高中生物【分層作業(yè)】3.1 第3課時(shí) 目的基因的獲取DNA的粗提取和鑒定基因表達(dá)載體的構(gòu)建（蘇教2019版選擇性必修3）

第3章基因工程第1節(jié)基因工程及其技術(shù)第3課時(shí)目的基因的獲取、DNA的粗提取和鑒定、基因表達(dá)載體的構(gòu)建必備知識(shí)基礎(chǔ)練1.在已知某小片段基因堿基序列的情況下，獲得該基因的最佳方法是()A.逆轉(zhuǎn)錄合成cDNAB.用化學(xué)合成法合成C.利用PCR技術(shù)擴(kuò)增D.從基因文庫中提取2.下列有關(guān)目的基因獲取的理解，不正確的是()A.目的基因可以從自然界中分離，也可以人工合成B.cDNA文庫的構(gòu)建需要用到逆轉(zhuǎn)錄酶C.基因文庫就是基因組文庫D.cDNA文庫只含有某種生物的一部分基因3.下列有關(guān)基因表達(dá)載體的敘述，不正確的是()A.具有復(fù)制原點(diǎn)，使目的基因能在受體細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)增B.具有啟動(dòng)子，作為核糖體識(shí)別、結(jié)合的部位C.具有標(biāo)記基因，有利于重組DNA的鑒定和選擇D.具有目的基因，以獲得特定的基因表達(dá)產(chǎn)物4.為了在大腸桿菌細(xì)胞中成功表達(dá)人胰島素基因，首先需要提取細(xì)胞的mRNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄等過程來獲取目的基因。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A.用于逆轉(zhuǎn)錄的mRNA只能從胰島B細(xì)胞中獲取B.逆轉(zhuǎn)錄過程需要四種游離的核糖核苷酸作為原料C.經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄得到的目的基因不含啟動(dòng)子和內(nèi)含子D.逆轉(zhuǎn)錄獲取目的基因時(shí)，遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則5.圖中pUC18是一種常用質(zhì)粒，其中ori為復(fù)制原點(diǎn)，Ap為青霉素抗性基因，lacZ基因能合成某種酶，該酶能將無色染料X-gal變成藍(lán)色。已知目的基因插入的位置如圖所示。為了快速篩選出獲得目的基因的大腸桿菌，平板培養(yǎng)基內(nèi)除了要有大腸桿菌生長(zhǎng)所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和瓊脂，還必須加入其他物質(zhì)。下列敘述正確的是()A.只需要加入青霉素B.lacZ基因是目的基因C.含有目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌不能將X-gal變成藍(lán)色D.ori可以啟動(dòng)目的基因的轉(zhuǎn)錄6.[2022江蘇揚(yáng)州邗江中學(xué)高二期中改編]用雞血進(jìn)行DNA的粗提取與鑒定。下列有關(guān)敘述不正確的是()A.將雞血靜置后取上清液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)B.DNA在2mol·L-1的NaCl溶液中溶解度最大C.可用冰乙醇進(jìn)行DNA的純化D.在沸水浴條件下，DNA與二苯胺試劑反應(yīng)呈藍(lán)色7.[2023江蘇鹽城伍佑中學(xué)高二調(diào)研]下列關(guān)于DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)的各步驟操作的目的的表述，錯(cuò)誤的是()A.沉淀的血細(xì)胞中加水是為了使血細(xì)胞破裂從而提取DNAB.加入物質(zhì)的量濃度為2mol·L-1的NaCl溶液是為了溶解DNAC.向溶解有DNA的NaCl溶液中加蒸餾水是為了洗滌DNA，除去雜質(zhì)D.在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色8.在DNA的粗提取實(shí)驗(yàn)中，將核內(nèi)DNA溶解于2mol·L-1的NaCl溶液中后，緩緩加入蒸餾水直到絮狀物不再增加，此時(shí)若繼續(xù)加蒸餾水，看到的現(xiàn)象是()A.絮狀物量不變B.絮狀物量增加C.絮狀物量減少D.絮狀物量先增加后減少9.下圖表示以雞血為實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行DNA的粗提取與鑒定的操作程序。請(qǐng)分析并回答下列問題：(1)步驟一中向雞血細(xì)胞液中加入并攪拌，可使雞血細(xì)胞破裂。

