YYT 0870.2-2013 醫(yī)療器械遺傳毒性試驗(yàn) 第2部分體外哺乳動(dòng)物染色體畸變?cè)囼?yàn)

中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)I本部分為YY/T0870的第2部分。ⅡGB/T16886.3中給出的檢測(cè)潛在遺傳毒性物YY/T0870的本部分參照OECDNo.473(1997)方法，在有或無代謝活化系統(tǒng)的情況下，將培養(yǎng)YY/T0870的本部分的目的是為了篩選醫(yī)療器械/材料中具有導(dǎo)致哺乳動(dòng)物細(xì)胞中染色體結(jié)構(gòu)畸預(yù)示毒性物質(zhì)可能誘導(dǎo)染色體數(shù)目畸變。然而，YY/T0870的本部分不適用于檢測(cè)染色體數(shù)目畸變。YY/T0870的本部分需要使用體外代謝活化系12規(guī)范性引用文件GB/T68861醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第1部分風(fēng)險(xiǎn)管理過程中的評(píng)價(jià)與試驗(yàn)GB/T16886.3醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第3部分遺傳毒性、致癌性和生殖毒性試驗(yàn)GB/T16886.5醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)，第5部分體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)GB/T16886.12醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)第12部分GB/Tas860、GB/T1686.3和CBFio2試驗(yàn)用活化系統(tǒng)(S9和S9混合液)、培養(yǎng)液和試劑按附錄A和附錄B的規(guī)定制備或購買市售可選用中國倉鼠肺細(xì)胞(CHL)或中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO),推薦首選CHL。需定期檢查試驗(yàn)所用細(xì)胞核型和有無支原體污染。細(xì)胞應(yīng)置于-80℃與試驗(yàn)和對(duì)照樣品接觸的所有器具應(yīng)采用可靠方法滅菌，置壓力蒸汽滅菌器內(nèi)121℃30min,或置電熱干燥箱內(nèi)160℃2h。宜根據(jù)GB/T16886.12的原則制備試驗(yàn)液?？刹捎蒙睇}水和/或其他適宜溶劑作為浸提介質(zhì)。3見表1。也可采用其他適宜的陽性對(duì)照品。表T陽性對(duì)照物質(zhì)舉例陽性對(duì)照物甲磺酸甲酯(methylmethanesulphonate,MMS)乙基亞硝基脲(ethylnitrosourea)絲裂霉素C(mitomycinC)4-硝基喹啉-N-氧化物(4-nitroquinoline-N-oxide)苯并(a)芘(benzo(a)pyrene)如不能證實(shí)所用浸提介質(zhì)不具有致突變性還應(yīng)設(shè)空白對(duì)照。對(duì)懷疑有細(xì)胞毒性反應(yīng)的試驗(yàn)樣品應(yīng)進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)。取試驗(yàn)細(xì)胞株按GB/T16886.5中步驟進(jìn)行。毒性從最大到小或無細(xì)胞毒性，一般至少包括5個(gè)試驗(yàn)濃度梯度，并以小或無細(xì)胞毒性的濃度進(jìn)行10.2.1試驗(yàn)分別在加入或不加入S9的條件下進(jìn)行。按10.2.2～10.2.4步驟操作。4Hanks液洗細(xì)胞3次，加入新鮮細(xì)胞培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，并在接觸開始后約1.5倍的正常細(xì)胞周期時(shí)采10.2.4于收獲前2h~4h加入細(xì)胞分裂中期阻斷劑(如秋水10.3.2低滲：加入0.075mol/L氯化鉀溶液5mL～7mL,用滴管將細(xì)胞輕輕地吹打混勻，放入37℃水浴中低滲處理10min~20min,加入1mL~2mL固定液(甲醇：冰醋酸，3:1)混勻。以1500r/10.3.3固定：加入5mL～7mL固定液，混勻后固定10min～20min,以1500r/min離心5min~在光學(xué)顯微鏡下每一試驗(yàn)組至少選擇200個(gè)分散良好的中期分裂相(染色體數(shù)為2n±2)進(jìn)行染色56A.1大鼠肝S9液續(xù)沖洗數(shù)次，以便除去能抑制微粒體酶活性的血紅蛋白。每克肝(濕重)加Q,1mgI/L氯化鉀溶液3mL,連同燒杯移人冰浴中，用滅菌剪刀剪碎肝臟，在玻璃勻漿器(低于40000r/mir往復(fù)1min~2min),或組織勻漿器(20000rmn,1min)中制成肝勻漿。以上操作需注意無菌和局部冷環(huán)境磷酸二氫鈉(NaH?PO?·H?O)(13.8存(-20℃以下)。8磷酸氫二鈉(Na?HPO·12H?O)2.85gNaClNaHCO甲醇(分析純):冰乙酸(分析純