c-fos基因表達及應激性胃黏膜損傷相關性

1/1c-fos基因表達及應激性胃黏膜損傷相關性1c-fos基因表達及應激性胃黏膜損傷相關性作者：

宋政軍周曉麗畫偉萇新明李長順【摘要】目的探討c-fos基因表達在心理應激性胃黏膜損傷發(fā)生機制中的作用。

方法利用光電刺激儀，建立心理應激動物模型。

大鼠隨機分為3組，對照組(C)、規(guī)則光組(R)和不規(guī)則光組(I)。

計數(shù)胃黏膜損傷指數(shù)(UI)，觀察胃黏膜組織學變化；采用比色法測定胃黏膜和血液中丙二醛(MDA)的水平；免疫組化法觀察胃黏膜中ccfos基因的表達情況。

結果①R組和I組的UI值明顯高于對照組(Plt;0.05)，且隨著應激時間的延長而逐漸升高；②胃黏膜中ccfos表達水平隨應激時間的延長而升高，R組與I組明顯高于對照組；③ccfos表達水平與黏膜MDA含量呈正相關(r=0.693，Plt;0.05)。

結論心理應激性胃黏膜損傷程度隨應激時間的延長和嚴重程度的增加而加重；心理應激下胃黏膜ccfos表達可能與氧自由基大量生成有關。

【關鍵詞】心理應激；丙二醛；ccfos基因CorrClCtCoCCCtCCCCccfosCCCCCCCrCssCoCCCCCCstrCcmucosClCsCoCCCCucCCCyCsycholoCCcClstrCssCCrCtsABSTRACT:OCjCctCvCTostuCyrClCtCoCshCC2CCtCCCCccfosCCCCCCCrCssCoCCCCoCyCCCfrCCrCCCcClCCCCstrCcmucosClCsCoCCCCucCCCyCsycholoCCcClstrCssCCrCts.MCthoCsThCrCtsCCrCCCvCCCCCCto3CrouCsrCCComly:rCCulCrflCshCCClCChtCrouC(CrouCR),CrrCCulCrflCshCCClCChtCrouC(CrouCI)CCCcoCtrolCrouC(CrouCC).ThCcoCtCCtsofmCloCClCChyCC(MDA),CCCCCstrCculcCrCCCCC(UI)CCrCmCCsurCCCftCrstrCssCCCCffCrCCtCrouCs.ThCccfosCCCCCCCrCssCoCCCCCstrCcmucousCCsCCtCctCCCyCmmuCochCmCstry.RCsults①UICCcrCCsCCsCCCCfCcCCtlyCCCrouCICCCCrouCR.②ThCcoCtCCtofMDACCsCCcrCCsCCmorCsCCCCfCcCCtlythCCthCtofthCcoCtrols.③ThCccfosCCCrCssCoCCCCCstrCcmucosCCCssCCCCfCcCCtlycorrClCtCCCCthMDAcoCtCCt(r=0.693,Plt;0.05).ACCthCCCCrCssCoClCvClCCsCCcrCCsCCCrCCuCllyfolloCCCCthCstrCsstCmC.CoCclusCoC①UCCCrthCCsycholoCCcClstrCsscoCCCtCoC,CCstrCcmucosClCsCoCCsCCCrCvCtCCCCththCCroloCCCCtCmC.②ThCccfosCCCrCssCoCCCCCstrCcmucosCCscorrClCtCCCCthoCyCCCfrCCrCCCcCls.ACCccfosCCCrCssCoCmCyCCCCCucCCCyoCyCCCfrCCrCCCcCls.KEYWORDS:CsycholoCCcClstrCss;mCloCClCChyCC3(MDA);ccfosCCCC隨著社會的發(fā)展，職業(yè)競爭、工作壓力等均可引起應激反應，心理應激對機體造成的危害越來越受到重視[1]。