(2)步驟二中過濾后，收集含有DNA的。

(3)步驟三、四的操作原理是DNA在中溶解度不同而去除雜質(zhì)。步驟四的主要操作是滴加蒸餾水并攪拌，當(dāng)觀察到溶液中時(shí)，操作停止，過濾去除溶液中的雜質(zhì)。

(4)氯仿密度大于水，能使蛋白質(zhì)變性沉淀，與水和DNA均不相溶，且對(duì)DNA影響極小。為了進(jìn)一步提高DNA純度，依據(jù)氯仿的特性，步驟七的具體操作是將步驟六獲得的濾液與等量的氯仿充分混合，靜置一段時(shí)間，吸取，然后加入等體積的，至燒杯中會(huì)出現(xiàn)白色絮狀物，這就是粗提取的DNA。

關(guān)鍵能力提升練10.[2023江蘇宿遷泗洪中學(xué)高三月考]下圖為基因表達(dá)載體的模式圖。下列敘述錯(cuò)誤的是()A.構(gòu)建基因的表達(dá)載體需要用到限制酶和DNA連接酶B.終止子位于基因的下游，使翻譯在所需要的地方停止下來C.構(gòu)建成功后可使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并遺傳給下一代D.抗生素抗性基因作為標(biāo)記基因，可檢測(cè)受體細(xì)胞中是否導(dǎo)入了目的基因11.[多選]下圖是基因文庫的構(gòu)建和獲取目的基因的示意圖。下列敘述不正確的是()A.通過該途徑能獲得該生物的全部基因B.①過程通常只用一種DNA酶切割全部DNAC.②過程需要DNA連接酶的作用D.④過程可用相應(yīng)抗體，利用核酸分子雜交技術(shù)獲取目的基因12.某研究組對(duì)DNA粗提取的步驟進(jìn)行了創(chuàng)新：利用液氮快速粉碎植物樣品，采用堿裂解(0.5mol·L-1NaOH使細(xì)胞破碎)的方式提取DNA，提取的DNA利用TE緩沖液中和，得到DNA粗提溶液。下列說法錯(cuò)誤的是()A.可采用洋蔥或雞血細(xì)胞為材料提取DNAB.利用液氮處理樣品的作用是使植物細(xì)胞彼此分離C.堿溶液可能可以破壞細(xì)胞質(zhì)膜和細(xì)胞壁D.TE緩沖液中析出的DNA應(yīng)溶解在2mol·L-1的NaCl溶液中13.[多選]提取生物大分子的基本思路是選用一定的物理或化學(xué)方法分離具有不同物理或化學(xué)性質(zhì)的生物大分子，如提取DNA就要利用它與RNA、蛋白質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異來去除其他成分。下列有關(guān)DNA的粗提取與鑒定的敘述，錯(cuò)誤的是()A.可用新鮮豬血代替雞血做實(shí)驗(yàn)材料B.為避免顏色干擾，實(shí)驗(yàn)中不能采用菠菜葉片作為實(shí)驗(yàn)材料C.收集、保存好剩余的二苯胺試劑，以備以后實(shí)驗(yàn)時(shí)繼續(xù)使用D.純化提取的DNA時(shí)，要控制NaCl溶液濃度反復(fù)溶解和析出DNA14.下圖是“DNA的粗提取和鑒定”實(shí)驗(yàn)中幾個(gè)重要的操作示意圖。下列敘述錯(cuò)誤的是()A.圖①的原理是DNA不溶于冰乙醇，而某些蛋白質(zhì)可溶于冰乙醇B.圖①和圖③都需要用玻璃棒沿一個(gè)方向輕輕攪拌，便于DNA的析出并保持結(jié)構(gòu)完整C.若圖③操作后接圖②操作，則DNA會(huì)留在濾液中D.若圖④操作后接圖②操作，則DNA會(huì)留在紗布上15.[2022江蘇泰州中學(xué)高二期中]葉綠體DNA(cpDNA)大多為環(huán)狀雙鏈，其基因組序列高度保守，目前已在分子標(biāo)記、核質(zhì)互作、葉綠體基因工程等方面開展了廣泛研究。下列為提取cpDNA的相關(guān)步驟，其中SDS能瓦解生物膜，苯酚使蛋白質(zhì)變性析出，氯仿與苯酚互溶，易于除去苯酚。(1)葉綠體的分離①勻漿使細(xì)胞破碎：將葉片于4℃冰箱黑暗饑餓處理12~24h后，剪成1cm長(zhǎng)度，放入勻漿機(jī)，倒入緩沖液，先低速勻漿2次，再高速勻漿3次，每次5~10s。勻漿前黑暗饑餓處理的目的是，有利于cpDNA的提取。

