細(xì)菌對抗菌藥物敏感試驗

細(xì)菌對抗菌藥物敏感試驗

antimicrobialsuceptibilitytest

AST第一節(jié)抗菌藥物一.抗菌藥物能抑制或殺死微生物有一定的毒副作用有一定的抗菌譜細(xì)菌可對其產(chǎn)生耐藥性變異抗生素:

?-內(nèi)酰胺類抗生素:青霉素,頭孢菌素,其他?-內(nèi)酰胺類抗生素,

?-內(nèi)酰胺類酶抑制劑氨基糖苷類大環(huán)內(nèi)酯類二.常用抗菌藥物種類抗菌藥物磺胺藥喹諾酮類呋喃類甲硝唑第二節(jié)耐藥性細(xì)菌不能被常規(guī)治療劑量達(dá)到的藥物血濃度殺死或抑制稱藥濃度MIC不同菌株血藥濃度治療劑量中毒劑量耐藥株敏感株一.概述耐藥性形成是因為細(xì)菌的基因突變或獲得了耐藥基因耐藥性可在株間,種間傳遞抗菌藥物僅對耐藥菌起選擇作用細(xì)菌對抗菌藥物的耐藥性可以是多重的細(xì)菌對結(jié)構(gòu)相似藥物間,可有交叉耐藥性二.耐藥性產(chǎn)生機制?-內(nèi)酰胺類酶形成:破壞?-內(nèi)酰胺類藥物,有多種鈍化酶:使抗生素失活,如氨基糖苷類靶位改變:形成新的,低親合力的青霉素結(jié)合蛋白滲透障礙或外排作用:使藥物不易進(jìn)入菌細(xì)胞內(nèi)代謝途徑改變:繞過藥物作用環(huán)節(jié)第三節(jié)細(xì)菌對抗菌藥物的敏感性試驗一.藥敏試驗?zāi)康闹笇?dǎo)被試患者用藥某一地區(qū)的耐藥性調(diào)查鑒定細(xì)菌新藥評價二.藥敏試驗原理將細(xì)菌接種在無被測藥拮抗劑并能提供細(xì)菌良好生長的環(huán)境中加入一定量抗菌藥物觀察細(xì)菌生長被抑制情況三.被測藥物選擇按菌種和抗菌譜同類藥物選一個按醫(yī)生要求按醫(yī)院感染科規(guī)定四.藥敏試驗方法

1.稀釋法可在液體或固體培養(yǎng)基中進(jìn)行用培養(yǎng)基對抗菌藥物作一系列稀釋加入一定量細(xì)菌孵育后讀取MIC轉(zhuǎn)種未生長管并計數(shù)細(xì)菌后讀取MBC藥502512.56.33.21.60.80.40加入等量細(xì)菌,孵育18-24h結(jié)果－－－－+++++

12345678C計數(shù)0105368760/ml48萬*

MIC6.3μg/mlMBC12.5μg/ml(＜0.1%×480000＝480)*接種時菌數(shù)μg/ml藥502512.56.3μg/ml

3.21.60.8C

生長MIC

1＜0.82=6.33=254=12.55=1.6μg/ml12345也可用單一濃度進(jìn)行。如對甲氧西林,萬古霉素等耐藥性測定或用兩個濃度進(jìn)行,如區(qū)分中介和耐藥濃度也可用機器進(jìn)行附:血清抗菌活性測定將患者血清作系列稀釋測自身感染部位分離出的病原菌的最低抑菌和殺菌效價2.紙片瓊脂擴散法(K-B法)以一定量細(xì)菌在平板表面緊密接種,讓其長成均勻的菌苔置數(shù)張含定量抗菌藥物的紙片于其上,其間需有一定間距孵育后測定抑菌環(huán)直徑抑菌環(huán)大小和MIC的高低呈負(fù)相關(guān)MIC漸高抑菌環(huán)漸大血藥濃度耐藥敏感附:血清抗菌藥物濃度測定按紙片瓊脂擴散法進(jìn)行用不同量抗菌藥物的抑菌環(huán)直徑對濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線測定血清抑菌環(huán)后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線查到濃度漸高抑菌環(huán)漸大藥濃度3.E試驗結(jié)合稀釋法與紙片瓊脂擴散法紙條上有藥物的濃度梯度在紙條與抑菌環(huán)交界處讀取抑菌濃度(IC)IC抑菌環(huán)藥物擴散范圍含藥紙條藥濃度4.聯(lián)合抗菌試驗觀察兩種抗菌藥物間的相互關(guān)系:協(xié)同,相加,無關(guān),拮抗可用兩藥分別稀釋后混合的方法法測MIC或MBC讀取FIC或用臨近置兩藥紙片的瓊脂擴散法進(jìn)行,觀察抑菌圈的形狀FIC的讀取

A藥聯(lián)合時的MICB藥聯(lián)合時的MICFIC=+A藥單測時的MICB藥單測時的MIC<0.5協(xié)同0.5~1相加1~2無關(guān)>2拮抗6.雙相紙片試驗用于檢測ESBL(extendedspectrumβlactam)該酶為克拉維酸抑制按紙片瓊脂擴散法進(jìn)行,中心貼阿莫西林/克拉維酸,周邊貼頭孢曲松等作為指示孵育后,如抑菌環(huán)向中心擴大,為陽性也可分別測量抑菌環(huán),相差5mm以上為陽性5.?-內(nèi)酰胺類酶檢測碘淀粉測定法:被測菌置青霉素溶液中,室溫30min,加淀粉和碘液,呈藍(lán)色,震搖,若酶