食用菌菌種選擇及菌種標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)技術(shù)課件

河北師范大學(xué)王立安教授一、食用菌菌種有關(guān)概念菌種：由人工方法培育出來的純雙核菌絲體。母種：由食用菌的孢子或者子實體別離而得的最初菌種。原種：將母種擴大到新的培養(yǎng)基上而培育出來的菌絲體。栽培種：由原種再擴大接種一次培養(yǎng)而得，可直接應(yīng)用于生產(chǎn)。菌種老化：是指菌齡過長導(dǎo)致的菌絲代謝能力減弱、出菇能力下降的現(xiàn)象。菌種退化：是指菌種受高溫等逆境因素或病毒感染等致病因素出現(xiàn)的菌種出菇能力下降的現(xiàn)象。

固體菌種和液體菌種

當(dāng)前菌種問題二、國家對菌種管理的相關(guān)規(guī)定從事菌種生產(chǎn)經(jīng)營的單位和個人，應(yīng)當(dāng)取得?食用菌菌種生產(chǎn)經(jīng)營許可證?。僅從事栽培種經(jīng)營的單位和個人，可以不辦理?食用菌菌種生產(chǎn)經(jīng)營許可證?，但經(jīng)營者要具備菌種的相關(guān)知識，具有相應(yīng)的菌種貯藏設(shè)備和場所，并報縣級人民政府農(nóng)業(yè)行政主管部門備案。栽培種?食用菌菌種生產(chǎn)經(jīng)營許可證?由所在地縣級人民政府農(nóng)業(yè)行政主管部門核發(fā)，報省級人民政府農(nóng)業(yè)行政主管部門備案。母種和原種?食用菌菌種生產(chǎn)經(jīng)營許可證?，由所在地縣級人民政府農(nóng)業(yè)行政主管部門審核，省級人民政府農(nóng)業(yè)行政主管部門核發(fā)，報農(nóng)業(yè)部備案。1.生產(chǎn)經(jīng)營母種和原種的條件2.生產(chǎn)經(jīng)營栽培種的條件3.對食用菌菌種生產(chǎn)的規(guī)定4.對食用菌菌種經(jīng)營的相關(guān)規(guī)定菌種經(jīng)營單位和個人應(yīng)當(dāng)建立菌種經(jīng)營檔案，載明菌種來源、貯存時間和條件、銷售去向、運輸、經(jīng)辦人等內(nèi)容。經(jīng)營檔案應(yīng)當(dāng)保存至菌種銷售后2年。銷售的菌種應(yīng)當(dāng)附有標(biāo)簽和菌種質(zhì)量合格證。標(biāo)簽應(yīng)當(dāng)標(biāo)注菌種種類、品種、級別、接種日期、保藏條件、保質(zhì)期、菌種生產(chǎn)經(jīng)營許可證編號、執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)及生產(chǎn)者名稱、生產(chǎn)地點。標(biāo)簽標(biāo)注的內(nèi)容應(yīng)當(dāng)與銷售菌種相符。菌種經(jīng)營者應(yīng)當(dāng)向購置者提供菌種的品種種性說明、栽培要點及相關(guān)咨詢效勞，并對菌種質(zhì)量負責(zé)。5.判斷假菌種、劣質(zhì)菌種的標(biāo)準(zhǔn)具備以下條件之一的為假菌種：〔1〕以非菌種冒充菌種；〔2〕菌種種類、品種、級別與標(biāo)簽內(nèi)容不符的。具備以下條件之一的為劣菌種：〔1〕質(zhì)量低于國家規(guī)定的種用標(biāo)準(zhǔn)的；〔2〕質(zhì)量低于標(biāo)簽標(biāo)注指標(biāo)的；〔3〕菌種過期、變質(zhì)的。6.菌種種性與新品種認定三、優(yōu)良菌種的標(biāo)準(zhǔn)與檢測母種：菌絲粗壯、潔白，生長健壯有力，無任何雜菌；不發(fā)黃，不老化，培養(yǎng)基不失水；培養(yǎng)皿檢測培養(yǎng)無扇變，菌落圓形，邊緣整齊。菌齡掌握在剛長滿斜面即用于擴接原種或繼代培養(yǎng)。原種、栽培種：〔1〕菌絲潔白、無雜菌，棉塞、紙蓋均無霉點，菌絲滿瓶或袋。菌絲長滿瓶或袋后，外表分泌茶色液滴，有少數(shù)原基形成，可視為正常。〔2〕翻開瓶或袋口塞有食用菌獨特的芳香味，無霉味和酸臭味?！?〕隨機挖取一塊菌種，成塊而有韌性、不松散。將菌種塊接到新的培養(yǎng)基上，在25℃下培養(yǎng)，菌種萌發(fā)正常。