②離心得到葉綠體的粗提物：將勻漿液過濾后離心，棄沉淀以去除細(xì)胞殘?。粚⒌玫降纳锨逡涸俅坞x心，棄上清液，即得葉綠體的粗提物，第二次離心的速度比第一次的。整個(gè)過程中線粒體分布在中，從而避免了線粒體DNA對(duì)cpDNA的污染。

(2)去除核DNA：向葉綠體的粗提物中加入、緩沖液，37℃靜置15min后，離心取，從而去除吸附在葉綠體外膜上的核DNA。

(3)葉綠體的裂解和cpDNA的粗提：將純化的葉綠體加入緩沖液、SDS、蛋白酶K，55℃水浴3h，使葉綠體裂解，釋放出cpDNA，離心取上清液。在上清液中加入苯酚和氯仿，離心后的液體包括上層水相、中層變性蛋白和下層有機(jī)溶劑，cpDNA分布于中，小心用吸取該層液體。

(4)沉淀cpDNA：向粗提溶液中加入3mol·L-1的醋酸鈉及，離心取沉淀物。

(5)電泳檢測(cè)cpDNA：下圖中1、2是某品種茶樹用上述方法提取到的cpDNA的凝膠電泳結(jié)果，其中M是已知大小的不同DNA的混合物。組2無條帶，表明提取不成功，其可能的原因之一是操作過程中葉綠體裂解時(shí)間過長(zhǎng)，使。

16.科研人員利用大腸桿菌構(gòu)建了抗蟲基因文庫。最新研究發(fā)現(xiàn)，漏斗蜘蛛中的AH基因控制合成的毒素肽具有顯著的殺蟲效果，現(xiàn)以p-B質(zhì)粒為載體，構(gòu)建AH基因的cDNA文庫。圖1表示p-B質(zhì)粒，其中Cmlr表示氯霉素抗性基因，ccdB基因表達(dá)產(chǎn)物能抑制大腸桿菌DNA的復(fù)制，圖中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)，且不同種的限制酶的識(shí)別序列不同，其中AiuⅠ、XbaⅠ、SspⅠ和MfeⅠ識(shí)別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別是↓—AGCT—、↓—TCTAGA—、↓—AATATT—、↓—CAATTG—。請(qǐng)分析并回答下列問題：(1)為獲得AH基因的cDNA，先要從漏斗蜘蛛的毒素肽分泌細(xì)胞中提取，再通過合成出AH基因的cDNA。若從漏斗蜘蛛其他組織細(xì)胞提取，則難以成功，原因是。

(2)若已知AH基因的cDNA兩端部分序列為5'AACTATGCGC……CGTAGCCTCT3'，請(qǐng)寫出PCR擴(kuò)增該cDNA時(shí)的兩個(gè)引物對(duì)應(yīng)的局部序列(前10個(gè)堿基序列)，并標(biāo)明5'端和3'端：、。一個(gè)初始雙鏈cDNA經(jīng)四輪循環(huán)后，共消耗這兩種引物的數(shù)量為個(gè)。

(3)利用圖中的質(zhì)粒和AH基因構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，宜選用限制酶雙酶切割質(zhì)粒，再選用限制酶切割目的基因，將切割后獲得的DNA片段混合，經(jīng)處理后，再與大腸桿菌混合培養(yǎng)。

學(xué)科素養(yǎng)創(chuàng)新練17.生物興趣小組以蘋果為材料開展細(xì)胞中DNA的含量測(cè)定研究，主要實(shí)驗(yàn)流程如下圖，其中SDS(十二烷基硫酸鈉)具有破壞細(xì)胞質(zhì)膜和核膜、使蛋白質(zhì)變性等作用，苯酚和氯仿不溶或微溶于水。它們的密度均大于水。請(qǐng)分析并回答下列問題：(1)步驟①中蘋果組織研磨前先經(jīng)液氮冷凍處理的主要優(yōu)點(diǎn)是。

