GXAS-沃柑中噻唑鋅、亞胺唑、毒菌酚、氟吡菌酰胺農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

Q/LB.□XXXXX-XXXX沃柑中噻唑鋅、亞胺唑、毒菌酚、氟吡菌酰胺農(nóng)藥及其代謝物殘留量的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法范圍本文件描述了沃柑中噻唑鋅、亞胺唑、毒菌酚、氟吡菌酰胺殘留量的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法。本文件適用于沃柑中噻唑鋅、亞胺唑、毒菌酚、氟吡菌酰胺殘留量的測(cè)定。本文件定量限噻唑鋅為0.004mg/kg，亞胺唑?yàn)?.006mg/kg，氟吡菌酰胺為0.003mg/kg，毒菌酚為0.002mg/kg。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB2763食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。原理試樣在Na2S2O3溶液中恒溫振蕩，噻唑鋅衍生化成2-氨基-5-巰基-1,3,4-噻二唑，微酸性條件下用0.5%甲酸乙腈液液分配提取，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)，外標(biāo)法定量。試劑和材料除另有說明外，在分析中僅使用分析純?cè)噭┖虶B/T6682中規(guī)定的一級(jí)水。試劑乙腈（CH3CN，CAS號(hào)：75-05-8）：色譜純。甲醇（CH3OH，CAS號(hào)：67-56-1）：色譜純。甲酸（HCOOH，CAS號(hào)：64-18-6）：色譜純。鹽酸（HCl，CAS號(hào)：7647-01-0，純度36%～38%）。五水硫代硫酸鈉（Na2S2O3·5H2O，CAS號(hào)：10102-17-7）。乙酸銨（CH3CO2NH4，CAS號(hào)：631-61-8）。氯化鈉（NaCl，CAS號(hào)：7647-14-5）。溶液配制甲酸溶液（1%）：吸取1mL甲酸（5.1.3），用水稀釋至100mL，搖勻備用。Na2S2O3溶液（1.0mol/L）：稱取24.818g五水硫代硫酸鈉（5.1.5），用水溶解并定容至100mL，現(xiàn)用現(xiàn)配。鹽酸溶液（1mol/L）：量取82mL鹽酸（5.1.4），加水混勻，定容至1L。甲酸乙腈溶液（0.5%）：準(zhǔn)確吸取5mL甲酸，用乙腈稀釋至1000mL，搖勻備用。酸性乙腈水溶液：1體積甲酸乙腈溶液（5.2.4）+2體積水混合。甲酸溶液（0.1%）：吸取1mL甲酸（5.1.3），用水稀釋至1000mL，過0.22μm微孔過濾膜（有機(jī)相），現(xiàn)用現(xiàn)配。乙酸銨（5mmol/L）溶液：稱取0.3854g乙酸銨（5.1.6）溶于100mL水，用水定容至1000mL搖勻，過O.22μm微孔過濾膜（有機(jī)相），現(xiàn)用現(xiàn)配。標(biāo)準(zhǔn)品噻唑鋅（C4H4N6S4Zn，CAS號(hào)：3234-62-6），標(biāo)準(zhǔn)品純度≥99%。2-氨基-5-巰基-1,3,4-噻二唑（AMT，C2H3N3S2，CAS號(hào)：2349-67-9），標(biāo)準(zhǔn)品純度≥98%。亞胺唑（C17H13Cl3N4S，CAS號(hào)：86598-92-7），標(biāo)準(zhǔn)品純度≥99%。氟吡菌酰胺（C16H11ClF6N2O，CAS號(hào)：658066-35-4），標(biāo)準(zhǔn)品純度≥99%。毒菌酚（C13H6Cl6O2，CAS號(hào)：70-30-4），標(biāo)準(zhǔn)品純度≥99%。標(biāo)準(zhǔn)溶液配制噻唑鋅標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1000mg/L）準(zhǔn)確稱取約10mg（精確至0.1mg）噻唑鋅標(biāo)準(zhǔn)品（5.3.1）于10mL容量瓶中，用甲酸水溶液（5.2.1）溶解，并定容至10mL。避光2℃～8℃條件保存，有效期6個(gè)月。2-氨基-5-巰基-1,3,4-噻二唑標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1000mg/L）準(zhǔn)確稱取約10mg（精確至0.1mg）2-氨基-5-巰基-1,3,4-噻二唑標(biāo)準(zhǔn)品（5.3.2）于10mL容量瓶中，用甲醇（5.1.2）溶解，并定容至10mL。避光-18℃及以下條件保存，有效期6個(gè)月。亞胺唑標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1000mg/L）準(zhǔn)確稱取約10mg（精確至0.1mg）亞胺唑標(biāo)準(zhǔn)品（5.3.3）于10mL容量瓶中，用甲醇（5.1.2）溶解，并定容至10mL。避光-18℃及以下條件保存，有效期6個(gè)月。毒菌酚標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1000mg/L）準(zhǔn)確稱取約10mg（精確至0.1mg）（5.3.5）毒菌酚標(biāo)準(zhǔn)品于10mL容量瓶中，用甲醇（5.1.2）溶解，并定容至10mL。避光-18℃及以下條件保存，有效期6個(gè)月。氟吡菌酰胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1000mg/L）準(zhǔn)確稱取約10mg（精確至0.1mg）氟吡菌酰胺標(biāo)準(zhǔn)品（5.3.4）于10mL容量瓶中，用乙腈（5.1.1）溶解，并定容至10mL。避光-18℃及以下條件保存，有效期6個(gè)月?