劣質(zhì)原種、栽培種的表現(xiàn)是菌絲外表出現(xiàn)雜菌斑紋〔拮抗線〕，菌絲細弱，脫壁萎縮，發(fā)黃老化，這樣的原種、栽培種不能用于生產(chǎn)。1.菌種質(zhì)量鑒定菌種鑒定〔6方面〕：純度、長勢、菌齡、均勻度、出菇快慢。出菇試驗是最可靠、最實際的方法。產(chǎn)量高、品質(zhì)好→優(yōu)良菌種。1.母種的引進引種要從有實力，信譽度高的科研單位引種。必須做到：一看試管和瓶上是否貼有標(biāo)簽；二看標(biāo)簽上的菌種名稱、菌種代號、接種時間是否符合所要求的品種；三看試管或菌種瓶內(nèi)菌絲長勢，是否污染或老化；四看管口或瓶口棉花塞是否松脫，管、瓶有無破裂。2.母種質(zhì)量鑒定控制轉(zhuǎn)管次數(shù)，轉(zhuǎn)管2～3次為宜，最多不超過4次?！簿N培養(yǎng)的時間越長，菌齡越大，生活力下降，菌種易老化〕出菇試驗：菌絲生長健壯，出菇快、朵形好、產(chǎn)量高，為優(yōu)良菌種。外觀肉眼鑒定：外表菌絲濃白、粗壯、富有彈性，那么生命力強；菌絲已枯燥、收縮或菌絲自溶產(chǎn)生大量紅褐色液體，那么生活力降低。長勢鑒定：菌絲生長快、整齊，濃而健壯，是優(yōu)良品種。溫度適應(yīng)性鑒定：一般菌類在30℃，高溫型菌在35℃，培養(yǎng)4h，在高溫下，仍能健壯生長，為優(yōu)良菌種；在高溫下，菌絲萎縮，為不良菌種。干濕度鑒定：能在偏干或偏濕培養(yǎng)基上生長良好的菌種，為優(yōu)良菌種。3.原種和栽培種的質(zhì)量鑒定3.1菌種傳代和菌齡應(yīng)在規(guī)定范圍內(nèi)〔1〕用轉(zhuǎn)管在4～5次以內(nèi)的母種生產(chǎn)的原種和栽培種?！?〕一般食用菌的原種和栽培種，在常溫下可保存3個月內(nèi)有效；草菇、靈芝、鳳尾菇等高溫型菌那么保存1個月內(nèi)有效。超過上述期限的菌種，即使外觀健壯，生產(chǎn)上也不使用。3.2原種及栽培種外觀要求〔1〕菌絲生長健壯，絨狀菌絲多，生長整齊?！?〕菌絲已長滿培養(yǎng)基，銀耳的菌種還要求在培養(yǎng)基上分化出子實體原基。〔3〕菌絲色澤潔白或符合該菌類菌絲特有的色澤。〔4〕菌種瓶內(nèi)無雜色出現(xiàn)和無雜菌污染，?！?〕菌種瓶內(nèi)無黃色汁液滲出，反之，說明菌種老化?！?〕菌種培養(yǎng)基不能干縮與瓶壁分開。3.3常見優(yōu)質(zhì)原種和栽培種的性狀〔1〕平菇：菌絲粗壯，濃白，密集，爬壁力強，菌柱斷面菌絲濃白，清香，無異味，發(fā)菌快?！?〕金針菇：菌絲潔白，較粗壯，密集，長絨毛，外觀似細粉狀，培養(yǎng)后期菌種外表易產(chǎn)生菇蕾?！?〕香菇：菌絲潔白，綿毛狀，后期見光易分泌出醬油色液體，呈褐色，有時外表產(chǎn)生小菇蕾。〔4〕雙孢蘑菇：菌絲灰白帶微藍，密集，細絨狀，氣生菌絲少，貼生菌絲在培養(yǎng)基內(nèi)呈細絨狀分布，有特有的蘑菇香味。四、菌種標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)〔一〕標(biāo)準(zhǔn)化制種場地〔二〕母種評價篩選與復(fù)壯〔三〕菌種制備與培養(yǎng)〔四〕菌種保存〔一〕標(biāo)準(zhǔn)化制種場地可參照“Ｕ〞字型房，以方便生產(chǎn)。包括：配料室、滅菌室、冷卻室、接種室、菌種培養(yǎng)室、銷售室以及庫房等。周圍環(huán)境要衛(wèi)生。滅菌室：要求水電平安方便，通風(fēng)良好，空間充足，散熱暢通。冷卻室：潔凈、防塵、易散熱。接種室：要設(shè)緩沖間，防塵換氣性能良好，內(nèi)壁和屋頂光滑，經(jīng)常清洗和消毒。做到空氣潔凈培養(yǎng)室和貯存室：內(nèi)壁和屋頂光滑，便于清洗和消毒。培養(yǎng)室和貯存室墻壁要加厚，利于控溫。菌種檢驗室：水電方便，利于裝備相應(yīng)的檢驗設(shè)備和儀器根本設(shè)備：磅秤、天平、高壓滅菌鍋或常壓滅菌鍋、凈化工作臺、接種箱、調(diào)溫設(shè)備、除濕機、培養(yǎng)架、恒溫箱、冰箱、顯微鏡等及常規(guī)用具，產(chǎn)量大的菌種廠還應(yīng)配備攪拌機、裝瓶裝袋機。高壓滅菌鍋應(yīng)使用經(jīng)有關(guān)部門檢驗的平安合格產(chǎn)品。