DB42-T 2246.1-2024 實(shí)驗(yàn)用貓 第1部分：微生物學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)

DB42Part1：Microbiologi湖北省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I V 2 3 3 4 5 5 6 7 8 9 本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件是DB42/T2246《實(shí)驗(yàn)用貓》的第1部分。DB42/T2246請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院、國藥集團(tuán)動(dòng)物保健股份有限公司、湖北逸摯誠生物科技有黎炎梅、張金明、王一茹、陳平平、楊祖麗、楊倩、譚無雙、V術(shù)等相關(guān)產(chǎn)業(yè)發(fā)展、保障公共安全等提供技術(shù)DB42/T2246《實(shí)驗(yàn)用貓》旨在建立實(shí)驗(yàn)用貓微生物學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)、寄生蟲學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)以及——第1部分：微生物學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)。目的在于規(guī)定標(biāo)、監(jiān)測(cè)程序、監(jiān)測(cè)方法、監(jiān)測(cè)規(guī)則、結(jié)果判定、判定結(jié)論等——第2部分：寄生蟲學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)。目的在于規(guī)定實(shí)驗(yàn)用貓的等級(jí)分類、寄生蟲——第3部分：飼養(yǎng)與管理。目的在于規(guī)定實(shí)驗(yàn)用貓的環(huán)境與設(shè)施、人員1實(shí)驗(yàn)用貓第1部分：微生物學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)GB/T14926.6實(shí)驗(yàn)動(dòng)物支氣管GB/T14926.50-2001實(shí)NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范3.13.2普通級(jí)實(shí)驗(yàn)用貓conventional（CV）experimen3.3無特定病原體級(jí)實(shí)驗(yàn)用貓specificpathogenfree（SPF）experi4等級(jí)分類2實(shí)驗(yàn)用貓按微生物與寄生蟲控制等級(jí)分類，包括普通級(jí)實(shí)驗(yàn)用貓和無特定病原體5.1.1實(shí)驗(yàn)用貓應(yīng)體態(tài)豐滿、發(fā)育正常、毛濃密有光澤、眼睛明亮活潑、反應(yīng)靈敏、食欲良好。b)耳：耳道無分泌物溢出，耳廓無缺陷。在安靜狀態(tài)下，對(duì)聲響反應(yīng)靈敏；c)鼻：無漿液性、粘液性及膿性分泌物滲出；▲▲▲▲●皮膚病原真菌Pathogenicdermalfungi○級(jí)●●●●●貓免疫缺陷病毒Felineimmu●○3●○支氣管鮑特桿菌Bordetellab●●動(dòng)物編號(hào)外觀檢查鼻拭子、肛拭子（或新鮮糞便）耳后、背部毛發(fā)或皮屑鼻拭子、肛拭子（或新鮮糞便）耳后、背部毛發(fā)或皮屑采血樣本檢測(cè)結(jié)果判定檢測(cè)結(jié)論4貓皰疹病毒1型8.2取樣要求8.2.2取樣數(shù)量：每個(gè)實(shí)驗(yàn)用貓生產(chǎn)繁殖單元，5>5008.3取樣、送檢8.3.4樣本要求有明顯標(biāo)識(shí)，寫明檢品名稱、動(dòng)物品種、等級(jí)、數(shù)量及檢測(cè)項(xiàng)目等內(nèi)容，安全送達(dá)實(shí)8.4檢測(cè)項(xiàng)目分類8.4.1必須檢測(cè)項(xiàng)目：指在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)用貓質(zhì)量8.4.2