河北醫(yī)大中藥藥理學實驗指導

中藥藥理學實驗指導

目錄

第一章中藥藥理學實驗須知..…1

第二章中藥藥理實驗基本知識與技術(shù).?…2

第一節(jié)常用動物簡介…2

第二節(jié)實驗動物的捉持、固定和標記方法及分組…4

第三節(jié)常用實驗動物的給藥方法…6

第四節(jié)實驗動物給藥量的計算…8

第五節(jié)實驗動物的麻醉方法…13

第六節(jié)實驗動物的采血方法…15

第七節(jié)實驗動物的處死方法…17

第三章中藥藥理實驗研究的基本要求.?…18

第一節(jié)中藥藥理實驗設計的基本知識…18

第二節(jié)實驗數(shù)據(jù)的整理與統(tǒng)計方法…20

第四章基本實驗項目..…24

實驗一馬錢子的急性毒性試驗（改進寇氏法）…24

實驗二柴胡對發(fā)熱家兔的解熱作用…27

實驗三生大黃對小鼠排便時間和數(shù)量的影響（炭末法）…28

實驗四生大黃對小鼠小腸運動的影響（炭末法）…29

實驗五雙黃連口服液對蛋清致大白鼠后足跖腫脹的影響…30

實驗六三金片對家兔的利尿作用（膀胱漏斗法）…33

實驗七木香對鹽酸-乙醇致大鼠急性胃粘膜損傷的影響…34

實驗八延胡索對小白鼠的鎮(zhèn)痛作用（熱板法）…35

實驗九延胡索對小白鼠的鎮(zhèn)痛作用（扭體法）…37

實驗十生三七粉對小白鼠凝血時間的影響（玻片法）…38

實驗十一三七對小白鼠凝血時間的影響（毛細玻管法）…39

實驗十二川苜對大鼠血液流變性的影響…40

實驗十三當歸抗大鼠血栓形成的作用…43

實驗十四丹參抗大鼠血小板聚集的作用…45

實驗十五復方丹參滴丸抗家兔血栓形成的作用…48

實驗十六川貝枇杷膏對小白鼠的止咳作用（潛伏期觀察法）…50

實驗十七酸棗仁對小鼠自發(fā)活動的影響…51

實驗十八天麻對小鼠睡眠時間的影響…53

實驗十九人參對小白鼠游泳時間的影響（抗疲勞實驗）…55

實驗二十人參對小白鼠耐常壓缺氧的作用…56

實驗二十一黨參對小鼠記憶獲得性障礙的改善作用（跳臺法）…57

實驗二十二鉤藤對大鼠的降壓作用…59

實驗二十三生脈注射液對低血壓狀態(tài)家兔的升壓作用…61

實驗二十四某一中藥活血化瘀作用的藥效學實驗設計與研究…62

第一章中藥藥理學實驗須知

中藥藥理學實驗課是中藥藥理教學的一個重要組成部分。在生理

學和藥理學實驗基礎上,在講授中藥藥理的同時,開展中藥藥理的實

驗，它的目的和任務一方面是驗證理論、鞏固并加強對理論知識的理

解；另一方面是通過實驗，進一步提高學生的動手能力，培養(yǎng)學生能

用現(xiàn)代科學方法從事中藥理論研究和新藥開發(fā)的初步工作能力，為今

后進行科學研究，打下初步基礎。

中藥藥理實驗包括進行實驗操作、整理實驗結(jié)果和寫出實驗報告

等環(huán)節(jié)，為提高實驗效果，必須做到：

一、明確實驗的目的要求：實驗前應作好預習，明確本次實驗的

目的、方法、步驟和原理，作到心中有數(shù)，這樣，才能在實驗過程中

避免出現(xiàn)忙亂和差錯，并在教師指導下，培養(yǎng)獨立操作的能力。

二、作好實驗結(jié)果的處理：中藥藥理實驗結(jié)果有計量資料（如體

溫、尿量）及計數(shù)資料（如動物死亡數(shù)）。要忠實地準確的對觀察到的

數(shù)據(jù)及時加以記錄，決不可想當然的用主觀想象或書本理論代替實驗

觀察到的客觀事實。實驗完畢，應對結(jié)果加以整理：注明實驗題目、

實驗日期、動物性別、體重、給藥劑量等；計數(shù)資料和計量資料應列

表以便比較，使之一目了然。

三、寫好實驗報告：寫實驗報告是培養(yǎng)文字表達能力和概括、綜

合、分析問題能力的重要訓練方法。每次實驗完畢以后，要求以統(tǒng)一

的實驗報告紙寫出實驗報告，交負責教師評閱。在實驗報告中要求列

出實驗題目、實驗方法和實驗結(jié)果。有時要對實驗結(jié)果產(chǎn)生的原理或

對實驗結(jié)果異常的原因略加討論。討論不可離開實驗結(jié)果去抄書。實

驗指導所列思考題或討論題是為加深對實驗的理解，與實驗結(jié)果無關(guān)

的內(nèi)容，不必寫入實驗報告。最后把實驗結(jié)果加以概括性總結(jié)，寫出

結(jié)論。結(jié)論不是單純重復實驗結(jié)果，也不應超過驗證的范圍任意外展,

擴大結(jié)論。實驗報告要求文字簡練，書寫工整，措詞注意科學性和邏

輯性。

第二章中藥藥理實驗基本知識與技術(shù)

第一節(jié)常用動物簡介

在中藥藥理實驗中，常根據(jù)實驗目的和要求選用不同的動物。常

用的實驗動物有蛙、小鼠、大鼠、豚鼠、貓和犬等。在選擇實驗動物

時，應注意實驗動物對動物的種屬和系別方面的要求，因為動物的種

屬和系別的差異往往會造成對藥物反應性的不同。應使所選的動物能

較好地反映試驗藥物的選擇性作用，并符合節(jié)約的原則。例如測定

LD50及ED50需較多動物，常選用小鼠，因為小鼠種屬清楚，繁殖

快，較經(jīng)濟；又如抗過敏實驗常選用豚鼠，是由于豚鼠對組胺等過敏

性介質(zhì)敏感。

常用實驗動物的特點如下。

1.蛙和蟾蛛

其心臟在離體情況下能較持久而有節(jié)律地搏動，故常用來研究藥

物對心臟的作用。其坐骨神經(jīng)腓腸肌標本可用來觀察藥物對周圍神經(jīng)

