菜，用榨汁機粉碎過濾，取100mL濾液移至500mL容量瓶中，加200mL蒸餾水，放在搖床上振蕩1h，再參加40mL氫氧化鈉溶液，用蒸餾水定溶至500mL，過濾。取60mL濾液移至100mL容量瓶中，參加氫氧化鋁溶液，定溶至100mL，過濾〔此時濾液無色透明〕。三、結(jié)果分析與評價

1.用顯微鏡觀察腌制泡菜鹽水中的乳酸菌：用高倍鏡觀察，乳酸菌呈鏈球狀或桿狀，無核

2.泡菜腌制過程中亞硝酸鹽含量變化的趨勢：泡菜中亞硝酸鹽的含量將隨腌制時間的延長而逐漸減少。4.結(jié)合亞硝酸鹽含量的變化趨勢，分析泡菜的腌制過程中，什么時候食用最好？為什么？腌制半個月以后再食用，因腌制10d以后亞硝酸鹽的含量已經(jīng)比較低了。

3.食品中亞硝酸鹽的含量標準：泡菜中亞硝酸鹽的含量不能超過20mg/kg。果酒和果醋的制作生產(chǎn)果醋用的乳酸菌等細菌都具有的特征是〔〕A．都是異養(yǎng)生物B．僅在有水條件下繁殖C．僅在有氧條件下生長D．生存溫度都超過80℃【解析】細菌的生長所必需的營養(yǎng)元素：碳源、氮源、無機鹽、水生長因子，其中碳源、氮源、無機鹽、生長因子因細菌種類的不同，所需的種類也不一樣，而水是所有微生物生長共同所需要的物質(zhì)。細菌按同化作用可分為自養(yǎng)型和異養(yǎng)型兩種；按異化作用可分為需氧型和厭氧型。【答案】B發(fā)酵的概念以下不屬于發(fā)酵的是〔〕A、利用需氧型青霉菌生產(chǎn)青霉素B、缺氧時人的組織細胞產(chǎn)生乳酸C、利用酵母菌的無氧呼吸獲得酒精D、利用乳酸菌制作泡菜【解析】解答該題首先要理解發(fā)酵的概念，發(fā)酵是指在生產(chǎn)實際中，人們通過微生物的培養(yǎng)，大量生產(chǎn)各種代謝產(chǎn)物的過程。這里有3個要點，一是用于生產(chǎn)，二是培養(yǎng)微生物，三是生產(chǎn)代謝產(chǎn)物?！敬鸢浮緽發(fā)酵的過程、條件下面對發(fā)酵過程中滅菌的理解不正確的選項是〔〕A、防止雜菌污染B、消滅雜菌C、培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅菌D、滅菌必須在接種前【解析】滅菌是微生物發(fā)酵過程的一個重要環(huán)節(jié)。A說的是滅菌的目的，因為發(fā)酵所用的菌種大多是單一純種，整個發(fā)酵過程不能混入其他微生物〔雜菌〕，所以是正確的；B是錯誤的，因為滅菌的目的是防止雜菌污染，但實際操作中不可能只消滅雜菌，而是消滅全部微生物。C是正確的，因為與發(fā)酵有關(guān)的所有設(shè)備和物質(zhì)都要滅菌；發(fā)酵所用的微生物是滅菌后專門接種的。D也是正確的，滅菌必須在接種前，如果接種后再滅菌就會把所接菌種也殺死?！敬鸢浮緽腐乳和泡菜的制作某人利用乳酸菌制作泡菜因操作不當泡菜腐爛。以下原因中正確的選項是〔〕①罐口密閉缺氧，抑制了乳酸菌的生長繁殖②罐口封閉不嚴，氧氣抑制了乳酸菌的生長繁殖③罐口封閉不嚴，氧氣抑制了其他腐生菌的生長和繁殖④罐口封閉不嚴促進了需氧腐生菌的生長和繁殖A、①③B、②④C、②③D、①④【答案】B考綱解讀1.微生物的實驗室培養(yǎng)2.土壤中分解尿素的細菌的別離與計數(shù)3.分解纖維素的微生物的別離4.細菌的結(jié)構(gòu)和繁殖5.病毒的結(jié)構(gòu)和增殖6.微生物需要的營養(yǎng)物質(zhì)及功能7.培養(yǎng)基的配制原那么8.培養(yǎng)基的種類

