病毒性胃腸炎患者中諾如病毒感染情況的檢測分析

1/1病毒性胃腸炎患者中諾如病毒感染情況的檢測分析病毒性胃腸炎患者中諾如病毒感染情況的檢測分析【摘要】目的：

探討病毒性胃腸炎患者中諾如病毒感染情況的檢測分析。

方法：

通過對2013年1-9月于筆者所在醫(yī)院進行治療的120例病毒性胃腸炎患者，分別運用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法檢測和轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實驗檢測，對兩種檢測方法的靈敏度、特異性進行比較。

結(jié)果：

運用轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實驗后GGⅠ陽性7例，占5.83%，陰性113例，占94.17%，GGⅡ陽性46例，占38.33%，陰性74例，占61.67%。

轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實驗行檢測，陽性53例，占44.17%，其中GGⅠ患者7例，占陽性患者的13.21%，GGⅡ患者46例，占陽性患者的86.79%；恒溫快速檢測法檢測出陽性患者53例，占總患者數(shù)的44.17%，其中不同性別、不同年齡段比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05），轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實驗的靈敏度及特異性分別為89.09%、93.85%，陽性預(yù)測值92.45%，陰性預(yù)測值91.04%。

結(jié)論：

臨床運用轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實驗檢測病毒性胃腸炎患者中諾如病毒感染情況，具有較高的靈敏度及特異性，臨床值得推廣。

【關(guān)鍵詞】病毒性胃腸炎；諾如病毒；感染；檢測分析中圖分類號R446文獻(xiàn)標(biāo)識碼B文章編號1674-6805（2014）11-0053-03DetectionofViralGastroenteritisPatientsNorVirusInfection/LIUYuan-xing，ZHENGZhi-yuan.//ChineseandForeignMedicalResearch，2014，12（11）：

53-55【Abstract】Objective：

Toinvestigatethedetectionandanalysisofviralgastroenteritispatientsnorvirusinfection.Method：

120casesofviralgastroenteritispatientsfromJanuary2013toSeptember2013inauthorshospitalfortreatmentwereusingreversetranscriptionpolymerasechainreactionassayandreversetranscriptionusingthetranscriptioncollaborativeassayoftwospeciesdetectionsensitivity，specificitycompared.Result：

TheuseofreversetranscriptioncollaborativeexperimentGGⅠpositivepatientswere7cases，accountingfor5.83%，negativepatientswere113cases，accountingfor94.17%，GGⅡpositivepatientswere46cases，accountingfor38.33%，negativepatientswere74cases，accountingfor61.67%.Transcriptionreversetranscriptioncollaborativeexperimentallinedetection，positivepatientswere53cases，accountingfor44.17%，whichincluded7casesGGⅠpatients，accountingfor13.21%，46casesGGⅡpatients，accountingfor86.79%；thermostatrapidassaydetectedpositivethenumberofpatientswas53cases，accountingfor44.16%ofthetotalnumberofpatients，differentsexes，differentagesrelativelyhadnosignificantdifference（P0.05），reversetranscriptioncollaborativeexperimentalsensitivityandspecificitywere89.09%，93.85%，positivepredictivevaluewas92.45%，negativepredictivevaluewas91.04%.Conclusion：

Theclinicaluseofreversetranscriptioncollaborativeassayinpatientswithneitherviralgastroenteritisnorvirusinfection，hashighsensitivityandspecificity，clinicalworthyofpromotion.【Keywords】Viralgastroenteritis；Norvirus；Infection；DetectionandanalysisFirst-authorsaddress：

MeizhouPeoplesHospital，Meizhou514031，China病毒性胃腸炎是臨床常見病癥，臨床表現(xiàn)主要包括腹痛、嘔吐等。

其中較為常見的病原體病毒包括：

腸道腺病毒、杯狀病毒等，諾如病毒是導(dǎo)致患者非細(xì)菌性急性胃腸炎最為重要的病原體，同時也是導(dǎo)致兒童發(fā)生急性腹瀉的主要病原體[1]。

本文通過對2013年1-9月于筆者所于醫(yī)院進行治療的120例病毒性胃腸炎患者運用兩種檢測諾如病毒的方法進行檢測結(jié)果比較，分析報道如下。

1資料與方法1.1一般資料選取2013年1-9月于筆者所在醫(yī)院治療的120例病毒性胃腸炎患者，其中男53例，女67例，年齡18～76歲，平均（45.171.35）歲。

入選的對象包括：

（1）每日排便次數(shù)為3次及3次以上，大便的性狀發(fā)生改變，經(jīng)大便常規(guī)檢查WBC15；（2）每日排便次數(shù)不到3次，但伴有大便性狀發(fā)生改變及嘔吐癥狀；（3）每日排便次數(shù)不到3次，伴有嘔吐為主的癥狀。