橫紋肌或神經(jīng)接頭的作用。

2.小鼠

小鼠是藥理實驗最常用的一種動物，適用于需要大量動物的實驗,

如LD50和ED50的測定，抗炎免疫藥、抗腫瘤藥、避孕藥、中樞神經(jīng)

系統(tǒng)藥物等的研究和藥物初篩。

3.大鼠

用途與小鼠相似。因其體形較大，有些在小鼠身上不便進行的實

驗可選用大鼠。如藥物的抗炎實驗常選用大鼠的踝關(guān)節(jié)做炎癥模型。

可用大鼠進行血壓測定，膽管插管和長期毒性實驗，還可用其離體子

宮做子宮收縮藥的檢定。此外，尚可用來復制糖尿病模型，用于糖尿

病藥物的研究以及流感病毒傳代及細菌學實驗等。

4.豚鼠

豚鼠易被抗原性物質(zhì)所致敏，對組胺特別敏感，常用于平喘藥和

抗組胺藥的實驗研究。對結(jié)核桿菌比較敏感，故也用于抗結(jié)核藥的實

驗研究。此外還用于離體心臟、平滑肌實驗。

5.家兔

家兔較馴服，易飼養(yǎng)。常用于觀察藥物對呼吸、心臟、血管（離

體兔耳血管灌流）、腸肌運動的影響，體溫實驗及熱源檢查。用于避

孕藥實驗（雌兔）或觀察藥物對皮膚局部作用（刺激性）。

6.貓

貓對于腦實驗和其他外科手術(shù)耐受力強，反射功能強，血壓較穩(wěn)

定。常用于觀察藥物對心血管的影響。可用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)實驗，如

去大腦僵直，姿勢反射實驗；貓也常用于鎮(zhèn)吐藥的實驗。

7.犬

實驗需用大動物時，常用犬。犬是記錄血壓、呼吸最常用的動物。

常用于觀察血流動力學藥物對冠狀動脈血流量和心肌電生理的影響，

以及對降壓藥、抗休克藥的研究等。犬還可通過訓練，用于慢性實驗

研究，如條件反射、高血壓的實驗治療以及造胃瘦、腸瘦來觀察藥物

對胃腸蠕動和分泌的影響的實驗。此外，犬也用于長期毒性實驗。

第二節(jié)實驗動物的捉持、固定和標記方法及分組

一、實驗動物的標記

實驗用較大動物如兔、貓、犬等可用特制的號碼牌固定于耳上。

白色家兔和小動物（小鼠、大鼠）可用黃色苦味酸（3%~5%）涂于毛

上標記。其編號方法無統(tǒng)一規(guī)定，以下方法可供參考。

如給小鼠標記1~10號，可將小鼠背部分為前肢、腰部、后肢，按

左、中、右分為九個區(qū)域，從右到左標記1~9號，第10號不標記。

二、常用實驗動物的捉持、固定方法

1、小鼠：用右手提起鼠尾，放在粗糙物（鼠籠蓋）上面，向后輕

拉其尾，左手拇指、食指捏住其頸背部皮膚，將小鼠固定在掌中，使

其腹部朝上，然后以無名指和小指夾住鼠尾。

2、大鼠：捉持和固定方法基本同小鼠。將其放于鼠籠蓋上，右

手輕拉鼠尾，左手中指和拇指放到大鼠雙前肢腋下，食指放入頸部,

使其伸開前肢迅速將其握住。

3、豚鼠：一手拇指和中指從豚鼠背部伸到腋下，另一只手托住

其臀部即可。體重小者可用一只手捉拿。

4、家兔：一手抓住頸背部皮膚，輕輕將兔提起，另一手托住其

臀部，或?qū)⑵渲糜诠潭ㄏ鋬?nèi)。

5、貓：捉持方法同家兔，但應注意其利爪和牙齒會損傷人。為

保安全多用套網(wǎng)捉拿，用固定袋固定。

6、犬：對馴服犬，可用特制嘴套將犬嘴套住，并將嘴套上的繩

帶拉至耳后頸部打結(jié)固定。對兇暴的犬，用長柄鉗式捕犬夾鉗住其頸

部，再用嘴套將犬嘴套住。如無嘴套，可用繩帶綁嘴，方法是在犬嘴

的上下部打結(jié)并繞到頸后再打結(jié)固定。

急性實驗時，通常將犬麻醉后仰位固定于手術(shù)臺上。四肢栓上繩

帶，拉緊固定在手術(shù)臺邊緣的鍥子上。取下嘴套或繩帶，將一金屬棒

經(jīng)兩嘴角穿過口腔壓于舌上，并將舌拉出口腔，再用繩帶繞過金屬棒

綁嘴并固定于手術(shù)臺的柱子上。

三、實驗動物的隨機分組法

數(shù)理統(tǒng)計學上，根據(jù)隨機抽樣的原則，編制了隨機數(shù)目表，應用

隨機數(shù)目代替抽簽法。表中的數(shù)字都各自獨立，全部數(shù)字無論從橫行、

縱列或斜行的W頁序都是隨機的。因此使用時可任自一個數(shù)目開始，可

從左而右，亦可從右而左，可從上而下，也可從下而上，按順序取得

需要的數(shù)目，其結(jié)果比抽簽更為理想。

(1)完全隨機法

(2)配偶設計隨機分組法

(3)隨機單位組設計分組法

第三節(jié)常用實驗動物的給藥方法

一、小鼠

1、灌胃(ig):將小鼠固定后，使頸部拉直，右手持有灌胃針頭

的注射器，自口角插入口腔，沿上腭插入食管。若遇阻力，可將針頭

抽出再另插，以免刺破食管或誤入氣管。灌注量為0.1~0.3ml/10g

體重，最多0.4ml/10g體重。

2、皮下注射(sc):注射部位常選背部皮下。輕輕捏起背部皮膚，

將注射針頭刺入皮下，稍稍擺動針頭，若容易擺動則表明針尖部位于

皮下。此時注入藥液。撥針時應輕捏針刺處片刻，以防藥液漏出。注

射量為0.1~0.3ml/10g體重。

3、肌內(nèi)注射(im):多注射于后肢股部肌肉，每側(cè)不超過0.1ml。

4、腹腔注射(ip):左手固定小鼠，右手持注射器，從下腹部外側(cè)