考點2微生物的利用一、微生物的實驗室培養(yǎng)〔一〕培養(yǎng)基

人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配置出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)稱培養(yǎng)基一般的培養(yǎng)基均需要碳源、氮源、無機鹽和水等培養(yǎng)基的根本成分液體培養(yǎng)基〔一般用錐形瓶盛裝〕固體培養(yǎng)基〔一般用試管或培養(yǎng)皿盛裝〕，在液體培養(yǎng)基的根底上再添加瓊脂。培養(yǎng)基的種類2、理解培養(yǎng)基的種類及應(yīng)用〔適當補充〕按物理狀態(tài)不同劃分固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基按化學組成不同劃分：合成培養(yǎng)基/天然培養(yǎng)基按用途不同劃分鑒別培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基參加青霉素的培養(yǎng)基別離酵母菌、霉菌等真菌參加高濃度食鹽的培養(yǎng)基別離金黃色葡萄球菌只有尿素作為惟一氮源的培養(yǎng)基別離出分解尿素的細菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基別離固氮菌只有纖維素作為惟一碳源的培養(yǎng)基別離分解纖維素的細菌參加青霉素等抗生素的培養(yǎng)基別離導入了目的基因的受體細胞選擇培養(yǎng)基做一些適當?shù)难a充〔二〕無菌技術(shù)

無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法技術(shù)。獲得純潔培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵，無菌技術(shù)就是防止雜菌污染的操作技術(shù)。滅菌方法適用對象所需條件滅菌時間灼燒滅菌接種金屬用具、試管口、瓶口在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒直至燒紅干熱滅菌能耐高溫并需要保持干燥的玻璃器皿、金屬用具等干熱滅菌箱內(nèi)，160～170OC中1～2h高壓蒸汽滅菌培養(yǎng)基、實驗器具等100kPa，121OC15～30min消毒無菌技術(shù)的種類滅菌使用較為溫和的方法〔酒精、紫外線〕來殺死局部對人體有害的微生物。

對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔消毒；將培養(yǎng)皿、接種用具進行滅菌；接種的過程要在酒精燈附近進行。使用較為強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外的所有微生物〔包括芽孢和孢子〕。

二、實驗操作〔一〕制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方物質(zhì)牛肉膏蛋白胨NaCl瓊脂水重量5g10g5g20g定溶至100mL2.根本過程：稱量→溶化→滅菌→倒平板高壓鍋滅菌冷卻到50OC左右時倒根本過程：稱量→溶化→滅菌→倒平板別離分解尿素的細菌：培養(yǎng)基中參加尿素為唯一氮源別離分解纖維素的微生物：培養(yǎng)基中參加纖維素為唯一碳源倒平板操作的討論1.培養(yǎng)基滅菌后要冷卻到50OC時倒平板。用什么方法來估計培養(yǎng)基的溫度？用手觸摸錐形瓶，溫度下降到剛剛不燙手時即可開始倒平板。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？

通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基外表的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基外表的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。

4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？

空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物?！捕臣兓竽c桿菌

微生物接種方法常見的有平板劃線法和稀釋涂布平板法。1.平板劃線法通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基外表連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的外表〔操作如教材18頁圖示〕。在數(shù)次劃線后可以別離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體稱菌落。優(yōu)點：可以觀察菌落特征，對混合菌進行別離

缺點：不能計數(shù)

一般用于別離微生物的純種

1、為什么在操作的第一步以及劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)？

操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了防止接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后仍然要灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，防止細菌污染環(huán)境和感染操作者。平板劃線法的討論

2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？

以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。

3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？

劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。2.稀釋涂布平板法將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的外表進行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基外表形成單個的菌落。優(yōu)點：可以計數(shù)，可以觀察菌落特征。

