DB42-T 2246.1-2024 實驗用貓 第1部分：微生物學(xué)等級及監(jiān)測

DB42Part1：Microbiologi湖北省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I V 2 3 3 4 5 5 6 7 8 9 本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件是DB42/T2246《實驗用貓》的第1部分。DB42/T2246請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。藥品監(jiān)督檢驗研究院、國藥集團動物保健股份有限公司、湖北逸摯誠生物科技有黎炎梅、張金明、王一茹、陳平平、楊祖麗、楊倩、譚無雙、V術(shù)等相關(guān)產(chǎn)業(yè)發(fā)展、保障公共安全等提供技術(shù)DB42/T2246《實驗用貓》旨在建立實驗用貓微生物學(xué)等級及監(jiān)測、寄生蟲學(xué)等級及監(jiān)測以及——第1部分：微生物學(xué)等級及監(jiān)測。目的在于規(guī)定標(biāo)、監(jiān)測程序、監(jiān)測方法、監(jiān)測規(guī)則、結(jié)果判定、判定結(jié)論等——第2部分：寄生蟲學(xué)等級及監(jiān)測。目的在于規(guī)定實驗用貓的等級分類、寄生蟲——第3部分：飼養(yǎng)與管理。目的在于規(guī)定實驗用貓的環(huán)境與設(shè)施、人員1實驗用貓第1部分：微生物學(xué)等級及監(jiān)測GB/T14926.6實驗動物支氣管GB/T14926.50-2001實NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運輸技術(shù)規(guī)范3.13.2普通級實驗用貓conventional（CV）experimen3.3無特定病原體級實驗用貓specificpathogenfree（SPF）experi4等級分類2實驗用貓按微生物與寄生蟲控制等級分類，包括普通級實驗用貓和無特定病原體5.1.1實驗用貓應(yīng)體態(tài)豐滿、發(fā)育正常、毛濃密有光澤、眼睛明亮活潑、反應(yīng)靈敏、食欲良好。b)耳：耳道無分泌物溢出，耳廓無缺陷。在安靜狀態(tài)下，對聲響反應(yīng)靈敏；c)鼻：無漿液性、粘液性及膿性分泌物滲出；▲▲▲▲●皮膚病原真菌Pathogenicdermalfungi○級●●●●●貓免疫缺陷病毒Felineimmu●○3●○支氣管鮑特桿菌Bordetellab●●動物編號外觀檢查鼻拭子、肛拭子（或新鮮糞便）耳后、背部毛發(fā)或皮屑鼻拭子、肛拭子（或新鮮糞便）耳后、背部毛發(fā)或皮屑采血樣本檢測結(jié)果判定檢測結(jié)論4貓皰疹病毒1型8.2取樣要求8.2.2取樣數(shù)量：每個實驗用貓生產(chǎn)繁殖單元，5>5008.3取樣、送檢8.3.4樣本要求有明顯標(biāo)識，寫明檢品名稱、動物品種、等級、數(shù)量及檢測項目等內(nèi)容，安全送達實8.4檢測項目分類8.4.1必須檢測項目：指在進行實驗用貓質(zhì)量8.4.2必要時檢測項目：指相關(guān)行政部門要求時、本病流行時、進出口時，或特定實驗要求時需要檢9結(jié)果判定在監(jiān)測的各等級動物中，如有某項指標(biāo)不符合該等級標(biāo)6根據(jù)vp2基因序列（GenBank:AF015223）設(shè)計:）：）：A.3對照設(shè)立空白對照：在擴增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙A.4.1反應(yīng)體系A(chǔ).4.2反應(yīng)條件A.6結(jié)果判定陽性對照出現(xiàn)301bp的目的片段，陰性對照無條帶，實驗成立；待檢樣品出現(xiàn)301bp目的片段，判定貓泛白細胞減少癥病毒陽性；未出現(xiàn)301bp目的片段，判定貓泛白細胞減少癥病毒陰性。7）：）：空白對照：在擴增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙95℃預(yù)變性2min，95℃變性15s，54℃退火30s（熒光信號采集）；第2到第3步40個循環(huán)。檢樣品有熒光擴增曲線，且Ct值≤35，判定貓皰疹病毒I8）：）：空白對照：在擴增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙判定貓皰疹病毒I型陽性；未出現(xiàn)288bp目的片段時，判定貓9）：）：空白對照：在擴增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙95℃預(yù)變性2min，95℃變性15s，54℃退火30s（熒光信號采集）；第2到第3步40個循環(huán)。檢樣品有熒光擴增曲線，且Ct值≤35，判定貓皰疹病毒I根據(jù)ORF2基因序列（GenBank:MZ712）：）：判定貓杯狀病毒陽性；未出現(xiàn)926bp目的片段時，判定）：）：F.4.1反應(yīng)體系（建議根據(jù)所用逆轉(zhuǎn)錄商品化試劑盒說ng/μL）1μL，模板RNA500F.4.2反應(yīng)條件（建議根據(jù)所用逆轉(zhuǎn)錄商品化試劑盒說16μL體系反應(yīng)條件：42℃反應(yīng)2min。20μL體系反應(yīng)條件：50℃反應(yīng)15min，85℃反應(yīng)95℃預(yù)變性2min，95℃變性15s，54℃）；檢樣品有熒光擴增曲線，且Ct值≤35，判定貓皰疹病毒I）：）：）：）：判定貓狂犬病病毒陽性；未出現(xiàn)239bp目的片段時，判定貓狂犬）：）：判定貓傳染性腹膜炎病毒陽性；未出現(xiàn)223）：）：ng/μL）1μL，模板RNA50016μL體系反應(yīng)條件：42℃反應(yīng)2min。20μL體系反應(yīng)條件：50℃反應(yīng)15min，85℃反應(yīng)2min。95℃預(yù)變性2min，95℃變性15s，58℃）；檢樣品有熒光擴增曲線，且Ct值≤35，判定貓皰疹病毒I）：）：判定貓傳染性腹膜炎病毒陽性；未出現(xiàn)172）：）：K.4.1反應(yīng)體系（建議根據(jù)所用逆轉(zhuǎn)錄商品化試劑盒說明K.4.2反應(yīng)條件（建議根據(jù)所用逆轉(zhuǎn)錄商品化試劑盒說明16μL體系反應(yīng)條件：42℃反應(yīng)2min。20μL體系反應(yīng)條件：50℃反應(yīng)15min，85℃反應(yīng)95℃預(yù)變性2min，95℃變性15s，56℃退火30s（熒光信號采檢樣品有熒光擴增曲線，且Ct值≤35，判定貓皰疹病毒I根據(jù)Env基因序列（GenBank:MW731550）：）：判定貓白血病病毒陽性；未出現(xiàn)119bp目的片段時，判定貓白血根據(jù)Env基因序列（GenBank:MW731550）：）：M.4.1反應(yīng)體系（建議根據(jù)所用逆轉(zhuǎn)錄商品化試劑盒說明書