進針3~5mm，呈45度角刺入腹腔。注射量為0.1~0.2ml/10g體重,

最大不超過0.5ml/只。

5、尾靜脈注射(iv):將小鼠置于固定筒內(nèi)，使尾部露在外面，用

70%~75%乙醇棉球擦尾部，或?qū)⑹笪步?5~50Y溫水中，待尾

部左右側(cè)靜脈擴張后，左手拉尾，右手進針。注射量不超過0.5ml/

只。

二、大鼠

灌胃、皮下注射、腹腔注射、肌內(nèi)注射、尾靜脈注射方法均同小

鼠。一般情況下，灌胃劑量為l~2ml/100g,皮下注射、尾靜脈注射

<1ml/只,腹腔注射為1.5ml/只,肌內(nèi)注射為0.1~0.2ml/只。此

外，大鼠尚有舌下靜脈給藥的方法。

三、豚鼠

1、皮下、肌內(nèi)及腹腔注射:方法基本同小鼠恪合藥量分別為0.5~

1.0ml/只、0.3~0.5ml/只、2~4ml/只。

2、靜脈注射：選用后腳掌夕M則的靜脈或外頸靜脈進行注射。采

用前法，可由一人捉持豚鼠并固定一條后腿，另一人剪去注射部位的

毛，酒精棉球涂擦使血管擴張，用連接在注射器上的小兒頭皮針頭刺

入血管推注藥物。做外頸靜脈注射時，需將頸部皮膚切一小口，暴露

血管，再用針頭刺入血管。注射量通常為2~4ml/只。

四、家兔

1、灌胃：如用兔固定箱，可一人操作。右手將開口器固定于兔

口中，左手插入導尿管。若無固定箱，需二人合作。一個坐位，將兔

夾于兩腿之間，左手緊握雙耳，固定頭部，右手抓住雙前肢。另一人

將開口器橫放于兔口中，壓在舌上，用8號導尿管由開口器中央孔慢

慢插入食管和胃。為避免誤入氣管，可將導尿管外口端浸入清水中，

如無氣泡出現(xiàn)，證明已插入胃中。然后注入藥液，給藥量通常為

10ml/kg體重。

2、耳緣靜脈注射：選定耳緣靜脈（耳背內(nèi)側(cè)），撥除局部的毛,

用酒精棉球涂擦或以示指輕彈之，使血管擴張。用左手示指和中指夾

住耳根部，拇指和環(huán)指夾住兔耳尖部拉直，然后盡量從血管遠心端刺

入，再用拇指和示指固定針頭處，注入藥液。注射量通常為2ml/kg

體重。

3、皮下、肌內(nèi)和腹腔注射：方法基本上同小鼠，最大注射量分

別為0.5ml/kg、1.0ml/kg和5.0ml/kg體重。

第四節(jié)實驗動物給藥量的計算

一、給藥劑量的計算

實驗動物的給藥量常按g/kg體重、mg/kg體重、ml/kg體重

或按體表面積來計算，一般是通過動物之間或動物與人之間的劑量換

算而得。換算方法大致有以下幾種。

1、按體型分數(shù)換算法：通常采用下列公式：

式中dB是欲求算的B種動物（包括人）的kg體重劑量，dA是已知A

種動物（包括人）的kg體重劑量；WA、WB是已知動物A、B的體重;

RA、RB是動物的體型系數(shù)，見下表。

表：實驗動物與人的體型系數(shù)

動物種類小鼠大鼠豚鼠兔貓猴犬人

R（體型系數(shù)）0.060.090.0990.0930.0820.1110.1040.11

例：已知家兔2kg,用藥50mg/kg,求算家犬5kg體重用藥量。

、代入上述公式:

dA=50,RB=0.104XRA=0.093.WA=2WB=5,

1

dB=50mg/kgx0.104x5V3/(0.093x2/3)=41.2mg/kg

2、按動物與人體表比換算法(見下表)

小鼠猴

大鼠200g豚鼠400g兔1.5kg貓2.0kg狗12.0kg人70.0kg

20g4.0kg

小鼠20g1.07.012.2527.829.764.1124.2387.9

大鼠200g0.141.01.743.94.29.217.856.0

豚鼠400g0.080.571.02.252.45.24.231.5

兔1.5kg0.040.250.441.01.082.44.514.2

貓2.0kg0.030.230.410.921.02.24.113.0

猴4.0kg0.0160.110.190.420.451.01.96.1

狗12.0kg0.0080.060.100.220.230.521.03.1

人70.0kg0.00260.0180.0310.070.0780.160.321.0

例1:已知體重12kg的犬，其每日服藥劑量為10mg/kg體重，每日

總量為120mg，試求人的日服藥量。

人日服總量二犬日服總量x人與犬體表比二120x3.1=372mg

例2:某利尿中藥大鼠給藥時的劑量為250mg/kg體重，試粗略估

計犬灌胃給藥時可以試用的劑量。（附表如下：）

解1：利用表中"mg/kg-mg/m2轉(zhuǎn)換因子"計算法

將某種動物按mg/kg計算的劑量乘以相應的轉(zhuǎn)換因子即為按mg/

m2計算的劑量。

犬的試用劑量=250x6（大鼠的轉(zhuǎn)換因子）/19（犬的轉(zhuǎn)換因

子）=79mg/kg

解2:利用表中每"1kg體重占體表面積相對比值"計算法

犬的試用齊I」量=250x0.16（犬的體表面積比值）/0.47（大鼠的體表面

積比值）=85mg/kg

不同種類動物間用藥劑量換算時的常用數(shù)據(jù)

mg/kg-mg/m2每1kg體重占體表

動物種類體重(kg)體表面積(m2)

轉(zhuǎn)換因子表面積相對比值

0.0180.00632.9

0.0200.00673.0粗略為31.0

小鼠

0.0220.00713.1(0.02kg)

0.0240.00763.2

0.100.01965.1

0.150.02575.8粗略為60.47

大鼠

0.200.03116.4(0.20kg)

0.250.03616.9

0.300.04396.8

0.400.05327.6粗略為80.40

豚鼠

0.500.06178.1(0.40kg)

0.600.06978.6

1.500.132311.30.24

家兔

2.000.1603粗略為

12.412(2.0kg)

2.500.186013.4

2.000.1571112.7

0.22

貓2.500.182413.7粗略為14

(2.5kg)