為此，探討心理應激性胃黏膜損傷的發(fā)病機制，對于臨床治療和預防心理應激性胃黏膜損傷具有重要意義。

近年來，研究發(fā)現(xiàn)應激大鼠胃組織內(nèi)ccfos基因表達升高。

在本研究中，我們主要探討ccfos基因與應激性胃黏膜損傷的發(fā)生的關系，為臨床治療提供理論依據(jù)。

1材料與方法1.1實驗動物SCrCCuCcDCClCy(SD)雄性大鼠144只，體重180-220C，購于西安交通大學醫(yī)學院實驗動物中心。

室溫(202)℃，自然光照,大鼠標準飼料，自由進水。

1.2試劑及儀器丙二醛(MDA)測試盒購自南京建成生物工程研究所；ccfos免疫組化試劑盒購自西安寶信生物工程公司。

光電刺激器由西安交通大學公共衛(wèi)生系研制，刺激電流由SMIc1型動物實驗儀供給，電流強度1.0mA，電壓80V，持續(xù)2s。

1.3方法參照文獻[2]制備心理應激動物模型。

實驗分3期進行。

Ⅰ期(適應期，1-7C)：

所有動物每天放置實驗盒內(nèi)25mCC，適應環(huán)境并篩選，動物一般在第4天自動鉆入實驗盒，不鉆者剔除，以消除實驗盒對大鼠造成的應激的影響。

Ⅱ期(心理應激形成期，8-14C)，從第8天起大鼠隨機4分為3組，即對照組(C組)、規(guī)則光組(R組)和不規(guī)則光組(I組)，其中R組和I組又依應激天數(shù)分為2、4、6、8C4個亞組，每個亞組16只大鼠。

C組不給光電刺激，每天僅在實驗盒內(nèi)呆20mCC；R組給予規(guī)則光電刺激，即光照和電刺激的間隔為6s，兩次光照的間隔為20s，總時間為20mCC；I組給予不規(guī)則光照和電擊，即光照和電擊的先后次序、間隔時間是隨機的，但在20mCC內(nèi)接受的總刺激同R組。

Ⅲ期(心理應激記憶期，15C以后)，除不給電刺激外，余同Ⅱ期。

參照Guth評價胃黏膜損傷指數(shù)(ulcCrCCCCC,UI)，即胃黏膜損傷面積＜1mm記1分；1-2mm記2分；2-3mm記3分；3-4mm記4分；＞4mm即分段測量，全胃得分之和為損傷指數(shù)。

用752c2型分光光度計比色測定血清及胃黏膜中MDA活性，免疫組化染色檢測胃黏膜中ccfos基因的表達。

1.4統(tǒng)計學處理實驗結果用均數(shù)標準差表示，采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件分析。

兩組間均數(shù)比較采用t檢驗，取雙測＝0.05或＝0.01，Plt;0.05或Plt;0.01為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果2.1應激大鼠胃黏膜損傷指數(shù)(UI)隨著應激天數(shù)的增加，胃黏膜損傷程度逐漸加重，R組、I組胃黏膜損傷較對照組明顯(Plt;0.05)。

在同一時間點I組較R組損傷明5顯，I組UI高于R組。

兩組在第6天胃黏膜損傷最重(表1，圖1、2、3)。

表1應激大鼠胃黏膜損傷指數(shù)(UI)的比較（略）TCClC1ThCcomCCrCsoCofCCstrCculcCrCCCCCoCstrCssCCrCts*Plt;0.05,**Plt;0.01vs.2C圖1對照組胃黏膜的結構（略）FCC.1GCstrCcmucousmCmCrCCCstructurCofcoCtrolCrouC(400)圖2心理性應激6CR組胃黏膜的結構（略）FCC.2GCstrCcmucousmCmCrCCCstructurCofrCCulCrflCshCCClCChtCrouCCftCr6CCys(400)圖3心理性應激6CⅠ組胃黏膜的結構（略）FCC.3GCstrCcmucousmCmCrCCCstructurCofCrrCCulCrflCshCCClCChtCrouCCftCr6CCys(400)2.2應激大鼠胃黏膜、血漿MDA值從Ⅱ期應激開始，在第2、4、6、8天各應激時間點，R組、I組MDA升高。

其中R組在應激第6、第8天MDA升高明顯(Plt;0.01，Plt;0.05)，而I組從應激的第4天起，MDA即有明顯升高(Plt;0.05)，第6、8天顯著升高(Plt;0.01)。

R組、I組兩組總的MDA水平均高于對照組(Plt;0.05)。

在同一應激6時間點，I組MDA水平均高于R組，在應激第6、8天，R組與I組間差異有統(tǒng)計學意義(Plt;0.05，表2、3)。

表2胃黏膜MDA的含量（略）TCClC2ThCscorCsofMDACCCCstrCcmucosC*Plt;0.05vs.coCtrolCrouC;#Plt;0.05vs.rCCulCrflCshCCClCChtCrouC表3血漿MDA的濃度（略）TCClC3ThCscorCsofMDACCClooCClCsmC*Plt;0.05,**Plt;0.01vs.coCtrolCrouC;#Plt;0.05vs.rCCulCrflCshCCClCChtCrouC2.3應激大鼠胃黏膜ccfos表達胃黏膜ccfos免疫組化染色結果顯示，ccfos陽性顯色為棕褐色顆粒，主要表達于細胞核，多在胃黏膜中下1/3靠近基底層處(圖4)。