根本設(shè)施：配料、分裝、滅菌、冷卻、接種、培養(yǎng)等各環(huán)節(jié)的設(shè)施規(guī)模要配套。冷卻室、按種室、培養(yǎng)室和貯存室都要有調(diào)溫設(shè)施?！捕衬阜N評價篩選與復(fù)壯1．菌種復(fù)壯的方法菌種來源：試管斜面種或采用組織別離的試管斜面種。評價篩選與復(fù)壯操作：〔1〕從斜面種中挑取遠離接種點下面的菌絲少許，接種到與試管培養(yǎng)基成分不同的平板培養(yǎng)基中，每一平板可接3-4塊。25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天后，觀察菌落形態(tài)。〔2〕從形態(tài)圓形、規(guī)整，生長旺盛的菌落周邊，在顯微鏡下應(yīng)用顯微操作器把菌絲尖端切下〔可用無菌小刀切取菌落邊緣的菌絲尖端進行別離移植，也可用無菌毛細管截取菌絲尖端單細胞進行純種別離〕，轉(zhuǎn)接到與平板培養(yǎng)基成分不同的平板上。25℃條件下繼續(xù)培養(yǎng)，采用相同操作，對菌種進一步挑選、脫毒、復(fù)壯?！?〕直至菌落呈規(guī)那么圓形，菌絲生長明顯加快。挑取菌落邊緣菌絲，接種到與與平板培養(yǎng)基成分不同的試管斜面中。25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7-10天后，密封試管口，于4℃冷藏箱保存。此為復(fù)壯菌種。圖1.大棕菇提純復(fù)壯圖2.香菇A288提純復(fù)壯圖3.香菇靈仙一號提純復(fù)壯圖4.姬菇P20提純復(fù)壯圖5.蜜環(huán)菌提純復(fù)壯香菇母種脫毒復(fù)壯前發(fā)菌情況香菇母種脫毒復(fù)壯后發(fā)菌情況2.篩選復(fù)壯菌種的檢測方法直接觀察：用肉眼觀察復(fù)壯后試管中菌絲潔白、粗壯，爬壁能力強。顯微鏡檢查：在載玻片上滴一滴蒸餾水，然后挑取少許菌絲置水滴上，讓菌絲體充分展開，蓋好蓋玻片，再置顯微鏡下觀察。也可通過菌絲體染色后鏡檢觀察。復(fù)壯菌種菌絲體應(yīng)粗壯，菌絲節(jié)較長，呈分枝狀；與未復(fù)壯前菌絲節(jié)很短，分枝很濃密，菌絲較纖細形成比照。經(jīng)特殊染色后，應(yīng)能看到雙核及鎖狀聯(lián)合，以確保復(fù)壯后菌絲為雙核菌絲。3.菌絲生長速率測定將復(fù)壯菌種，轉(zhuǎn)接至PDA平板培養(yǎng)基中央，待菌絲形成放射狀菌落后，用直徑0.5cm的無菌打孔器研菌落邊緣同心圓處取菌絲塊，將相同大小的菌塊接種到PDA平板培養(yǎng)基上〔每一平板可接3塊，均勻擺放小，相當(dāng)于3次重復(fù)。25℃恒溫培養(yǎng)5天后，每隔24小時測定菌落直徑，連測5天，計算并統(tǒng)計菌絲平均生長速度。復(fù)壯后菌絲平均生長速度應(yīng)高于未復(fù)壯前。4.其他指標(biāo)測定〔三〕菌種制備與培養(yǎng)1.標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)對菌種培養(yǎng)時間的要求母種最正確培養(yǎng)時間7-10天，菌齡掌握在剛長滿斜面即用于擴接原種或繼代培養(yǎng)。原種接種后應(yīng)在40-50天長滿瓶，菌齡掌握在菌絲長滿瓶10天左右使用。栽培種接種后菌絲應(yīng)在30-45天長滿瓶，菌齡掌握在菌絲長滿瓶后15天內(nèi)使用。2.4容器要求：〔1〕母種：使用玻璃試管和棉塞，試管18mm×180mm或20mm×200mm，棉塞要使用梳棉，不應(yīng)使用脫脂棉。〔2〕原種：使用650mL-750ml，耐126℃高溫的無色或近無色的玻璃菌種瓶，或850ml耐126℃高溫白色半透明符合GB9687衛(wèi)生規(guī)定的塑料菌種瓶，或15cm×28cm耐126℃高溫符合GB9688衛(wèi)生規(guī)定的聚丙烯塑料袋。也可用能滿足濾菌和透氣要求的無棉塑料蓋代替棉塞?！?〕栽培種：同原種。也可使用≤17cm×35cm耐126℃高溫符合GB9688衛(wèi)生規(guī)定的聚丙烯塑料袋。2.5培養(yǎng)原料：〔1〕化學(xué)試劑類：這類原料如硫酸鎂、磷酸二氫鉀等，要使用化學(xué)純級試劑?！?〕生物制劑和天然材料類