3.000.205814.6

5.000.327515.3

0.16

犬10.000.519919.2粗略為19

(10.0kg)

15.000.681222.0

40.001.239832.2

0.08

人50.001.438634.8粗略為35

(50.0kg)

60.001.624636.9

二、給藥容積的計算

實驗過程中常用的容量計算如下:實驗時需從已知藥的濃度和已

知的給藥劑量（g/kg或mg/kg）算出相當于每1kg體重應給藥的毫

升數(shù)（ml）,以便于給藥。

例:小鼠體重20g腹腔注射鹽酸嗎啡10g/kg藥液濃度為0.1%,

應注射多少毫升？

計算方法：0.1%的鹽酸嗎啡溶液每1ml含藥物1mg,10

mg/kg的劑量相當于10ml/kg,小鼠體重20g方奐算成kg為0.02kg。

則

10ml/kgx0.02kg=0.2mlo

三、配制藥物濃度的計算

實驗中有時需根據(jù)藥物劑量（mg/kg）和設定的給藥容積

（ml/kg）,計算出應該配制的藥物濃度。

例：按50mg/kg的劑量給家兔靜脈注射苯巴比妥鈉，注射量按

1ml/kg進行，應配制苯巴比妥鈉的濃度是多少?

計算方法：50mg/kg相當于1ml/kg,因此1ml藥液應含50

mg藥物，算成百分比濃度為:1:50=100:X,X=50x100mg=5g,

即應配制成5%的苯巴比妥鈉溶液。

四、藥物濃度表示法及劑量換算法

藥物的重量以"克”為基本單位，容量以"毫升"為基本單位。

這是衡量的公制，現(xiàn)將公制列表如下：

公制重量與容量表

單位名稱簡寫符號折算

微克Ug(r)1/1000毫克

毫克mg1000微克

克g1000毫克

千克（公斤）Kg1000克

毫升ml1/1000升

升L1000毫升

藥物濃度是指一定量液體或固體制劑所含主藥的分量。常用以下幾種

表ZTQ去：

1、百分濃度：是按每100分溶液或固體物質(zhì)中所含藥物的分數(shù)

來表示濃度，簡寫為％。由于藥物或溶液的量可以用體積或重量表示,

因而有三種不同的表示百分濃度的方法：

(1)重量/體積(W/V)法：即每100毫升溶液中含藥物的克數(shù),

此法最常用，不加特別注明的藥物％濃度即指此法。

(2)重量/重量(W/W)法：即每100克制劑中含藥物的克數(shù)，

適用于固體、半固體藥物。

(3)體積/體積V/V)法:即每100毫升溶液中含藥物的毫升數(shù)，

適用于液體藥物。如消毒用75%乙醇，即為100毫升中含無水乙醇

75毫升。

2、比例濃度：常用于表示稀溶液的濃度。

3、克分子濃度(M):一升溶液中所含溶質(zhì)的克分子數(shù)稱為該溶

液的克分子濃度。

4、克當量濃度(N):一升溶液中含有溶質(zhì)的克當量數(shù)稱為該溶

液的克當量濃度。

劑量換算：

(1)動物實驗所用藥物的劑量，一般按mg/Kg(或g/Kg)計算，

應用時須從已知藥濃度換算出相當于每公斤體重應注射的藥液量

(ml),以便于給藥。

(2)在動物實驗中有時須根據(jù)藥物的劑量及某種動物給藥途徑

的藥液容量，然后配制相當?shù)臐舛纫员阌诮o藥。

第五節(jié)實驗動物的麻醉方法

一、麻醉方式

1、吸入麻醉法

常用藥物為乙醛。在玻璃容器底部鋪以飽浸乙醛（5~10ml）的

脫脂棉。將實驗動物放在該容器內(nèi)的網(wǎng)狀隔板上，蓋上蓋（密閉），

經(jīng)20s或30s的時間動物即進入麻醉狀態(tài)。如需要較長時間麻醉，

可把浸有乙醛的棉球放在動物的鼻口處，進行追加麻醉。

此法適用于麻醉小鼠、大鼠和家兔。

2、注射麻醉法

常用麻醉藥有戊巴比妥鈉、巴比妥鈉、苯巴比妥鈉、硫噴妥鈉等。

小鼠、大鼠和豚鼠常采用腹腔注射進行全身麻醉。狗、貓、兔等動物

既可腹腔注射麻醉，也可靜脈注射麻醉。（具體劑量見下表：）

注射麻醉藥物的用法與用量

給藥途藥液濃醫(yī)學檢驗網(wǎng)