(2)根據(jù)實(shí)驗(yàn)流程可推知，步驟③④所依據(jù)的原理是。

(3)步驟⑤加入2~3倍冰乙醇的目的是。

(4)下面是某同學(xué)設(shè)計(jì)的DNA鑒定實(shí)驗(yàn)的主要步驟：①取1支20mL試管，向其中先后加入物質(zhì)的量濃度為2mol·L-1的NaCl溶液5mL和少量絮狀DNA沉淀，用玻璃棒攪拌使其溶解；②向試管中加入4mL二苯胺試劑，混勻后將試管置于50~60℃水浴中加熱5min，待試管冷卻后，觀察溶液是否變藍(lán)。請(qǐng)指出上面實(shí)驗(yàn)步驟中的兩個(gè)錯(cuò)誤：、。

(5)該興趣小組成員還以同種蘋果的不同組織器官為材料，測(cè)定不同組織細(xì)胞中DNA的含量，結(jié)果如下表(表中數(shù)值為每克生物材料干重中DNA的含量)。組織器官韌皮部形成層冬芽秋梢嫩葉成熟葉片含量/(μg·g-1)80.00150.00160.00120.0070.00試從細(xì)胞分裂的角度，解釋不同生物材料中DNA的含量差異明顯的原因：。

第3課時(shí)目的基因的獲取、DNA的粗提取和鑒定、基因表達(dá)載體的構(gòu)建參考答案1.【答案】B【解析】基因工程中獲取目的基因的方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增、化學(xué)合成法等，對(duì)于比較小且核苷酸序列已知的目的基因來說，可以通過DNA合成儀用化學(xué)合成法直接人工合成，B項(xiàng)符合題意。2.【答案】C【解析】目的基因可以用限制酶從自然界中分離，也可以通過人工合成的方法獲取，A項(xiàng)正確；cDNA文庫的構(gòu)建需要用到逆轉(zhuǎn)錄酶，以mRNA為模板，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄酶催化形成cDNA，B項(xiàng)正確；基因文庫包括基因組文庫和部分基因文庫，C項(xiàng)錯(cuò)誤；cDNA文庫是部分基因文庫中的一種，只包含一種生物的部分基因，D項(xiàng)正確。3.【答案】B【解析】基因表達(dá)載體具有啟動(dòng)子，是RNA聚合酶識(shí)別、結(jié)合的部位，B項(xiàng)錯(cuò)誤。4.【答案】B【解析】胰島素基因只在胰島B細(xì)胞中表達(dá)，因此只能從胰島B細(xì)胞中獲取用于逆轉(zhuǎn)錄的mRNA，A項(xiàng)正確；逆轉(zhuǎn)錄過程是以RNA為模板合成DNA的過程，以四種游離的脫氧核糖核苷酸為原料，B項(xiàng)錯(cuò)誤；真核細(xì)胞的mRNA轉(zhuǎn)錄后通過加工剪切了內(nèi)含子和啟動(dòng)子，因此逆轉(zhuǎn)錄得到的基因不含啟動(dòng)子和內(nèi)含子，C項(xiàng)正確；逆轉(zhuǎn)錄獲取目的基因利用堿基互補(bǔ)配對(duì)原則獲得DNA鏈，D項(xiàng)正確。5.【答案】C【解析】該培養(yǎng)基中應(yīng)加入青霉素和無色染料X-gal，A項(xiàng)錯(cuò)誤；lacZ基因的作用為標(biāo)記基因，B項(xiàng)錯(cuò)誤；重組質(zhì)粒中插入目的基因破壞了lacZ基因，含這種重組質(zhì)粒的大腸桿菌，不能合成該酶，故無法將無色染料X-gal變成藍(lán)色，C項(xiàng)正確；啟動(dòng)子在基因的首段，它是RNA聚合酶的結(jié)合位點(diǎn)，能控制轉(zhuǎn)錄的開始，只有啟動(dòng)子才能驅(qū)動(dòng)目的基因的轉(zhuǎn)錄，D項(xiàng)錯(cuò)誤。6.