生物制劑如酵母粉和蛋白胨，天然材料如木屑、棉籽殼、麥麩等，要求新鮮、無蟲、無螨、無霉、潔凈枯燥?！?〕培養(yǎng)基配方

母種培養(yǎng)基：一般使用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA：馬鈴薯200g(用浸出汁)，葡萄糖20g，瓊脂20g，水1000mL，PH值自然)或綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基〔CPDA：馬鈴薯200g(用浸出汁)，葡萄糖20g，磷酸二氫鉀2g，硫酸鎂0.5g，瓊脂20g，水1000mL，pH值自然。特殊種類需參加其生長所需特殊物質(zhì)，如酵母粉、蛋白胨、麥芽汁、麥芽糖等，但不應(yīng)過富。嚴格掌握PH值。2.6常用原種和栽培種培養(yǎng)基：根據(jù)當(dāng)?shù)卦腺Y源和所生產(chǎn)品種的要求，使用適宜的培養(yǎng)基配方，嚴格掌握含水量和PH值。2.6.1以木屑為主料的培養(yǎng)基配方：適用于香菇、黑木耳、毛木耳、平菇、金針菇、滑菇、雞腿菇、真姬菇等多數(shù)木腐菌類。1.闊葉樹木屑78%，麩皮20%，糖1％，石膏1％，含水量58%士2%。