動物劑量（mg/kg）維持時間（h）

徑度

戊巴比妥狗貓ivip3%301—4

鈉兔

ip3%451?1?2

硫噴妥鈉鼠

ivip2.5%?5%20-501/4?1/2

狗貓

ip2.5%?5%50?801/4?1/2

烏拉坦兔鼠

ivip10%10002?4

氯醛糖狗兔ip10%13002?4

鼠ivip2%50?805?6

狗貓ivip2%50?805?6

兔鼠

注：iv靜脈注射ip腹腔注射

二、注意事項

1、配制注射用麻醉劑，一般應用蒸儲水，有些可用生理鹽水。

配制巴比妥類溶液，使用煮開冷卻的蒸儲水可保持較長時間，貯藥瓶

應密閉緊塞，以防空氣進入產(chǎn)生沉淀；硫噴妥鈉溶液不穩(wěn)定，應在臨

用前配制；烏拉坦溶液稍加溫則藥效更好。

2、動物麻醉一般以眼瞼、角膜、瞳孔和趾反射作為觀察麻醉深

度的指標。

3、靜脈注射速度要均勻，不宜太快，否則可因抑制呼吸而使動

物死亡。

4、麻醉藥劑量與動物品種及健康狀況有關(guān)，藥量要準確，濃度

要適中，冬季麻醉藥液應加溫到接近動物體溫水平。

5、麻醉深度不夠時，必須經(jīng)一定時間才能補足麻醉劑。補加劑

量一次不宜超過原注射量的

20%~25%O

第六節(jié)實驗動物的采血方法

在中藥藥理（藥理）學實驗中，常需要采實驗動物的血液，以作

常規(guī)檢驗或生化及化學分析，因此必須掌握正確的采血技術(shù)，一次采

血過多或連續(xù)多次采血都可影響動物健康，造成貧血或?qū)е滤劳?，?/p>

予注意。

一、小鼠、大鼠的采血法

1、剪尾采血：需血量很少時常用本法。動物麻醉后，將鼠尖剪

去約5mm，從尾根部向尾尖部按摩，血自尾尖流出，若事先將鼠尾浸

在45Y水中數(shù)分鐘，使尾部血管充盈，可采到較多的血。取血后用

棉球壓迫止血。此法可反復多次取血，小鼠每次可取0.1ml,大鼠可取

0.3~0.5mlo

如不麻醉，應將動物裝入固定筒內(nèi)，按上法操作取血。但在清醒

狀態(tài)下，常采不到所需血量。

2、眼眶后靜脈叢采血：取長7~10cm的玻璃毛細管（內(nèi)徑約

1mm）,另端漸擴大呈喇叭形，將其尖端折斷，使其斷端鋒利。預先將

玻璃管浸入1%肝素溶液，取出干燥。采血時，左手（拇指及示指）

抓住鼠兩耳之間的皮膚，使鼠頭部固定，并輕輕壓迫頸部兩側(cè)，阻礙

頭部靜脈血液回流，使眼球充分外突。右手持毛細管或配有磨鈍的7

號針頭的1ml注射器沿內(nèi)眥眼眶后壁向喉頭方向刺入刺入深度：

小鼠、大鼠稍旋轉(zhuǎn)毛細管，血液即流入其中。

2~3mm4~5mmo

取血完畢拔出毛細管，左手放松出血即停止。

3、眶動脈和眶靜脈采血（也稱摘眼球采血）：左手固定動物，壓

迫眼球使其盡量突出，右手用銀子或止血鉗迅速摘除眼球，眼眶內(nèi)很

快流出血液。此法采血量較多，一般只適用于一次性采血。

4、股靜脈或股動脈采血：麻醉動物背位固定，切開左或右腹股

溝的皮膚，作股靜脈或股動脈分離手術(shù)。注射針頭（7號或8號）刺

入血管抽血。若需要連續(xù)多次取血，則針刺采血部位盡量靠遠心端。

5、斷頭取血：剪掉鼠頭，立即將鼠頸朝下，提起動物，將血滴

入備好的容器中。

二、家兔的采血法

1、耳緣靜脈采血：將家兔固定，剪去擬采血耳殼上的毛，用電

燈照射或用二甲苯棉球涂擦耳殼，使血管擴張,再用乙醇將二甲苯拭

凈。然后以粗針頭刺入靜脈取血，或直接刺破血管取血。采血完畢,

用干棉球壓迫止血，如血不易止住，可用木夾夾耳殼10~20min。

2、心臟采血：將家兔背位固定，在左胸第二至第四肋間剪一處

毛，以碘酒和乙醇消毒，然后用7號針頭（帶有10ml注射器）在心

跳最明顯處作穿刺，針頭刺入心臟后即有血液涌入注射器或者邊穿刺

邊抽，直至血液流入注射器。所得所需血量后，立即將針頭拔出。

3、月殳動脈采血：將家兔背位固定，一手拉直動物后肢，一手持

注射器在血管搏動明顯處，將帶有注射器的針頭刺入股動脈，若操作

正確，鮮紅色血液即流入注射器。抽血完畢，迅速拔出針頭，用干棉

球壓迫止血2~3min。

4、耳中央動脈取血：將兔置于兔固定筒內(nèi)，用二甲苯涂兔耳中

央較粗、顏色較鮮紅的中央動脈，使其擴張。一手固定兔耳，一手持

注射器，于中央動脈的末端向心方向刺入，血液即進入針管。取血完

畢后壓迫止血。

第七節(jié)實驗動物的處死方法

實驗結(jié)束后，常須將動物處死，常用的處死方法有：

1.頸椎脫臼法

此法常用于小鼠。用手指或銀子壓住小鼠的后頭部，另一手捏住

鼠尾用力向后上牽拉，使之頸椎脫臼，立即死亡。

2.空氣栓塞法

此法常用于家兔的處死。用注射器將空氣快速注入靜脈,可使動

物立即死亡。T殳注入空氣

10~20mlo

3.打擊法

此法適用于較小的動物。抓住動物的尾部，提起，用力敲擊動物

頭部，或用木錘打擊動物頭部，致使動物死亡，如家兔、大鼠和小鼠

等。

4.大量放血法處死

小鼠可采用摘眼球大量放血致死。

5.藥物吸入致死

吸入苯、乙醛、氯、二氧化碳、一氧化碳均可使動物死亡。

第三章中藥藥理實驗研究的基本要求

第一節(jié)中藥藥理實驗設計的基本知識

一、中藥藥理實驗設計的重要性

中藥藥理研究首要的問題，就是對實驗研究的周密設計，因為實

驗設計是實驗過程的依據(jù)，是實驗數(shù)據(jù)處理的前提，也是提高實驗研

究質(zhì)量的一個重要保證。嚴密而合理的實驗設計，不但可對實驗結(jié)果

和誤差有比較準確的估計，最大限度地獲得豐富而可靠的資料，而且

還可減少人力，節(jié)省物力和時間，提高工作效率，避免因?qū)嶒炘O計不

當，造成人力、物力的浪費，甚至全功盡棄的不良結(jié)果。因此，實驗

研究設計，從中藥藥理實驗研究過程來看，具有非常重要的意義。

二、實驗設計的內(nèi)容

1、明確研究目的和意義：實驗設計，首先應考慮研究目的和意

義，根據(jù)研究的中心問題，進行實驗內(nèi)容設計，做到心中有數(shù)，有的

放失。

2、確定實驗組和對照組：實驗組和對照組之間除了處理不同，

其他條件均應等同。保持實驗可比性的原則。在新藥審批辦法中規(guī)定,

新藥的主要藥效作用各項實驗均應有空白對照和已知藥物對照。藥理

試驗結(jié)果需經(jīng)統(tǒng)計學處理。

3、確定實驗方法、項目和指標：要有明確的規(guī)定和說明，要注

意選擇能反映被研究問題的本質(zhì)的關(guān)鍵指標。藥理作用及其機理能用

客觀方法定性地加以測量，取得準確可靠的數(shù)據(jù)。

4、確定實驗對象的數(shù)量:中藥藥理實驗研究對象包括正常動物、

麻醉動物及病理模型；既有整體體內(nèi)試驗，也有離體器官、組織或細

胞體外試驗等。盡量研究各種接近中醫(yī)臨床證候的動物病理模型，按

中醫(yī)藥治則，觀察中藥藥理與療效，但也不排除對正常動物或離體器

官等的作用分析。由于動物實驗和臨床觀察畢竟有一定差別，因此考

慮用不同動物多種方法測試，往往是必要的。要根據(jù)實驗目的、方法

的指標的要求決定實驗動物、樣本及數(shù)量、計量資料，一般小動物（大、

小鼠）每組8—12只，較大動物（兔、狗）每組5—8只是基本的，總

量應符合統(tǒng)計要求。

5、資料整理和統(tǒng)計：將紀錄的資料作為必要的分析、整理，經(jīng)