【答案】A【解析】在新鮮雞血中加入適量的檸檬酸鈉防止血液凝固，混合均勻后置于4℃冰箱內(nèi)，靜置1天，取血細(xì)胞的沉淀物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，A項(xiàng)錯(cuò)誤。7.【答案】C【解析】沉淀的血細(xì)胞中加水是為了使血細(xì)胞破裂釋放DNA，從而提取DNA，A項(xiàng)正確；NaCl溶液的物質(zhì)的量濃度為2mol·L-1時(shí)，DNA溶解，B項(xiàng)正確；向溶解DNA的燒杯中加蒸餾水是為了降低NaCl溶液的濃度，從而使DNA析出，C項(xiàng)錯(cuò)誤；在一定溫度(沸水浴)下，DNA遇二苯胺試劑會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色，D項(xiàng)正確。8.【答案】C【解析】DNA在2mol·L-1的NaCl溶液中溶解，緩緩加入蒸餾水使得NaCl溶液濃度降低，則DNA的溶解度降低，DNA不斷析出；DNA絮狀物量不再增加時(shí)，此時(shí)DNA的溶解度最低，如繼續(xù)加蒸餾水，DNA的溶解度增加，DNA絮狀物量減少，C項(xiàng)符合題意。9.【答案】(1)蒸餾水(2)濾液(3)不同濃度的NaCl溶液(4)絮狀物不再增加上清液冰乙醇【解析】(1)分析流程圖可知，進(jìn)行DNA的粗提取與鑒定時(shí)，步驟一中向雞血細(xì)胞液中加入蒸餾水并攪拌，可使雞血細(xì)胞破裂。(2)步驟二中過濾后，可除去細(xì)胞質(zhì)膜碎片等不溶物，收集含有DNA的濾液。(3)步驟三、四的操作原理是DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同而去除雜質(zhì)。步驟四的主要操作是滴加蒸餾水并攪拌，當(dāng)觀察到溶液中絮狀物(主要成分是DNA)不再增加時(shí)，操作停止，過濾去除溶液中的雜質(zhì)。(4)氯仿密度大于水，能使蛋白質(zhì)變性沉淀，與水和DNA均不相溶，且對(duì)DNA影響極小。為了進(jìn)一步提高DNA純度，依據(jù)氯仿的特性，步驟七的具體操作是將步驟六獲得的濾液與等量的氯仿充分混合，靜置一段時(shí)間，吸取上清液，然后加入等體積的冰乙醇，至燒杯中會(huì)出現(xiàn)白色絮狀物，這就是粗提取的DNA。10.【答案】B【解析】終止子位于基因的下游，其作用是使轉(zhuǎn)錄在相應(yīng)的地方停止，不是使翻譯在所需要的地方停止下來，B項(xiàng)錯(cuò)誤。11.【答案】BD【解析】該過程為基因組文庫的構(gòu)建過程，基因組文庫包含該生物的所有基因，A項(xiàng)正確；①過程使用限制酶，其識(shí)別并切割DNA分子上特定的核苷酸序列，B項(xiàng)錯(cuò)誤；②過程需要DNA連接酶的作用，C項(xiàng)正確；④過程可用特定的基因探針，利用核酸分子雜交技術(shù)獲取目的基因，D項(xiàng)錯(cuò)誤。12.【答案】D【解析】洋蔥或雞血細(xì)胞均有細(xì)胞核，核中有DNA，所以可以用二者為材料提取DNA，A項(xiàng)正確；由題干“液氮快速粉碎植物樣品”可知，利用液氮處理樣品的作用是使植物細(xì)胞彼此分離，B項(xiàng)正確；由題干“NaOH使細(xì)胞破碎”可知，NaOH呈堿性，堿溶液可能可以破壞細(xì)胞質(zhì)膜和細(xì)胞壁，C項(xiàng)正確；由題干可知，TE緩沖液就是溶解DNA的溶液，D項(xiàng)錯(cuò)誤。13.