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實驗5分光光度法測定青菜中的葉綠素江南大學(xué)《食品化學(xué)》課程小組一、目的了解葉綠素的分子結(jié)構(gòu)、性質(zhì),理解葉綠素性質(zhì)不穩(wěn)定的根源,從而提高解決青菜類蔬菜在加工、儲藏等過程中出現(xiàn)問題的能力。掌握食品中某些有效成分的提取、分離以及測定方法。二、儀器及材料天平、組織搗碎機、水循環(huán)真空泵、抽濾瓶、濾紙、布氏漏斗、容量瓶(1000mL、100mL)、分液漏斗2個、尖嘴管、鐵架臺、鐵圈2個、分光光度計;青菜葉、碳酸鈣、丙酮(80%)、乙醚、無水硫酸鈉。三、原理
總?cè)~綠素
=7.12A660.0+16.8A642.5葉綠素a=9.93A660.0-0.777A642.5葉綠素b=17.6A642.5-2.81A660.0轉(zhuǎn)移葉綠素乙醚溶液測定青菜葉葉綠素丙酮溶液組織破碎吸光度含量四、實驗步驟青菜葉+CaCO3
+丙酮,搗碎勻漿抽濾濾液85%丙酮洗滌殘渣濾液比色,計算葉綠素含量定容乙醚萃取洗去丙酮定容五、注意事項使用乙醚萃取時,需在通風(fēng)櫥中操作,實驗前檢查好分液漏斗的密封、通暢性,萃取時勿激烈振搖,以防產(chǎn)生乳化層葉綠素遇光照和高溫不穩(wěn),在提取過程中必須控制好這些因素,盡可能在低溫、弱光下進行,并縮短實驗時間,防止葉綠素的破壞使用分光光度計時,先要預(yù)熱;測定時要用乙醚作空白六、思考題1、測定葉綠素a、b含量為什么要選用紅光的波長?2、在破碎青菜葉組織時,為什么要加入碳酸鈣或碳酸鈉?3、為什么葉綠素測定時應(yīng)盡量可能在低溫和避光的條件下進行?4、葉綠素a和葉綠
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