過恰當?shù)慕y(tǒng)計分析，作出結(jié)論。

三、實驗設計的原則

實驗設計的三大原則：對照、重復和隨機。

L對照：比較研究是科實驗不可少的條件，沒有比較，不難以

鑒別，也就缺乏科學性，所以實驗設計必須設立對照組。而對照組與

實驗組之間除用以實驗的藥物，處理的區(qū)別之外，其他條件如實驗動

物、方法、儀器、環(huán)境及時間等應相同。動物的種屬、品系、性別、

窩別、年齡、體重、健康狀況等方面盡量一致以減少誤差。一般將"齊

同對比"歸納為"同時、同地、同環(huán)境、同種、同重、同批號”等幾

個方面。

根據(jù)實驗研究的內(nèi)容不同，可選用不同的對照形式，常用的方法

有下歹I」4種：

(1)空白對照：指在不加任何處理的條件下進行觀察對照。

(2)假處理對照：即除不用被研究的藥物外，對照組的動物要經(jīng)

受同樣的處理，如給予生理鹽水或不含藥物的溶酶。又稱"陰性對照"O

(3)標準對照：指以已知經(jīng)典藥物在標準條件下與實驗藥進行對

照。又稱"陽性對照"o必要時可設兩個作用機制不同的陽性對照藥。

(4)組間對照：系在實驗組間分幾個劑量組互為對照進行對比,

以便說明量效關(guān)系或藥效的劑量依賴性。一般設2—3個劑量組。

另外，也可用自身作用給藥前后對比者，但最終還是需要作組間對照

來說明問題。

2、重復：能在類似條件下，把實驗結(jié)果重復出來，才算是可靠

的實驗，重復實驗除增加可靠性外，也可了解實驗變異情況。

3、隨機：就是按照機遇均等的原則來進行分組。其目的是使一

切干擾因素造成的實驗誤差減少,而不受實驗者主觀因素或其他偏性

誤差的影響。隨機化的手段可采用編號卡片抽簽法，隨機數(shù)字表或采

用計算器的隨機數(shù)字鍵。近年來提倡“均衡下的隨機"，即先將能控

制的主要因素(如體重、性別等)先行均衡地歸類分檔，然后在每一

檔中隨機地取出等量動物分配到各組，使那些難控制因素(如活潑、

饑飽、疲勞和度及性周期等)得到隨機化的安排。

第二節(jié)實驗數(shù)據(jù)的整理與統(tǒng)計方法

中藥藥理（藥理）實驗主要是通過動物理化實驗來認識藥物作用

的特點和規(guī)律，其實驗觀測到的數(shù)據(jù)資料按其實驗指標的性質(zhì)，分為

質(zhì)反應（計數(shù)）資料和量反應（計量）資料兩大類。

一、量反應資料

實驗數(shù)據(jù)通過測量而得，以計量數(shù)字的多少來表示。如血壓、心

率、血細胞數(shù)、電刺激閾值等，也可用實測變化比值或變化率作為測

量資料，如血壓升降數(shù)值，心率和呼吸增減次數(shù)、尿量增減、血糖升

降以及血紅蛋白升降等數(shù)值;評分分值的半定量資料也屬計量資料范

疇。

量反應資料的特點是每一個觀察對象可得一個定量的數(shù)據(jù)，所以

信息量豐富。量反應資料的統(tǒng)計分析最常用t檢驗，可用下列公式計

算：

例數(shù)相等時:

例數(shù)不等時：------------------------

通常以均數(shù)口乍為一組數(shù)據(jù)的集中性參數(shù),以標準差S作為其離

散性參數(shù)，第三個參數(shù)是該組例數(shù)(n),三個參數(shù)常寫成口士s(n)的形

式。其中，2是總和的數(shù)學符號，2X是各實驗數(shù)據(jù)X的總和，衣是X

平方的總和，QX)2是X總和的平方。

t值法的判斷標準為：算出t值時，按自由度f(f=m+n2-2)從t

值表中查出to.O5、Sol、to.OOl值，與實算值比較：

如t>to,ooi,則PV0.001,差別有非常非常顯著意義

如t>Soi,則PV0.01,差別有非常顯著意義

如t>to.o5,貝iJP<0.05,差別有顯著意義

如t<to.05,WJP>0.05,差別無顯著意義

例如，某一試驗測得甲、乙兩用藥組藥后血壓降低值如下表數(shù)據(jù),

試分析結(jié)果，作出結(jié)論。

各組用藥后血壓降低值（mmHg）

甲藥組2815301413182022共8例(m=8)

乙藥組3034421931273438共8例(n2=8)

甲藥組均額

標準差均數(shù)

乙藥組均數(shù)=31.8mmHg標準差=7.00mmHg

自由度(

f)=ni+n2-2=8+8-2=14

查t值表Soi=2.977,Sooi=4.14O

得to.oi<t<to.ooi；故P<0.01,差異有非常顯著意義,

結(jié)論為：t檢驗說明乙藥的降壓作用確比甲藥強。

此外，對量反應（計量）資料的統(tǒng)計方法還有配對t值法、參比

差值法、簡化方差分析法等，需用時可參閱其他統(tǒng)計學參考書。

二、質(zhì)反應資料

實驗結(jié)果只有質(zhì)的區(qū)別，數(shù)據(jù)是通過計數(shù)（即陽性反應的動物數(shù)）

而獲得的，如動物死亡或存活；某反應的出現(xiàn)或不出現(xiàn)；臨床治療中

的痊愈、顯效、有效、無效等。質(zhì)反應通常用出現(xiàn)率來表達，可用百

分率型，小數(shù)型。為了進行計算統(tǒng)計分析，例數(shù)不宜過少，一般所用

動物每組至少20只。通常以X2（卡方）法進行檢驗。公式如下：

式中X2讀作卡方；a、b、c、d是兩組陽性數(shù)和陰性數(shù)所組成的四格

表中的例數(shù)，n是總例數(shù)。

例如：甲藥組50人，有效35人；乙藥組50人，有效25人,

先排列出四格表如下:

