mir-143、mir-122反應(yīng)元件介導(dǎo)trail在食管癌中的選擇性表達

1/1mir-143、mir-122反應(yīng)元件介導(dǎo)trail在食管癌中的選擇性表達中文摘要食管癌是消化系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤之一并且預(yù)后較差，其病死率占惡性腫瘤相關(guān)病死率的第6位，且發(fā)病率逐年上升。

據(jù)流行病學(xué)統(tǒng)計，我國每年約15萬人死于食管癌，占世界病死率的46.6%（WHO，1997），占我國發(fā)生率和死亡率的第4位。

目前，食管癌的治療模式主要為手術(shù)和放化療相結(jié)合的綜合治療模式，但隨訪資料顯示遠期治療效果均不理想，總體5年生存率低于10%。

近年來，基因靶向治療成為食管癌研究的重點，而腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體（TNF-relatedapoptosis-inducingligand,TRAIL）成為了基因靶向研究的重中之重。

TRAIL可以通過識別并結(jié)合細胞表面死亡受體DR4和DR5激活下游的凋亡通路，引發(fā)進一步的Caspase級聯(lián)反應(yīng)，從而誘導(dǎo)細胞發(fā)生凋亡。

大量資料表明TRAIL能夠誘導(dǎo)多種癌癥細胞發(fā)生凋亡，其中包括食管癌細胞的凋亡。

然而，研究中同時發(fā)現(xiàn)TRAIL也可以激活正常細胞的凋亡途徑，其凋亡誘導(dǎo)作用不具有特異性。

miRNAs是一類非編碼的小RNA，它們通過特異性靶向結(jié)合mRNA3非編碼區(qū)的miRNA反應(yīng)元件（miRNAresponseelement,MRE）下調(diào)基因的表達水平。

已有很多miRNA的異常表達被報道參與了腫瘤的發(fā)生。

其中miR-143在食管癌中低表達，并且可能參與了食管癌的發(fā)生。

研究表明通過將腫瘤低表達的miRNA的MRE連接到治療載體上，可以調(diào)控治療基因的特異性表達。

目前已有多篇文獻報道了基于MRE調(diào)控的表達載體，這些載體被應(yīng)用于多種腫瘤的治療，包括黑色素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、膀胱癌。

我們首先研究了miR-143和miR-122在食管癌中的表達情況，結(jié)果顯示與正常細胞系相比，miR-143和miR-122在食管癌中低表達。

接著我們將構(gòu)建的攜帶miR-143和miR-122的MRE熒光素酶報告載體psiChek2-143-122轉(zhuǎn)入目的細胞，結(jié)果提示在食管癌細胞中熒光素酶表達水平升高，而在正常細胞中則低表達或不表達，說明攜帶miR-143和miR-122的MRE可以有效的靶向食管癌細胞表達。

利用我們構(gòu)建的腺病毒載體Ad-TRAIL-143-122及其對照物Ad-TRAIL同時感染細胞，應(yīng)用實時定量PCR及免疫印跡方法檢測各組中TRAIL的mRNA和蛋白的表達水平。

結(jié)果表明Ad-TRAIL-143-122載體可以在食管癌細胞中高表達ITRAIL的mRNA和蛋白，其表達效率與Ad-TRAIL相近，但在正常細胞中Ad-TRAIL-143-122載體的TRAIL表達水平被顯著抑制。

通過使用miRNA的抑制物和相似物分別作用于Ad-TRAIL-143-122處理的食管癌