圖4胃黏膜ccfos免疫組織化學染色結果（略）FCC.4ThCccfosCCCCCCCrCssCoCCCCCstrCcmucousCyCmmuCochCmCstry(400)I組與R組胃黏膜中ccfos表達隨著應激時間的延長而逐漸增強，在第6、8天增強更明顯(Plt;0.01)。

兩組較對照組明顯增強(Plt;0.01)。

在同一時間點，I組高于R組(Plt;0.05)。

兩組在第6天表達達高峰(表4)。

表4應激大鼠胃黏膜ccfos表達(陽性細胞計數(shù))（略）7TCClC4ThCccfosCCCrCssCoCCCCCsrCCcmucosCofstrCssCCrCts*Plt;0.05,**Plt;0.01vs.coCtrolCrouC;#Plt;0.01vs.rCCulCrflCshCCClCChtCrouC2.4胃黏膜ccfos表達與MDA的關系胃黏膜ccfos的表達與胃黏膜中MDA水平呈正相關(r=0.693，Plt;0.01)。

3討論應激引起胃黏膜損傷的發(fā)生機制頗為復雜，涉及到中樞神經(jīng)內(nèi)分泌的改變，胃黏膜自身的防御與侵襲因素的失衡及多種細胞因子的參與等。

氧自由基是形成應激性胃潰瘍的重要原因之一。

它參與了胃黏膜的損傷過程。

氧自由基具有高度活性和細胞毒性，其引起組織細胞損傷的重要機制之一是觸發(fā)細胞質膜上的多不飽和脂肪酸發(fā)生脂質過氧化的鏈式反應，導致組織損傷，引起和加劇炎癥反應。

此外，還可與蛋白質和酶發(fā)生反應，導致細胞內(nèi)蛋白質和核酸碎裂、聚合及構象改變，造成細胞不可逆損傷，導致細胞壞死。

最終形成一系列脂質過氧化產(chǎn)物及其降解產(chǎn)物丙二醛(MDA)等。

現(xiàn)常以MDA作為反映自由基產(chǎn)生情況、細胞受損的指標。

8ccfos基因是近年來研究心理應激時的常用的一個指標。

它屬于即刻早期基因家族，受到細胞內(nèi)外各種刺激后可以快速的表達，在研究心理應激腦機制過程中，常做為神經(jīng)元活動的定位和功能指標。

同時，ccfos基因表達還與缺血再灌注、細胞調亡、氧自由基等有聯(lián)系。

MCsCko等報道，在束縛c浸水應激大鼠的胃黏膜上皮細胞、胃壁及小血管平滑肌層ccfos基因的表達升高，且早于胃黏膜損傷，ccfosmRcA的濃度與黏膜損傷程度不成比例；抑酸劑可以減輕胃黏膜損傷，但不能減少ccfos的表達。

因此，認為ccfos基因表達升高與胃黏膜血流障礙、氧自由基生成及缺血再灌注有關，而非黏膜損傷的反映。

自由基的增多可誘導缺血再灌注時ccfos的表達[3]。

在本實驗中，發(fā)現(xiàn)隨著應激時間的延長，胃黏膜損傷程度的加重，ccfos表達逐漸增加，并與MDA水平呈正相關。

可能為心理應激時，交感神經(jīng)興奮，血中兒茶酚胺增多，微循環(huán)灌注障礙，使黏膜發(fā)生出血、缺血、缺氧，進而使自由基生成增多，導致體內(nèi)脂質過氧化物過分堆積，自由基產(chǎn)生增多，組織出現(xiàn)過氧化損傷[4]。

同時，氧自由基的大量產(chǎn)生，可通過第二信使誘導ccfos的表達。

綜上所述，心理應激條件下，大鼠胃黏膜損傷程度隨9應激時間的延長而加重，并隨心理應激嚴重程度的增加而加重；心理應激大鼠胃黏膜ccfos蛋白表達和氧自由基大量