有效無效總計

甲藥組35(a)15(b)50(a+b)

乙藥組25(c)25(d)50(c+d)

共計60(a+c)40(b+d)100(n)

代入上式

查Xz值表（四格表的自由度恒等于D,得0.05的機率點為3.841,

3.375<X2O.O5，故P>095,差別無顯著意義。

本方法最常用。此外，質(zhì)反應資料的統(tǒng)計分析方法還有配對X?

法，簡化直接概率法、參比值法等，需用時可參閱其他統(tǒng)計學參考書。

附：t值表與X2值表

t值表

幾率(P)幾率（P）

自由度0.050.001自由度0.050.001

0.010.01

112.70663.657636.619182.1012.8783.922

24.3039.92531.598192.0932.8613.883

33.1825.84112.924202.0862.8453.850

42.7764.6048.610212.0802.8313.819

52.5714.0326.869222.0742.8193.792

62.4473.7075.959232.0692.8073.767

72.3653.4995.408242.0642.7973.745

82.3063.3555.041252.0602.7873.725

92.2623.2504.781262.0562.7793.707

102.2283.1694.587272.0522.7713.690

112.2013.1064.437282.0482.7633.674

122.1793.0554.318292.0452.7563.659

132.1603.0124.221302.0422.7503.646

142.1452.9774.140402.0212.7043.551

152.1312.9474.073602.0002.6603.460

162.1202.9214.0151201.9802.6173.373

172.1102.8983.965oo1.9602.5763.291

X2值表

幾率(P)幾率(P)

