3.1.2重組DNA技術(shù)的基本工具（運載體運載體篩選）高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修3

第三章基因工程重組DNA技術(shù)的基本工具（運載體+運載體篩選）運載體≠質(zhì)粒（最常用）導(dǎo)P72倒7行：質(zhì)粒作用標(biāo)記基因：eg+顯色基因利用抗生素篩選出含質(zhì)粒的大腸桿菌方法：用含青霉素的培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌。+重組質(zhì)粒(含目的基因)空/普通質(zhì)粒目的基因能否插入c位置用于重組質(zhì)粒的篩選？若插入b位置,則篩選時可在培養(yǎng)基中加入？影印接種(不改變菌落位置）看書范圍：P72—P7373思考與討論導(dǎo)P72P73①②有復(fù)制原點③重組質(zhì)?？召|(zhì)粒思判斷1.被用作載體的質(zhì)粒都是天然質(zhì)粒2.所有質(zhì)粒均可以作為基因工程的載體3.DNA連接酶和DNA聚合酶作用的底物相同4.載體的化學(xué)本質(zhì)與載體蛋白相同5.質(zhì)粒常采用抗生素合成基因作為篩選的標(biāo)記基因6.目的基因與運載體結(jié)合的過程發(fā)生在細(xì)胞外7.常使用的運載體有大腸桿菌、噬菌體和動植物病毒等8.不同的質(zhì)粒DNA,(A+G)/(T+C)的值一定相同9.用EcoRI、BamHI兩種限制酶切割含目的基因的DNA片段和質(zhì)粒，構(gòu)建重組質(zhì)粒并導(dǎo)入到大腸桿菌中，所得結(jié)果如圖所示。圖2表示運用影印培養(yǎng)法（指在一系列平板培養(yǎng)基的相同位置上接種并培養(yǎng)出相同菌落的一種微生物培養(yǎng)方法）檢測表達載體是否導(dǎo)入大腸桿菌。（1）培養(yǎng)基A中添加的是(青霉素/四環(huán)素)，菌落1-6表示？①未導(dǎo)入質(zhì)粒的大腸桿菌②導(dǎo)入空質(zhì)粒的大腸桿菌③導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌（2）培養(yǎng)基B中添加的是(青霉素/四環(huán)素)，菌落1/2/3/5類型是【①/②/③】？含有目的基因的菌落序號是？議自由展判斷1.被用作載體的質(zhì)粒都是天然質(zhì)?！列枰?jīng)過人工改造2.所有質(zhì)粒均可以作為基因工程的載體×載體需要條件，如不含標(biāo)記基因的質(zhì)粒不能用3.DNA連接酶和DNA聚合酶作用的底物相同×DNA連接酶底物：DNA片段，DNA聚合酶底物：脫氧核苷酸4.載體的化學(xué)本質(zhì)與載體蛋白相同×載體本質(zhì)：脫氧核苷酸鏈，載體蛋白：蛋白質(zhì)

展15.質(zhì)粒常采用抗生素合成基因作為篩選的標(biāo)記基因×抗生素抗性基因6.目的基因與運載體結(jié)合的過程發(fā)生在細(xì)胞外√7.常使用的運載體有大腸桿菌、噬菌體和動植物病毒等×大腸桿菌不是8.不同的質(zhì)粒DNA,(A+G)/(T+C)的值一定相同√雙鏈DNA：A=TC=GT4.

AP為青霉素抗性基因，Tc為四環(huán)素抗性基因,用PvuⅠ限制酶切質(zhì)粒。質(zhì)粒A不能作為運載體的原因？

質(zhì)粒A缺少標(biāo)記基因質(zhì)粒C不能作為運載體的原因？PvuⅠ切割時，復(fù)制原點會被破壞T3（1）運載體具備的條件（板）a.有復(fù)制原點

便于外源基因復(fù)制。b.有一個至多個限制酶切割位點。便于插入c.有標(biāo)記基因

d.對受體細(xì)胞無害展2（2氨芐青霉素抗性基因稱為？

標(biāo)記基因作用是？

便于重組DNA的篩選議9.用EcoRI、BamHI兩種限制酶切割含目的基因的DNA片段和質(zhì)粒（1）培養(yǎng)基A中添加的是(青霉素)，菌落1-6表示？