2.闊葉樹木屑63%，棉籽殼15％，麩皮20%，糖1％，石膏1％，含水量58%土2%。

3.闊葉樹木屑63%，玉米芯粉15％，麩皮20％，糖1％，石膏1%，含水量58%土2%。2.6.2以棉籽殼為主料的培養(yǎng)基：

適用于黑木耳、毛木耳、金針菇、滑菇、真姬菇、楊樹菇、雞腿菇、側(cè)耳屬等多數(shù)木腐菌類。

1.棉籽殼99%，石膏1％，含水量60％土2%。

2.棉籽殼84％-89%，麥麩10%-15%，石膏1%，含水量60%士2%。

3.棉籽殼54-69%，玉米芯20％-30％，麥麩l0%-15%，石膏1％，含水量60%土2%。

4.棉籽殼54％-69%，闊葉樹木屑20%-30%，麥麩10%-15%，石膏1%，含水量60％士2%。2.6.3以棉籽殼或稻草為主的培養(yǎng)基：

適用于草菇。

1.棉籽殼99%，石灰1%，含水量68%土2％。

2.棉籽殼84%-89%，麥麩10%-15%，石灰1%，含水量68%土2％。

3.棉籽殼44%，碎稻草40%，麥麩15%，石灰1%，含水量68%土2％。2.6.4腐熟料培養(yǎng)基：適用于雙孢蘑菇、大肥菇、姬松茸等蘑菇屬的種類。

1.腐熟麥秸或稻草〔干〕77%，腐熟牛糞粉〔干〕20%，石膏粉1%，碳酸鈣2%，含水量62%土1%，PH7.5。

2.腐熟棉籽殼〔干〕97%，石膏粉1%，碳酸鈣2%，含水量55%土1%，PH7.5。2.6.5谷粒培養(yǎng)基：小麥、谷子、玉米或高梁97%-98％，石膏2%-3％，含水量50%±1％，適用于雙孢蘑菇、大肥菇、姬松茸等蘑菇屬的種類，也可用于側(cè)耳屬各種和金針菇的原種。2.7分裝要求：

母種培養(yǎng)基的分裝量掌握在試管長度的四分之一至五分之一，滅菌后擺放成的斜面頂端距試管口不少于50mm，原種和栽培種培養(yǎng)基裝至距瓶(袋)口不少于60mm，滅菌后不少于45mm。棉塞大小松緊要適度。原種和栽培種培養(yǎng)基的松緊度要一致。2.8滅菌要求：

母種的培養(yǎng)基配制分裝后應(yīng)立即滅菌；原種和栽培種培養(yǎng)基配制后應(yīng)在4h內(nèi)進鍋滅菌。母種培養(yǎng)基滅菌0.11Mpa—0.12Mpa，30min，木屑培養(yǎng)基和草料培養(yǎng)基滅菌0.12MPa，1.5h或0.14MPa—0.15MPa，1h，谷粒培養(yǎng)基、糞草培養(yǎng)基和木塞培養(yǎng)基滅菌0.14MPa—0.15MPa，2.5h。裝容量較大時，滅菌時間要適當(dāng)延長。滅菌完畢后，應(yīng)自然降壓，不應(yīng)強制降壓。常壓滅菌時，在2h之內(nèi)使滅菌室溫度到達100℃，保持100℃8h—10h。母種培養(yǎng)基、原種培養(yǎng)基、谷粒培養(yǎng)基、糞草培養(yǎng)基和木塞培養(yǎng)基，應(yīng)高壓滅菌，不應(yīng)常壓滅菌。滅菌時應(yīng)防止棉塞被冷凝水打濕。2.9滅菌效果的檢查：

母種培養(yǎng)基置于28℃恒溫培養(yǎng)，原種和栽培種培養(yǎng)基經(jīng)無菌操作接種于GB4789.28--1994中4.8規(guī)定的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于28℃恒溫培養(yǎng)，48h后檢查，無微生物長出的為滅菌合格。2.10冷卻要求：