【答案】ABC【解析】豬屬于哺乳動(dòng)物，哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞沒有細(xì)胞核，因此新鮮豬血不能作為該實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)材料，A項(xiàng)錯(cuò)誤；加入酒精溶解色素后過濾，DNA粗提取后不含葉綠素，用菠菜葉做實(shí)驗(yàn)不影響實(shí)驗(yàn)效果，B項(xiàng)錯(cuò)誤；二苯胺試劑需要現(xiàn)配現(xiàn)用，C項(xiàng)錯(cuò)誤；純化DNA時(shí)，要控制NaCl溶液濃度過濾除去其中的雜質(zhì)，最后用2mol·L-1的NaCl溶液溶解DNA，D項(xiàng)正確。14.【答案】B【解析】圖①的原理是DNA不溶于冰乙醇，某些蛋白質(zhì)可溶于冰乙醇，以便除去溶于冰乙醇的雜質(zhì)，提取含雜質(zhì)較少(或較純凈)的DNA，A項(xiàng)正確；圖①中玻璃棒逆時(shí)針方向攪拌，目的是提取出含雜質(zhì)較少的DNA，圖③中玻璃棒順時(shí)針方向攪拌，目的是加速細(xì)胞吸水破裂，B項(xiàng)錯(cuò)誤；圖③操作是加入蒸餾水，破碎細(xì)胞，圖②操作是過濾，獲取含DNA的濾液，使DNA留在濾液中，C項(xiàng)正確；圖④操作是去除濾液中的雜質(zhì)，析出DNA，圖②操作是過濾，將DNA留在紗布上，D項(xiàng)正確。15.【答案】(1)①使葉綠體中的淀粉消耗掉②快上清液(2)DNA酶沉淀(3)上層水相移液槍(微量移液器)(4)冰乙醇(5)cpDNA片段斷裂或降解，所提取的cpDNA含量少【解析】(1)①勻漿使細(xì)胞破碎：將葉片于4℃冰箱黑暗饑餓處理12~24h后，剪成1cm長(zhǎng)度，放入勻漿機(jī)，倒入緩沖液，先低速勻漿2次，再高速勻漿3次，每次5~10s。勻漿前黑暗饑餓處理的目的是使葉綠體中的淀粉消耗掉，有利于cpDNA的提取。②離心得到葉綠體的粗提物：將勻漿液過濾后離心，棄沉淀以去除細(xì)胞殘?。粚⒌玫降纳锨逡涸俅坞x心，棄上清液，即得葉綠體的粗提物，第二次離心的速度比第一次的快。整個(gè)過程中線粒體分布在上清液中，從而避免了線粒體DNA對(duì)cpDNA的污染。(2)向葉綠體的粗提物中加入DNA酶可水解DNA，37℃靜置15min后，離心取沉淀，從而去除吸附在葉綠體外膜上的核DNA。(3)由于DNA可以溶解在水里，所以在上清液中加入苯酚和氯仿，離心后的液體包括上層水相、中層變性蛋白和下層有機(jī)溶劑，cpDNA分布于上層水相中，小心用移液槍吸取該層液體。(4)DNA不溶于冰乙醇，向粗提溶液中加入3mol·L-1的醋酸鈉及冰乙醇，使DNA沉淀，所以離心取沉淀物獲取cpDNA。(5)組2無條帶，表明提取不成功，其可能的原因之一是操作過程中葉綠體裂解時(shí)間過長(zhǎng)，使cpDNA片段斷裂或降解，所提取的cpDNA含量少。16.【答案】(1)mRNA逆轉(zhuǎn)錄AH基因在其他組織細(xì)胞中不表達(dá)，提取不到AH基因的mRNA(2)5'AACTATGCGC3'5'AGAGGCTACG3'30(3)AiuⅠ和MfeⅠSspⅠ和MfeⅠDNA連接酶【解析】(1)AH基因的cDNA可以通過逆轉(zhuǎn)錄獲得，因此需要先從漏斗蜘蛛的毒素肽分泌細(xì)胞中提取mRNA，再逆轉(zhuǎn)錄合成AH基因的cDNA。由于AH基因在其他組織細(xì)胞中是不表達(dá)的，因此若從漏斗蜘蛛其他組織細(xì)胞提取，則難以成功。(2)根據(jù)題意分析，已知AH基因的cDNA兩端部分序列為5'AACTATGCGC……CGTAGCCTCT3'，則其在利用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)，需要兩種不同的引物，且引物與目的基因(雙鏈)兩側(cè)的堿基序列是互補(bǔ)的，因此兩個(gè)引物對(duì)應(yīng)的局部序列(前10個(gè)堿基序列)為5'AACTATGCGC3'、5'AG