②導(dǎo)入空質(zhì)粒的大腸桿菌

③導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌（2）培養(yǎng)基B中添加的是(四環(huán)素)，菌落1/2/3/5類型是？②導(dǎo)入空質(zhì)粒的含有目的基因的菌落序號是？4、6總結(jié)：①區(qū)分未導(dǎo)入與導(dǎo)入，加入？

②區(qū)分導(dǎo)入空質(zhì)粒與重組質(zhì)粒。加入？【拓】為篩選含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，需要在培養(yǎng)基中添加青霉素。評1重組質(zhì)?？召|(zhì)粒一、雙重篩選④將連接產(chǎn)物導(dǎo)入大腸桿菌未導(dǎo)入質(zhì)粒導(dǎo)入重組質(zhì)粒導(dǎo)入空質(zhì)粒①區(qū)分導(dǎo)入和未導(dǎo)入：培養(yǎng)基中加入？【拓】Why導(dǎo)入空質(zhì)粒和導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌都能在含青霉素的培養(yǎng)基中生長？二者均含有氨芐青霉素抗性基因,在該培養(yǎng)基上均能生長②區(qū)分導(dǎo)入空質(zhì)粒和重組質(zhì)粒，培養(yǎng)基中加入？③T5藍白斑篩選評2注:LacZ基因編碼產(chǎn)生的β–半乳糖苷酶可以分解X-gal產(chǎn)生藍色物質(zhì)，使菌落呈現(xiàn)藍色;否則菌落為白色。1.若菌落為藍色【有

LacZ基因】，說明導(dǎo)入

空質(zhì)粒

。

2.若菌落為白色，原因是LacZ基因被破壞（1分），不能產(chǎn)生β–半乳糖苷酶（1分），不能分解X-gal產(chǎn)生藍色物質(zhì)（1分）說明導(dǎo)入了重組質(zhì)粒。3.實驗前，需要選擇對青霉素敏感的受體菌？所選擇的受體菌不含有AmpR基因？

結(jié)果分析質(zhì)粒上有0個游離磷酸。有一個切割位點，則切割后產(chǎn)生？？個Pi；？？個DNA片段。運載體：質(zhì)粒、動植物病毒、噬菌體評3【拓1】對質(zhì)粒進行改造,插入SmaⅠ酶(識別序列CCCGGG)切位點越多,質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越(高/低)?！就?】用MseI和PstI切割獲得目的基因；若要用下圖質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒,則需要對質(zhì)粒進行改造加入MseI的酶切序列，構(gòu)建新的限制酶切位點。方法：①合成MseI的酶切序列：用__DNA聚合_酶②切開質(zhì)粒：用限制酶_EcoRI__③將MseI的酶切序列連接到原質(zhì)粒切口處：用__DNA連接__酶T1若用家蠶作為受體，不選用噬菌體作為載體，原因是噬菌體的宿主細(xì)胞是細(xì)菌，不是家蠶。檢1.運載體最常用的是質(zhì)粒,此外還有噬菌體、動植物病毒.質(zhì)粒本質(zhì)是雙鏈、環(huán)狀DNA,基本單位是：脫氧核苷酸。質(zhì)粒上有0個游離磷酸。若質(zhì)粒上只有1個酶切位點，切割后形成1個DNA片段.；2個游離磷酸2.運載體所具備的條件有：a.質(zhì)粒DNA上有復(fù)制原點,目的：保證質(zhì)粒在受體中能穩(wěn)定復(fù)制;b.有一至多個限制酶切位點，目的：便于外源DNA插入；

c.有標(biāo)記基因,作用:便于重組DNA的篩選.3.限制酶特點（即限制酶專一性的體現(xiàn)）是？

①識別雙鏈DNA的特定核苷酸序列

②使每一條鏈中特定部位的磷酸二酯鍵斷開。4.人體蛋白質(zhì)基因之所以能“插入”到羊的染色體內(nèi)，是因為？①都由四種脫氧核苷酸組成；②都是雙螺旋結(jié)構(gòu)；③符合堿基互補配對原則。5目的基因能夠在受體細(xì)胞表達的基礎(chǔ)：生物界共用一套遺傳密碼。6含某限制酶的細(xì)菌可利用其限制酶切割外源DNA，但不破壞自身DNA的原因為