影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座

影響免疫組化染色原因及對(duì)策影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第1頁(yè)良好免疫組化染色切片是正確判斷染色結(jié)果基礎(chǔ)和前提。因?yàn)槊庖呓M化染色過程中存在很多步驟或步驟，每一個(gè)步驟或步驟都可能影響到染色最終止果，所以，要做好一張高質(zhì)量免疫組化切片并不是一件非常輕易事。需要病理技術(shù)員和病理醫(yī)生親密配合、相互協(xié)調(diào)、共同努力才能確保做出合格免疫組化切片。影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第2頁(yè)一、影響免疫組化染色質(zhì)量原因1、標(biāo)本固定手術(shù)標(biāo)本及時(shí)固定是確保免疫組化染色質(zhì)量關(guān)鍵。未能及時(shí)固定組織，會(huì)造成細(xì)胞變性和自溶，造成結(jié)構(gòu)破壞和抗原物質(zhì)彌散，在免疫組化染色上表現(xiàn)為抗原定位改變和背景染色增高。過分固定會(huì)造成抗原決定簇封閉和抗原丟失。影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第3頁(yè)同一病例ER表示情況ERER固定不及時(shí)固定二周后取材固定8小時(shí)后取材影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第4頁(yè)未及時(shí)固定乳腺癌組織ER表示胞漿著色影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第5頁(yè)影響免疫組化染色質(zhì)量原因2、切片質(zhì)量影響切片太厚、皺褶，刀痕，敷貼不牢靠，以及脫蠟不徹底，均會(huì)影響免疫組化染色質(zhì)量，易出現(xiàn)非特異性染色和染色不均勻。影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第6頁(yè)影響免疫組化染色質(zhì)量原因3、抗原修復(fù)步驟影響抗原修復(fù)步驟在免疫組化染色中是極為主要步驟。不一樣修復(fù)時(shí)間、不一樣修復(fù)方法、不一樣抗原修復(fù)液，最終結(jié)果會(huì)有差異。影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第7頁(yè)

同一蠟塊不一樣修復(fù)方式結(jié)果ERHer-2(2+)Her-2(1+)微波修復(fù)水浴修復(fù)影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第8頁(yè)

同一蠟塊不一樣修復(fù)時(shí)間結(jié)果影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第9頁(yè)