冷卻室使用前要進行清潔和除塵處理。地面鋪消毒過的塑料薄膜后，將滅菌后的原種瓶〔袋〕或栽培種瓶〔袋〕放置在冷卻室中冷卻到料溫降至適宜溫度。2.11接種過程規(guī)定：接種室〔箱〕的根本處理程序：

清潔→搬入接種物和被接種物→接種室〔箱〕的消毒處理。接種室〔箱〕的消毒方法：用藥物消毒并用紫外燈照射。凈化工作臺的消毒處理方法：

先用75％酒精或新潔爾滅溶液進行外表擦拭消毒，然后預(yù)凈20min。接種操作：

在無菌室〔箱〕或凈化工作臺上嚴格按無菌操作接種。接種完成后及時貼好標(biāo)簽。接種室〔箱〕后處理：

接種室每次使用后，要及時清理清潔，排除廢氣，去除廢物，臺面要用75％酒精或新潔爾滅溶液擦試消毒2.12培養(yǎng)室處理及后期管理：在使用培養(yǎng)室的前兩天，采用藥物消毒。培養(yǎng)條件：

根據(jù)培養(yǎng)物的不同生長要求，給予其適宜的培養(yǎng)溫度〔多在22℃--28℃〕，保持空氣相對濕度在75%以下，通風(fēng)，避光。培養(yǎng)期的檢查：

