GB/T 40980-2021 生化制品中還原糖的測定 柱前衍生高效液相色譜法（正式版）

ICS07.080CCSA40GB/T40980—2021生化制品中還原糖的測定柱前衍生高效液相色譜法國家市場監(jiān)督管理總局國家標準化管理委員會IGB/T40980—2021本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由全國生化檢測標準化技術(shù)委員會(SAC/TC387)提出并歸口。1GB/T40980—2021生化制品中還原糖的測定柱前衍生高效液相色譜法乳糖10種還原糖的測定方法。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。5試劑或材料除特殊說明外，本方法所用試劑除流動相為色譜純外均為分析純，試驗用水均為GB/T6682規(guī)定5.1磷酸二氫鉀(KH?PO?)。5.3亞鐵氰化鉀[K?Fe(CN)?·3H?O]。5.4乙酸鋅[Zn(CH?COO)?·2H?O]。5.7三氯甲烷(CHCl?)。25.10三乙胺(C?H?5N)。解并定容至1000mL。5.161.0mol/LHCl溶液：取83.2mL濃鹽酸，緩慢加入約800mL水中，冷卻后加水定容半乳糖(CAS:59-23-4)、L-阿拉伯醛糖(CAS:5328-37-0)、D-木糖(CAS:31178-70-8)、L-巖藻糖(CAS:2438-80-4)、D-葡萄糖(CAS:50-99-7)、D-麥芽糖(CAS:3458-28-4)、D-乳糖(CAS:63-42-3),純度均≥99%。6.3超聲波提取器：功率250W,工作頻率取有代表性的樣品至少50g,固體樣品(液體樣品混勻直接待用)用電動粉碎機粉碎(過孔徑為GB/T40980—2021稱取樣品5g(精確到0.001g)于50mL離心管中，加水至40mL,在沸水浴中提取15min,超聲提7.3試樣衍生分別吸取試樣和不同濃度的標準工作溶液0.4mL于15mL具塞試管中，加入1.0mol/LNaOH溶液0.2mL,0.5mol/LPMP衍生溶液1.0mL,在70℃恒溫水浴中反應(yīng)60min;冷卻至室溫，加入儀器色譜參考條件如下：b)流動相：A相為含20mmol/LKH?PO?(三乙胺調(diào)節(jié)pH值至7.8±0.1)水溶液，B相為乙腈，梯度條件見表1;表1梯度洗脫參考條件時間/min流量/(mL/min)流動相B/%07.5標準曲線的制作10種還原糖標準品色譜圖見附錄A中圖A.1。7.6樣品的測定34GB/T40980—2021液中糖的濃度。8分析結(jié)果計算與表示試樣中還原糖含量按照式(1)計算： (1)式中：X——樣品中還原糖的含量，單位為克每一百克(g/100g);p———從標準工作曲線上得到的被測組分溶液質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);V——樣品溶液定容體積，單位為毫升(mL);m——所稱試樣的質(zhì)量，單位為克(g)。計算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。本方法測定10種糖標準品的參考檢出限和定量限見表2。表210種糖標準品檢出限和定量限序號化合物檢出限/(μg/mL)定量限/(ug/mL)l2甘露糖核糖0.2340.2410.7020.7233鼠李糖0.2370.7114乳糖0.4515麥芽糖0.4546葡萄糖0.2140.6427半乳糖0.3230.9698木糖0.2100.6309阿拉伯糖0.1930.579巖藻糖0.