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(20mg/L～50mg/L)吸取一定量的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（5.4.2～5.4.5）于容量瓶中用乙腈（5.1.1）定容至刻度，避光-18℃及以下條件保存，有效期2個(gè)月。混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(5mg/L)吸取一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(5.4.6)于容量瓶中，用乙腈(5.1.1)定容至刻度，避光-18℃及以下條件保存，有效期1個(gè)月。材料十八烷基硅烷鍵合硅膠(C18)：粒徑40μm～60μm。carbonS吸附劑：粒徑40μm～120μm。微孔濾膜(有機(jī)相)：O.22μm或相當(dāng)者。儀器和設(shè)備液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（ESI）。分析天平：感量0.1mg和感量0.01g。組織搗碎儀。渦旋振蕩儀。離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于4500r/min。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。pH計(jì)。超聲清洗儀。恒溫振蕩儀。試樣制備試樣制備樣品取樣部位按照GB2763的規(guī)定執(zhí)行。對(duì)于個(gè)體較小的樣品，取樣后全部處理；對(duì)于個(gè)體較大的基本均勻樣品，可在對(duì)稱軸或?qū)ΨQ面上分割或切成小塊后處理；用四分法取樣或直接放入組織搗碎機(jī)中搗碎成勻漿。勻漿放入聚乙烯容器中。試樣儲(chǔ)存將試樣按照測(cè)試和備用分別存放。于-18℃及以下條件儲(chǔ)存。分析步驟提取準(zhǔn)確稱取10g（精確至0.01g）試樣于50mL具塞聚丙烯離心管中，加入3mLNa2S2O3溶液（5.2.2）混勻，在37℃恒溫下以180rpm的速率振蕩30min，加入0.4mL鹽酸溶液（5.2.3）調(diào)節(jié)pH值約為3左右，準(zhǔn)確加入甲酸乙腈溶液（5.2.4）20.0mL，超聲提取5min，渦旋提取10min，加入5g氯化鈉后渦旋2min，在4500r/min下離心5min，備用。凈化吸取取8.1中上層清液5mL于內(nèi)含125mgC18（5.4.1）、12.5mgcarbonS（5.4.2）的15mL塑料離心管中，渦旋振蕩2min，于4500r/min離心5min。準(zhǔn)確吸取3mL上清液于l5mL離心管中，40℃水浴氮?dú)獯抵良s0.1mL，用酸性乙腈水溶液（5.2.5）定容至1.0mL，過微孔濾膜(5.4.4)，轉(zhuǎn)入進(jìn)樣小瓶用于測(cè)定。測(cè)定液相色譜條件液相色譜條件如下：色譜柱：C18-AQ2.1mm×100mm粒徑1.9μm，或相當(dāng)者；流動(dòng)相：正模式掃描流動(dòng)相：A相為0.1%甲酸溶液（5.2.6），B相為甲醇；負(fù)模式掃描流動(dòng)相：A相為5mmol/L乙酸銨溶液（5.2.7），B相為乙腈。流動(dòng)相梯度條件見表1、表2；流速：0.3mL/min；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：3μL。正模式掃描流動(dòng)相及其梯度條件時(shí)間流動(dòng)相A(%)流動(dòng)相B（%）0.0080202.0080203.0030704.002985.012985.1080209.008020負(fù)模式掃描流動(dòng)相及其梯度條件時(shí)間流動(dòng)相A(%)流動(dòng)相B（%）0.0060402.0030704.005957.005957.1060409.006040質(zhì)譜參考條件質(zhì)譜參考條件如下：離子源類型：電噴霧離子源；掃描方式：正離子和負(fù)離子分開掃描；電噴霧電壓：正離子4000V，負(fù)離子-3500V；離子源溫度：300℃；霧化氣壓力：0.242MPa；輔助加熱氣：0.242MPa；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)：每種農(nóng)藥分別選擇至少2個(gè)子離子。所有需要檢測(cè)的子離子按照出峰順序，分時(shí)段分別檢測(cè)。每種農(nóng)藥的保留時(shí)間、母離子、子離子及離子對(duì)質(zhì)譜參數(shù)，參見附錄A?；|(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作曲線空白樣品按照8.1、8.2進(jìn)行前處理得到空白基質(zhì)溶液。精確吸取定一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，逐級(jí)用空白基質(zhì)溶液稀釋成質(zhì)量濃度為0.002mg/L、0.005mg/L、0.010mg/L、0.020mg/L、0.050mg/L、0.100mg/L、0.200mg/L、0.500mg/L的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，根據(jù)儀器性能和檢測(cè)需要選擇不少于5個(gè)濃度點(diǎn)，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。以農(nóng)藥定量用子離子的質(zhì)量色譜圖面積為縱坐標(biāo)、相對(duì)應(yīng)的基質(zhì)匹配標(biāo)雕工作溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。