各級菌種培養(yǎng)期間應(yīng)定期檢查，及時揀出不合格菌種。入庫：完成培養(yǎng)的菌種要及時登記入庫。記錄：生產(chǎn)各環(huán)節(jié)應(yīng)詳細記錄。留樣：各級菌種都應(yīng)留樣備查，留樣的數(shù)量應(yīng)以每個批號母種3-5支，原種和栽培種5-7瓶〔袋〕，于4℃-6℃下貯存，貯存至使用者在正常生產(chǎn)條件下該批菌種出第一潮菇〔耳〕。〔四〕菌種退化及組織別離法菌種退化的原因分析防止菌種退化的措施菌種組織別離法1.菌種退化的原因分析〔１〕菌種混雜在菌種繼代培養(yǎng)過程中，不同品種間交叉感染，導(dǎo)致不同品種的菌絲體混雜在一起，菌絲生長發(fā)生變異，導(dǎo)致原有品種生產(chǎn)性狀的改變，常常表現(xiàn)出產(chǎn)量下降、質(zhì)量變劣等?！玻病秤泻ν蛔兊陌l(fā)生一般來說，一個正常菌株經(jīng)過多代移植，不會導(dǎo)致遺傳性狀的改變。但是如果一個菌株的菌絲細胞中發(fā)生有害突變，而且突變體能適應(yīng)外界環(huán)境條件。那么，隨著移接次數(shù)的增加，有害突變體在菌絲細胞群中所占的比例會逐漸增大。這樣，該菌株的生產(chǎn)性能就會隨之惡化，退化現(xiàn)象就逐漸顯現(xiàn)出來?！玻场畴s交菌株的雙親核比例失調(diào)雜交菌株的菌絲體在轉(zhuǎn)管過程中，受到外界環(huán)境、營養(yǎng)條件等改變的影響，其中一個親本的核發(fā)育正常逐漸占據(jù)優(yōu)勢而另一親本的核可能不適應(yīng)而逐漸減弱，這樣導(dǎo)致雙核比例的失調(diào)，隨著擴管代數(shù)的增加，核比例失調(diào)逐漸擴大，最終導(dǎo)致在栽培中表現(xiàn)出退化現(xiàn)象。〔４〕病毒的感染菌種感染病毒后，病毒不僅會隨著菌絲體的擴大繁殖而增加，而且會通過帶毒孢子傳染下一代。當(dāng)菌種攜帶一定濃度的病毒粒子，在栽培中都會表現(xiàn)出明顯減產(chǎn)，菇質(zhì)量下降等退化現(xiàn)象。2.防治菌種退化的措施〔１〕要防止菌種的混雜，在菌種轉(zhuǎn)管，進行出菇試驗等工作中，均應(yīng)加強品種隔離，減少品種間的混雜，以保證優(yōu)良品種的遺傳組成在較長時間內(nèi)能保持足夠的穩(wěn)定?！玻病晨刂凭N傳代次數(shù)菌種傳代次數(shù)越多，產(chǎn)生變異的機率就越高，因此菌種發(fā)生退化的概率就會越多，生產(chǎn)中應(yīng)嚴格控制菌種的移接代數(shù)?！玻场巢捎糜行У木N保藏方法保存菌種菌種保存應(yīng)是短期、中期和長期三者相結(jié)合，根據(jù)不同的要求從不同保藏方法中進行擴和移接，確保菌種能長期保持該品種的原有優(yōu)良性狀?！玻础硠?chuàng)造菌種生長良好營養(yǎng)條件和外界環(huán)境菌種培養(yǎng)基的營養(yǎng)條件應(yīng)適宜，才能使菌種生長健壯，減少退化的發(fā)生。營養(yǎng)缺乏和過于豐富對菌種生長均不利。菌種的生長繁殖受到物理、化學(xué)、生物等外界條件的影響，如條件適宜，菌種生長正常，不易退化，不相適宜，那么會引起菌種的退化。比方芳香族化合物，能誘發(fā)絨毛狀菌絲體成扇形菌落的形成，這種菌絲體在料床上易形成致密的白斑，導(dǎo)致產(chǎn)量下降?！玻怠硨N可能遭受病毒的感染應(yīng)保持足夠的警惕。對有疑問的菌種要及時檢驗。確證已感染病毒，尤其是病毒粒子含量大，菌絲體及子實體性狀已受到嚴重影響的菌種，應(yīng)及時淘汰。3.菌種組織別離法概念組織別離：是指在雙核菌絲的組織上切取一塊組織，使其在培養(yǎng)基上萌發(fā)而獲得純雙核菌絲體的方法。稱作原始母種。種類：據(jù)切取的組織來源，分為子實體組織別離、菌核、菌索組織別離和基內(nèi)菌絲組織別離。特點：一是簡單易行。二是無性繁殖，得到的菌種可直接用于生產(chǎn)。4.子實體組織別離過程培養(yǎng)基制備。參照前面母種培養(yǎng)基。種菇選擇：是指用來進行組織別離的子實體。要選擇適宜出菇期出菇早、出菇整齊、形態(tài)正常、無病蟲害、產(chǎn)量高的栽培袋，從上選擇肥大、肉厚、6成熟的幼嫩子實體，切去多余菌柄。接種場地消毒。種菇處理：外表消毒。接種過程：雙手外表消毒后把種菇進入接種箱，點燃酒精燈，種菇外表消毒后從中間縱向撕開，用無菌小鑷子夾取菌柄、菌蓋交界處的菌肉組織，迅速放入培養(yǎng)基上，塞上棉塞。特殊種類：靈芝、金針菇、雞腿菇等。培養(yǎng)。適宜條件下，2-3天組織塊上即萌發(fā)出菌絲，8-10天可長滿。期間要檢查。基內(nèi)菌絲組織別離以及菌核和菌索的組織別離過程與此類似，只是所取部位不同。原始母種還可轉(zhuǎn)接擴繁3-4次，以增加母種量。防止保藏母種老化衰退如下：〔1〕貧、富培養(yǎng)基輪用。保存菌種的培養(yǎng)基不能營養(yǎng)太豐富，否那么菌絲生長過旺易老化，且產(chǎn)生較多的有害代謝物而導(dǎo)致菌種死亡。因此大都采用PDA。食用菌在PDA培養(yǎng)基生長雖細弱，但不易老化、生命保持期長；而在加富〔如蛋白胨、酵母膏、麩皮浸液等〕的PDA培養(yǎng)基上菌絲生長雖旺盛，但易老化、生命保持期短。因此，斜面菌種輪用貧、富培養(yǎng)基保藏，有利于其優(yōu)良種性的保持和復(fù)壯?！?〕經(jīng)常更換培養(yǎng)基。同一菌株假設(shè)長期使用某一培養(yǎng)基，菌絲的生長速度減慢，會出現(xiàn)菌絲細弱、斷節(jié)、稀疏的現(xiàn)象。這是因為菌絲一直生長在半合成的同一基質(zhì)上，與其自然生長環(huán)境不同，某些酶和活性物質(zhì)