缺點：吸收量較少，較麻煩，平板不枯燥效果不好，容易蔓延。

系列稀釋操作101102103104105106(1)將分別盛有9mL水的試管滅菌并編號。(2)用移液管吸取1mL培養(yǎng)的菌液，注入第二支試管中，輕壓橡皮頭，吹吸三次使之充分混勻。(3)從101倍稀釋的試管中吸取1mL稀釋液，注入第三支試管中，重復步驟2，直至到第六支試管。涂布平板操作(1)將涂布器浸在盛有70％的酒精的燒杯中。(2)取少量菌液〔不超0.1mL〕，滴加到培養(yǎng)基外表。(3)將沾有酒精的涂布器在火焰上引燃，火熄后冷卻8～10s。(4)用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基外表。涂布平板操作討論涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進行無菌操作？應(yīng)從操作的各個細節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要適宜、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍；等等。將接種后和未接種〔作為對照組〕的培養(yǎng)基均放到370C的恒溫箱中，培養(yǎng)12～24h后進行觀察并記錄結(jié)果。

三、結(jié)果分析與評價1.未接種的培養(yǎng)基外表是否有菌落生長？如果有菌落生長，說明了什么？未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否那么需要重新制備。2.在接種大腸桿菌的培養(yǎng)基上，能否觀察到獨立的菌落？它們的大小、形狀、顏色相似？如果接種成功的話，在培養(yǎng)基的外表可觀察到大小、形狀、顏色相似的菌落。

3.培養(yǎng)12h和24h后，觀察到的實驗結(jié)果相同嗎？如果不同，請分析產(chǎn)生差異的原因？

培養(yǎng)12h與24h后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同。隨著時間的延長、菌落的不斷生長，使菌落不斷增大。4.如果在培養(yǎng)基上觀察到不同形態(tài)的菌落，請分析其可能的原因。無菌操作未到達要求：可能是培養(yǎng)基滅菌不徹底；可能是接種時發(fā)生了污染；也可能是在培養(yǎng)的過程中受到了污染。四、課題延伸—菌種的保存1.試管低溫臨時保存將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)成菌落后，置于4OC的冰箱中保存〔每隔3～6個月要重新接種培養(yǎng)后再保存〕。2.甘油管長期保存在3mL的甘油瓶中參加1mL的甘油，高壓滅菌。將1mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，充分混合后，置于－20OC的冷凍箱中保存。土壤中分解尿素的細菌的別離與計數(shù)〔一〕篩選菌株原理人為提供有利于目的菌株的條件〔包括營養(yǎng)、溫度、pH等〕，同時抑制或阻止其他微生物生長。在微生物學中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱做選擇培養(yǎng)基。

1.在培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長提供碳源和氮源的分別是是什么物質(zhì)？

碳源是葡萄糖，氮源是尿素。

2.分析該配方的培養(yǎng)基對微生物是否具有篩選作用？如果有，又是如何進行篩選的？能分解尿素的細菌的篩選閱讀教材22頁第一大段相關(guān)內(nèi)容，并思考答復以下問題：

有篩選作用，它的氮源只含有尿素，只有能合成分解尿素的脲酶的細菌才能生長?！捕辰y(tǒng)計菌落數(shù)目原理運用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計樣品中的活菌數(shù)。統(tǒng)計菌落數(shù)目的理論依據(jù)是：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基外表生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。因此，恰當?shù)南♂尪仁浅晒Φ亟y(tǒng)計菌落數(shù)目的關(guān)鍵。為了保證結(jié)果準確，通常將幾個稀釋度下的菌液都涂布在平板上，培養(yǎng)后再選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)。分解纖維素的微生物的別離〔一〕纖維素與纖維素酶纖維素：一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，廣泛地存在于植物的根、莖、葉等器官中。纖維素酶：由微生物分泌的一種復合酶，包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，由于它們的協(xié)同作用，最終將纖維素分解成葡萄糖。纖維素C1酶Cx酶纖維二糖葡萄糖苷酶葡萄糖①取二支20mL的試管實驗：纖維素酶分解纖維素的實驗②各參加一張濾紙條③各參加10mL0.1mol/L的醋酸－醋酸鈉緩沖液甲乙④在甲試管中參加1mL蒸餾水，乙試管參加1mL纖維素酶⑤將試管放在140r/min的搖床上振蕩1h⑥結(jié)果：乙試管的濾紙條消失