同一蠟塊使用不一樣修復(fù)液結(jié)果Ki-67EDTA檸檬酸影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第10頁(yè)4、操作過程中細(xì)節(jié)問題影響滴加抗體未完全覆蓋組織，PBS殘留過多，操作過程中切片干燥等原因，會(huì)出現(xiàn)邊緣效應(yīng)和染色不均勻及北京染色等。影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第11頁(yè)抗體覆蓋組織不完全造成邊緣效應(yīng)影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第12頁(yè)抗體覆蓋不均勻灶狀著色影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第13頁(yè)影響免疫組化染色質(zhì)量原因5、第一抗體、檢測(cè)系統(tǒng)影響使用不一樣克隆、不一樣種屬起源抗體，不一樣檢測(cè)系統(tǒng)，免疫組化染色會(huì)產(chǎn)生差異。使用三步法試劑盒（如SP法）生物素系統(tǒng)進(jìn)行免疫組化染色時(shí)，假如操作不妥會(huì)產(chǎn)生較強(qiáng)背景染色。影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第14頁(yè)影響免疫組化染色質(zhì)量原因6、顯色劑、復(fù)染劑影響不一樣DAB顯色試劑盒、不一樣顯色時(shí)間，會(huì)對(duì)免疫組化染色強(qiáng)度及級(jí)別判斷產(chǎn)生影響。蘇木素復(fù)染過深、過淺，對(duì)比都不清楚。影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第15頁(yè)DAB顯色恰當(dāng)GST-π影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第16頁(yè)DAB顯色恰當(dāng)CK5/6影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第17頁(yè)Ki-67影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第18頁(yè)胸腔積液離心包埋細(xì)胞塊免疫組化染色TTF-1CK7影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第19頁(yè)Calponin影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第20頁(yè)TOPOⅡ影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第21頁(yè)CK5/6影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第22頁(yè)P(yáng)63影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第23頁(yè)DAB顯色適當(dāng)，蘇木素復(fù)染過淺影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第24頁(yè)二、免疫組化染色質(zhì)量控制組織固定1、標(biāo)本在離體后應(yīng)馬上浸泡于相當(dāng)于標(biāo)本體積8~10倍標(biāo)準(zhǔn)固定液中，大標(biāo)本要剖開固定。離體后標(biāo)本固定前存放不得超出30分鐘。2、在實(shí)際工作中，就可操作性而言，10%緩沖福爾馬林是兼顧保留組織形態(tài)和抗原性通行、被廣泛接收選擇。3、適度、適時(shí)固定。普通而言，大標(biāo)本只要做到及時(shí)切開固定，在室溫下12小時(shí)即可到達(dá)固定要求；為了適應(yīng)免疫組化染色標(biāo)準(zhǔn)化需要，標(biāo)本固定后應(yīng)及時(shí)取材，通常固定時(shí)間不得超出24小時(shí)。4、到達(dá)固定時(shí)間要求而不能及時(shí)進(jìn)入脫水程序標(biāo)本，提議將標(biāo)本置入70%乙醇中進(jìn)行暫時(shí)保留直至進(jìn)入組織脫水程序。影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第25頁(yè)免疫組化染色質(zhì)量控制脫水及制片1、建立嚴(yán)格組織脫水試劑規(guī)范化更換制度，確保組織處理質(zhì)量。2、切片厚度普通3~4μm，厚薄均勻、平整，無刀痕、折疊，采取高質(zhì)量防脫載玻片。3、切片在60℃烤箱內(nèi)烤2~3小時(shí)，或者70℃烤箱內(nèi)1小時(shí)。4、脫蠟要和常規(guī)切片分開，使用單獨(dú)二甲苯，假如溫度過低或二甲苯使用次數(shù)較多，可適當(dāng)延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間。影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第26頁(yè)免疫組化染色質(zhì)量控制抗原修復(fù)抗原修復(fù)方式有各種，熱修復(fù)普通推薦高壓鍋熱修復(fù)法，不過微波修復(fù)也有其方便一面。影響抗原修復(fù)基本原因是加熱溫度和加熱時(shí)間，以及所使用修復(fù)液PH值。需要操作者在實(shí)際工作中探索總結(jié)，同時(shí)要依據(jù)每種抗體詳細(xì)要求，找到較適合修復(fù)方式。抗原修復(fù)恰當(dāng)是否，直接關(guān)系到免疫組織化學(xué)染色成敗，深入影響最終結(jié)果正確判讀。影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第27頁(yè)免疫組化染色質(zhì)量控制抗體及檢測(cè)系統(tǒng)選擇選擇優(yōu)良抗體和檢測(cè)試劑盒，新買抗體要進(jìn)行敏感性測(cè)試，找到最正確抗原修復(fù)條件，每次試驗(yàn)要設(shè)置對(duì)應(yīng)陽(yáng)性和陰性對(duì)照。試劑使用一定在其使用期內(nèi)，同時(shí)經(jīng)常觀察抗體使用過程中結(jié)果改變，如不理想要及時(shí)更換。影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第28頁(yè)免疫組化染色質(zhì)量控制顯色和復(fù)染不要忽略顯色過程，和常規(guī)染色類似，顯色不恰當(dāng)也會(huì)造成染色前功盡棄。不一樣組織、不一樣抗體顯色時(shí)間有差異，必要時(shí)使用顯微鏡觀察切片顯色效果。蘇木素復(fù)染過深過淺都會(huì)造成對(duì)比不清楚，不利于觀察評(píng)價(jià)。影響免疫組化染色的因素和對(duì)策專家講座第29頁(yè)免疫組化染色質(zhì)量控制影響免疫組化染色原因很多。在操作中應(yīng)重視細(xì)節(jié)，