定性及定量保留時(shí)間被測(cè)試樣中目標(biāo)農(nóng)藥色譜峰的保留時(shí)間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)色譜峰的保留時(shí)間相比較.相對(duì)誤差應(yīng)在±2.5%之內(nèi)。離子豐度比在相同實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行樣品測(cè)定時(shí)，如檢出的色譜峰I的保留時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)樣相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，目標(biāo)化合物選擇的子離子均出現(xiàn)，而且同一檢測(cè)批次，對(duì)同一化合物，樣品目標(biāo)化合物的離子豐度比與質(zhì)量濃度相當(dāng)?shù)幕|(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液相比，其允許偏差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在目標(biāo)農(nóng)藥。本方法的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)LC-MS/MS多反應(yīng)監(jiān)測(cè)質(zhì)量色譜圖參見附錄B。定性時(shí)離子豐度比的最大允許偏差單位為百分比離子豐度比＞50＞20～50＞10～20≤10允許相對(duì)偏差±20±25±30±50定量外標(biāo)法定量。試樣溶液的測(cè)定將基質(zhì)匹配目標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和試樣溶液依次注入液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中，保留時(shí)間和離子豐度比定性，測(cè)得定量用子離子的質(zhì)量色譜圖峰面積，待測(cè)樣液中農(nóng)藥的響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測(cè)的定量測(cè)定線性范圍之內(nèi)，超過線性范圍時(shí)應(yīng)根據(jù)測(cè)定濃度進(jìn)行適當(dāng)倍數(shù)稀釋后再進(jìn)行分析。平行試驗(yàn)按以上步驟對(duì)同一試樣進(jìn)行平行試驗(yàn)測(cè)定?？瞻自囼?yàn)除不加試樣外，采用完全相同的測(cè)定步驟進(jìn)行平行操作。結(jié)果計(jì)算試樣中各農(nóng)藥殘留量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω計(jì)，單位為毫克每千克(mg/kg)，按公式(1)或公式(2)計(jì)算。 ω=ρ1×A×V3×V1 ω=ρ2×V3×式中：ω—試樣中各被測(cè)物殘留量的數(shù)值，單位為毫克每千克(mg/kg)；ρ1—基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中被測(cè)物的質(zhì)量濃度的數(shù)值，單位為毫克每升(mg/L)；ρ2—從基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作曲線中得到的試樣溶液中被測(cè)物的質(zhì)量濃度的數(shù)值，單位為毫克每升(mg/L)；A—試樣溶液中被測(cè)物的質(zhì)量色譜圖峰面積；As—基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中被測(cè)物的質(zhì)量色譜圖峰面積；V1—提取液的體積，單位為毫升(mL)；V2—移取凈化液的體積，單位為毫升(mL)；V3—樣液最終定容體積，單位為毫升(mL)；m—試樣質(zhì)量的數(shù)值，單位為克(g)。試樣中噻唑鋅殘留量留量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω噻唑鋅計(jì)，單位為毫克每千克(mg/kg)，按公式(3)計(jì)算。 ω噻唑鋅=ω2-氨基式中：ω噻唑鋅—試樣中噻唑鋅殘留量的數(shù)值，單位為毫克每千克(mg/kg)；ω2-氨基-5-巰基一1,3,4-噻二唑—試樣中2-氨基-5-巰基-1,3,4-噻二唑殘留量的數(shù)值，單位為毫克每千克(mg/kg)；329.8—噻唑鋅的摩爾質(zhì)量，單位為克每摩爾(g/mol)；133.2—2-氨基-5-巰基-1,3,4-噻二唑的摩爾質(zhì)量，單位為克每摩爾(g/mol)；2—系數(shù)。

（資料性）

噻唑鋅、亞胺唑、毒菌酚、氟吡菌酰胺農(nóng)藥及其代謝物的保留時(shí)間、母離子、子離子及離子對(duì)質(zhì)譜參數(shù)見表A.1。噻唑鋅、亞胺唑、毒菌酚、氟吡菌酰胺農(nóng)藥及其代謝物的保留時(shí)間、母離子、子離子及離子對(duì)質(zhì)譜參數(shù)序號(hào)農(nóng)藥中文名農(nóng)藥英文名電離方式保留時(shí)間(min)去簇電壓（V）離子對(duì)Ⅰ碰撞能(V)離子對(duì)Ⅱ碰撞能(V)12-氨基-5-巰基-1,3,4-噻二唑2-amino-5-sulfanyl-1,3,4-thiadiazole正1.636135134.0/43.0-38134.0/75.0-382氟吡菌酰胺Fluopyram正5.02100397.2/173.1-32397.2/208.1-193亞胺唑Imibenconazole正5.484120412.9/125.0-37412.9/170.9-374毒菌酚Hexachlorophen負(fù)1.862100