討論：乙試管的濾紙條為什么會消失？甲試管的作用是什么？剛果紅染色法剛果紅能與纖維素形成紅色復合物，而不與水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反響?！捕忱w維素分解菌的篩選用參加剛果紅的纖維素培養(yǎng)基去培養(yǎng)微生物時，如果培養(yǎng)基中出現(xiàn)以菌落為中心的透明圈時，可說明該菌落是纖維素分解菌，因為它已將被剛果紅染成紅色的纖維素分解了。一、實驗設(shè)計請你根據(jù)實驗流程圖和提供的三個資料以及“操作提示”，在思考有關(guān)問題的根底上，設(shè)計出一個詳細的實驗方案。土壤取樣選擇培養(yǎng)梯度稀釋

將樣品涂布在鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上

篩選產(chǎn)生透明圈的菌落1、微生物的實驗室培養(yǎng)2、土壤中分解尿素的細菌的別離與計數(shù)3、分解纖維素的微生物的別離DNA重組技術(shù)以下不屬于微生物的是()A．藍藻和蘑菇B．葫蘆蘚和鐵線蕨C．噬菌體和黃曲霉D．放線菌和變形蟲【解析】病毒、原核生物(例如細菌、放線菌、支原體、藍藻)、真核類的藻類和真菌及原生動物都是微生物。而一般多細胞的植物與動物不屬于微生物，如葫蘆蘚是苔蘚植物，鐵線蕨是蕨類植物，都屬于多細胞高等植物。【答案】B微生物營養(yǎng)物質(zhì)有關(guān)微生物營養(yǎng)物質(zhì)的表達中，正確的選項是〔〕A．是碳源的物質(zhì)不可能同時是氮源B．凡碳源都提供能量C．除水以外的無機物只提供無機鹽D．無機氮源也能提供能量【解析】不同的微生物，所需營養(yǎng)物質(zhì)有較大差異，要針對微生物的具體情況具體分析。對于A、B選項，它的表述是不完整的。有的碳源只能是碳源，如CO2；有的碳源可同時是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同時是能源，如葡萄糖；有的碳源同時是氮源，還是能源，如蛋白胨。對于C選項，除水以外的無機物種類繁多，功能也多樣。如CO2可作自養(yǎng)型微生物的碳源；NaHCO3可作自養(yǎng)型微生物的碳源和無機鹽；而NaCl那么只能提供無機鹽。對于D選項，無機氮源提供能量的情況還是存在的，如NH3可為硝化細菌提供能量和氮源。【答案】D微生物與病毒的關(guān)系關(guān)于病毒增殖的表達中，正確的選項是〔〕A．病毒侵入宿主細胞后，合成一種蛋白質(zhì)B．病毒的繁殖只在宿主的活細胞中進行C．病毒的繁殖以核衣殼為單位D．在普通的培養(yǎng)基上能培養(yǎng)病毒【解析】解答此題需從以下幾方面入手分析：首先，病毒是營寄生方式生活，必須生活在活的細胞內(nèi)，不能獨立生活，所以在普通的培養(yǎng)基上不能生活。第二，繁殖時，病毒的核酸進入宿主細胞，利用宿生的成分合成子代個體，除了核衣殼，還應(yīng)包括該病毒的其他結(jié)構(gòu)。合成的蛋白質(zhì)不只是一種，應(yīng)該是多種，包括多種結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)及物質(zhì)合成時所需的多種酶。【答案】B培養(yǎng)基的種類要從多種細菌中別離某種細菌，培養(yǎng)基要用〔〕A．參加青霉素的培養(yǎng)基B．參加高濃度食鹽的培養(yǎng)基C．固體培養(yǎng)基D．液體培養(yǎng)基【解析】微生物的別離需使用固體培養(yǎng)基，由于某種細菌的種類不明，所以難以使用選擇培養(yǎng)基，如參加青霉素的培養(yǎng)基可以別離到酵母菌和霉菌，參加高濃度食鹽的培養(yǎng)基可以別離到金黃色葡萄球菌。【答案】C微生物的計數(shù)產(chǎn)生標準菌落的細菌的最初數(shù)目和培養(yǎng)基分別是〔〕A．一個細菌，液體培養(yǎng)基B．許多細菌，液體培養(yǎng)基C．一個細菌，固體培養(yǎng)基D．許多細菌，固體培養(yǎng)基【解析】菌落是一個或幾個細菌的子細胞群體，在固體培養(yǎng)基上，有一定的形態(tài)結(jié)構(gòu)，肉眼可見，菌落可作