必要時(shí)檢測(cè)項(xiàng)目：指相關(guān)行政部門要求時(shí)、本病流行時(shí)、進(jìn)出口時(shí)，或特定實(shí)驗(yàn)要求時(shí)需要檢9結(jié)果判定在監(jiān)測(cè)的各等級(jí)動(dòng)物中，如有某項(xiàng)指標(biāo)不符合該等級(jí)標(biāo)6根據(jù)vp2基因序列（GenBank:AF015223）設(shè)計(jì):）：）：A.3對(duì)照設(shè)立空白對(duì)照：在擴(kuò)增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙A.4.1反應(yīng)體系A(chǔ).4.2反應(yīng)條件A.6結(jié)果判定陽性對(duì)照出現(xiàn)301bp的目的片段，陰性對(duì)照無條帶，實(shí)驗(yàn)成立；待檢樣品出現(xiàn)301bp目的片段，判定貓泛白細(xì)胞減少癥病毒陽性；未出現(xiàn)301bp目的片段，判定貓泛白細(xì)胞減少癥病毒陰性。7）：）：空白對(duì)照：在擴(kuò)增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙95℃預(yù)變性2min，95℃變性15s，54℃退火30s（熒光信號(hào)采集）；第2到第3步40個(gè)循環(huán)。檢樣品有熒光擴(kuò)增曲線，且Ct值≤35，判定貓皰疹病毒I8）：）：空白對(duì)照：在擴(kuò)增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙判定貓皰疹病毒I型陽性；未出現(xiàn)288bp目的片段時(shí)，判定貓9）：）：空白對(duì)照：在擴(kuò)增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙95℃預(yù)變性2min，95℃變性15s，54℃退火30s（熒光信號(hào)采集）；第2到第3步40個(gè)循環(huán)。檢樣品有熒光擴(kuò)增曲線，且Ct值≤35，判定貓皰疹病毒I根據(jù)ORF2基因序列（GenBank:MZ712）：）：判定貓杯狀病毒陽性；未出現(xiàn)926bp目的片段時(shí)，判定）：）：F.4.1反應(yīng)體系（建議根據(jù)所用逆轉(zhuǎn)錄商品化試劑盒說ng/μL）1μL，模板RNA500F.4.2反應(yīng)條件（建議根據(jù)所用逆轉(zhuǎn)錄商品化試劑盒說16μL體系反應(yīng)條件：42℃反應(yīng)2min。20μL體系反應(yīng)條件：50℃反應(yīng)15min，85℃反應(yīng)95℃預(yù)變性2min，95℃變性15s，54℃）；檢樣品有熒光擴(kuò)增曲線，且Ct值≤35，判定貓皰疹病毒I）：）：）：）：判定貓狂犬病病毒陽性；未出現(xiàn)239bp目的片段時(shí)，判定貓狂犬）：）：判定貓傳染性腹膜炎病毒陽性；未出現(xiàn)223）：）：ng/μL）1μL，模板RNA50016μL體系反應(yīng)條件：42℃反應(yīng)2min。20μL體系反應(yīng)條件：50℃反應(yīng)15min，85℃反應(yīng)2min。95℃預(yù)變性2min，95℃變性15s，58℃）；檢樣品有熒光擴(kuò)增曲線，且Ct值≤35，判定貓皰疹病毒I）：）：判定貓傳染性腹膜炎病毒陽性；未出現(xiàn)172）：）：K.4.1反應(yīng)體系（建議根據(jù)所用逆轉(zhuǎn)錄商品化試劑盒說明K.4.2反應(yīng)條件（建議根據(jù)所用逆轉(zhuǎn)錄商品化試劑盒說明16μL體系反應(yīng)條件：42℃反應(yīng)2min。20μL體系反應(yīng)條件：50℃反應(yīng)15min，85℃反應(yīng)95℃預(yù)變性2min，95℃變性15s，56℃退火30s（熒光信號(hào)采檢樣品有熒光擴(kuò)增曲線，且Ct值≤35，判定貓皰疹病毒I根據(jù)Env基因序列（GenBank:MW731550）：）：判定貓白血病病毒陽性；未出現(xiàn)119bp目的片段時(shí)，判定貓白血根據(jù)Env基因序列（GenBank:MW731550）：）：M.4.1反應(yīng)體系（建議根據(jù)所用逆轉(zhuǎn)錄商品化試劑盒說明書