自由度0.050.001自由度0.050.001

0.010.01

13.8416.63510.8281626.29632.00039.252

25.9919.21013.8161727.58733.40940.790

37.81511.34516.2661828.86934.80542.312

49.48813.27718.4671930.14436.19143.820

511.07015.08820.5152031.41037.56645.315

612.59216.81222.4582132.67138.93246.797

714.06718.47524.3222233.92440.28948.268

815.50720.09026.1252335.17541.63849.728

916.91921.66627,8772436.41542.98051.179

1018.30723.20929.5882537.65244.31452.618

1119.67524.72531.2642638.88545.64254.052

1221.02626.21732.9092740.11346.96355.476

1322.36227.68834.5282841.33748.27856.893

1433.68529.14136.1232942.55749.58858.301

1524.99630.57837.6973043.77350.89259.703

第四章基本實驗項目

實驗一馬錢子的急性毒性試驗（改進寇氏法）

【目的】

1、學習中藥急性毒性試驗的方法，掌握LD50的測定方法。

2、觀察馬錢子的毒性反應。

【原理】

急性毒性試驗是指受試動物在一次大劑量給藥后所產(chǎn)生的毒性

反應和死亡情況。藥物毒性的大小，常用動物的致死量來表示，因為

動物生與死的生理指標較其他指標明顯、客觀、容易掌握。致死量的

測定也較準確。在測定致死量的同時，還應仔細觀察動物是否出現(xiàn)聳

毛、倦臥、耳殼蒼白或充血、突眼、步履蹣跚、肌肉癱瘓、呼吸困難、

昏迷、驚厥、大小便失禁等不良反應。

致死量的測定常以半數(shù)致死量為標準。半數(shù)致死量是指能夠引起

試驗動物一半死亡的劑量，即藥物致死量對數(shù)值,用符號LD50表示。

由于LD50的測定較簡便、可靠，而且穩(wěn)定，現(xiàn)已成為標志動物急性

中毒程度的重要常數(shù)。LD50測定的方法有多種，如Bliss法、改進

寇氏法、簡化機率單位法、累積插值法、機率單位-加權(quán)直線加歸法

等等。以上方法雖各有特點，但都有共同的要求：

（1）動物：均選用體重17~22g健康小鼠（同次試驗體重相差

不得超過4g）,或選用體重120~150g（同次試驗體重相差不得超

過10g）健康大鼠作實驗動物。性別相同或雌雄各半。

(2)給藥途徑：要求采用兩種給藥途徑，其中必須有一種與臨床

所采用的相同。溶于水的藥物尚須測定靜脈注射的值得提出

LD50o

的是，臨床上雖然不用腹腔注射，但動物實驗因腹腔注射給藥方便,

吸收迅速，頗為常用。若供試藥物在腹腔內(nèi)不引起強烈刺激或局部變

化(如纖維性病變等)，那么嚙齒類動物腹腔注射的LD50,參數(shù)很接

近于靜脈給藥的口服制劑無法通過注射給藥途徑時，可只用

LD50o

胃腸給藥。

(3)試驗周期和觀察指標：給藥后至少觀察7天。觀察期間應逐

日記錄動物的毒性反應情況和死亡動物的分布。

(4)正式試驗前，均須先用少量動物進行預試試驗，大致測出受

試藥物引起0%和100%死亡率的致死量范圍，然后安排正式試驗。

正式試驗組數(shù)不得少于三個劑量組，一般選用4~5個劑量組，每組

動物數(shù)為10~20只。

(5)報告LD50時需注明實驗動物的種屬及品系、性別、體重范

圍、給藥途徑及每個劑量組動物數(shù)等，還需注明受試藥物的配制方法、

給藥劑量、各組劑量間的比值(一般以0.65~0.85為宜)、給藥容積、

觀察時間及計算方法。還須標出LD50的95%可信限。

【動物】小鼠

【藥品】馬錢子水煎液

【器材】注射器、灌胃針頭、鼠籠

【方法】

1、預試實驗：預試實驗目的是為了找出引起動物0%（Dn）和

100%（Dm）死亡的劑量，以便安排正式實驗。預試實驗一般采用少

量動物（6~9只小鼠）進行，將動物隨機分為3組，組間劑量比值一

般以1:0.5或1:0.7為宜。灌服或腹腔注射量以0.2ml/10g體重

為度。預試實驗應進行到找出Dn和Dm后方可安排正式實驗。

2、正式實驗：在預試實驗測得Dn和Dm的劑量范圍內(nèi)設4~6

個劑量組，最多10組。最理想的結(jié)果是使LD50的上下各有2~3

組。組數(shù)愈少，準確性愈差。各劑量組的動物要求相等，至少10只

動物（分組時應注意分層隨機均勻化的原則）。本實驗要求最大反應

率為100%,最小反應率為0%,或至少反應率接近100%或0%。

組間劑量比值（1:K）,常用1:0.8或1:0.75。如實驗中出現(xiàn)相鄰

劑量有重復的100%和0%反應率時，應將靠邊的組棄去不計，使大

劑量組只有一個100%的反應率，小劑量組也只有一個0%的反應率。

分組完畢和各組劑量算出后，分組灌服或注射不同劑量的受試藥物。

為能得到理想的結(jié)果，實驗最好從中間劑量開始，以便從最初幾個劑

量組動物接受藥物后的反應來判斷兩端劑量是否合適,便于調(diào)整劑量

和組數(shù)。為了提高實驗的精確度和節(jié)省藥物，受試藥物可按"低比稀

釋法"配置。即使每只動物的用藥體積相等（0.2ml/10g）,而溶質(zhì)

不等。給藥后逐日觀察并記錄中毒反應、死亡率和死亡情況。

【結(jié)果】按表填寫數(shù)據(jù)

馬錢子水煎液對小鼠死亡率的影響

組別劑量g/kg(d)Logd(X)死亡數(shù)死亡率（p）p2P_P2

1

2

3

4

公式1:(logLD50)X50=Xm-i(ZP-05)

則LD50=log1X50

公式2:

公式3:LD50的95%可信限=lgi（X50±1.96SX50）

LD50的平均可信限=LD50±（LD50高限-LD50低限）/2

Xm:最大劑量組劑量的對數(shù)值

i:相鄰兩組劑量（d）對數(shù)值之差，或相鄰兩組高劑量與低劑量之比

的對數(shù)。

P:各組動物的死亡率，用小數(shù)表示。

ZP:為各組動物死亡率的總和。

n:每組動物數(shù)。

Sx50:logLD50的標準誤。

實驗二柴胡對發(fā)熱家兔的解熱作用

【目的】觀察柴胡注射液對發(fā)熱兔體溫的影響；了解柴胡解熱作用的

特點。

【原理】本實驗采用傷寒副傷寒二聯(lián)菌苗作為致熱原作成實驗性動物

發(fā)熱模型，并以正常兔作為對照，觀察柴胡注射液的解熱特點。

【器材】數(shù)字式肛溫計、磅秤、兔固定架、注射器、棉球

【方法】取健康兔2只，標記稱重，兔架上固定。分別測肛溫兩次,

以均值作為正常體溫。

從甲、乙兩兔耳緣靜脈注射傷寒副傷寒二聯(lián)菌苗lml/kg體重,

待體溫升高超過1℃后(約需0.5~lh),分別按以下安排給藥。

甲兔(發(fā)熱兔)：肌注生理鹽水0.5ml/kg;

乙兔(發(fā)熱兔)：肌注柴胡注射液0.5ml/kg。

給藥后30、60、90、120min分別測試肛溫。

【結(jié)果】將所得實驗數(shù)據(jù)，經(jīng)統(tǒng)計處理后，參見表記錄。

柴胡對家兔體溫的影響℃(D±SD)

組別動物數(shù)(只)正常致熱后lh給藥后(min)

306090120

甲

乙

【注意】

(1)兔應健康，雌性無孕，體溫正常(38.5~39.5℃)O

(2)每次測溫前應在肛溫計前部涂以少許液體石蠟，測溫時操作

應盡可能輕柔。

(3)使用測溫計時先按下開關(guān)按鈕插入肛門深度為4~5cm。

當顯示器上的"°C標記停止閃爍時(約需lmin)取出。記錄體溫后

關(guān)閉電源。

(4)本實驗是最常用的方法，其特點是致熱快，維持時間短。家

兔體溫較恒定。此外近年來有直接用內(nèi)生性致熱源作為致熱劑進行實

驗，效果較好。

【思考題】分析實驗結(jié)果后，說明柴胡解熱作用的特點。

實驗三生大黃對小鼠排便時間和數(shù)量的影響（炭末法）

【目的】觀察生大黃對小鼠腸道炭末推進時間、數(shù)量的影響。

【原理】運用色素流動法，以黑色炭末為指示劑，以排黑便的時間、

性狀和數(shù)量為指標，可直接觀察生大黃對腸道推進功能的影響。生大

黃瀉下通便，可使腸蠕動加速，炭末推進快，排黑便時間短，次數(shù)多，

成形差。

【器材】小鼠灌胃針頭、1ml注射器、鐘罩、濾紙、鼠籠、臺秤、棉

簽、記時鐘、銀子。

【藥品】生大黃水煎液lg/ml（含炭末O.lg/ml）、炭末生理鹽水混

懸液O.lg/ml

【動物】小白鼠

【方法】取禁食20~24h體重相近的小鼠6只（腹瀉者剔去），隨機

分成2組，標記。2組分別灌服上述兩種炭末混懸液0.5ml/只。各

鼠分置于鋪有濾紙的鐘罩內(nèi)進行觀察，記錄小鼠出現(xiàn)黑便的時間、性

狀和數(shù)目，以及稀糞沾染肛門情況。連續(xù)觀察4h,每組3只小鼠取

平均值，然后綜合全實驗室結(jié)果，進行比較。

【結(jié)果】按表記錄分析。

生大黃對小白鼠排便的影響（□士SD）

組另U開始黑便時間（min）4h內(nèi)排黑便數(shù)（粒）黑便性狀

生理鹽水組

生大黃組

【注意】

(1)吸藥液前，應將藥液搖勻，以保證藥量及炭末量準確。

(2)排黑便的記數(shù)和記時，以開始排出黑便為準。

(3)記數(shù)黑便時應隨時將小鼠排出的已記數(shù)的黑便清除，以免影響記

數(shù)的準確性。

(4)實驗小鼠在禁食與實驗過程中應讓其飲水，否則影響實驗結(jié)果。

［附］生大黃制劑的制備：取生大