所有患者均伴有嘔吐、腹瀉等癥狀，同時需排除細(xì)菌感染及寄生蟲感染。

1.2方法1.2.1樣本采集方法樣本采集盒為筆者所在醫(yī)院統(tǒng)一發(fā)放，采集盒外層包裹可開啟的塑料袋，所有采集樣本均為患者發(fā)病3d內(nèi)的糞便樣本，每份樣本的樣本量不得低于5ml，樣本采集后應(yīng)立即低溫送檢，對不能進行檢驗的樣本應(yīng)在-20℃低溫保存，禁止樣本反復(fù)進行凍融。

1.2.2樣本處理方法糞便樣本室溫下復(fù)融，將樣本稀釋液1ml中加入0.1g固態(tài)糞便樣本或者0.1ml液態(tài)糞便樣本，使用渦旋儀混勻，室溫條件下靜置10min，以5500r/min轉(zhuǎn)速離心5min。

1.2.3病毒RNA提取運用病毒核酸提取試劑盒（美國QIAGEN公司提供），按照試劑盒的操作說明進行操作。

1.2.4逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)反應(yīng)體系包括：

2.5l緩沖液，2.5lBSA，10U/lAMV-RT，模板RNA1.5l，2.5mol/LMgCl2等。

將PCR反應(yīng)體系，離心，使用PCR儀擴增。

在94℃變性反應(yīng)3min后，94℃反應(yīng)1min，58℃反應(yīng)80s，72℃反應(yīng)1min，反復(fù)進行30個循環(huán)后，將72℃反應(yīng)保持10min，反應(yīng)后使用1.5%瓊脂凝膠進行電泳。

1.2.5恒溫快速檢測法將試劑A和試劑B放入擴增管中，加入模板RNA，同時加入陽性對照及陰性對照。

將反應(yīng)體系在43℃條件下預(yù)熱，將酶預(yù)熱，將酶加入反應(yīng)體系中，進行檢測。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理數(shù)據(jù)資料利用SPSS15.0軟件進行統(tǒng)計分析，計數(shù)與計量資料分別利用字2檢驗與t檢驗表示，P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果2.1轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實驗對諾如病毒的檢測結(jié)果運用轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實驗后GGⅠ陽性患者7例，占5.83%，陰性患者113例，占94.17%，GGⅡ陽性患者46例，占38.33%，陰性患者74例，占61.67%。

轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實驗對病毒性胃腸炎患者的糞便進行檢測，陽性患者53例，占44.17%，其中GGⅠ患者7例，占陽性患者的13.21%，GGⅡ患者46例，占陽性患者的86.79%。

轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實驗對GGⅠ及GGⅡ檢測結(jié)果見表1。

表1轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實驗對諾如病毒的檢測結(jié)果例（%）諾如病毒類型陽性陰性GGⅠ（n=120）7（5.83）113（94.17）GGⅡ（n=120）46（38.33）74（61.67）恒溫快速檢測法檢測出陽性患者53例，占44.17%，其中男性患者檢出率為41.51%（22/53），女性患者檢出率為46.27%（31/67），兩者比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（字2=0.721，P=0.659）。

患者按照年齡劃分，0.05），見表2。

表2不同年齡段陽性檢出率年齡例數(shù)（例）陽性（例）陽性率（%）11歲18633.3311～20歲14857.1421～30歲161168.7531～40歲19947.3741～50歲21838.1051～60歲21733.3361歲11436.362.2轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實驗與逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法檢測結(jié)果比較運用兩種檢測方法均為陽性49例，均為陰性61例，10例樣本兩種方法檢測結(jié)果不同，轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實驗檢測為陽性而逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法檢測為陰性4例，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測為陽性而轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實驗檢測為陰性6例。

以逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)為標(biāo)準(zhǔn)，計算轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實驗的靈敏度及特異性，靈敏度為89.09%，特異度93.85%，陽性預(yù)測值92.45%，陰性預(yù)測值91.04%。

兩種檢測結(jié)果比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.1260.05），見表3。

表3轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實驗與逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法檢測結(jié)果比較例方法轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實驗陽性陰性合計逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法陽性49655陰性46165合計53671203討論病毒性胃腸炎是世界性的公共衛(wèi)生問題，研究發(fā)現(xiàn)，諾如病毒是引發(fā)急性病毒性腸胃炎的重要病原體[2]。

有資料報道，近年來，全球范圍內(nèi)多次暴發(fā)因諾如病毒而導(dǎo)致的急性胃腸炎[3]。

諾如病毒又名諾瓦克樣病毒，屬杯狀病毒科，其具有感染性高、抵抗能力強、傳播速度快、致病劑量低等特點，感染后可是患者持續(xù)缺乏免疫力，又被稱作胃腸性流感[4]。

諾如病毒可以通過被污染的食物、水源、接觸、糞口、空氣飛沫等途徑發(fā)生感染。

冬季發(fā)病率高，通常普遍在醫(yī)院、學(xué)校、幼兒園等人口密集的場所暴發(fā)。

根據(jù)病毒的RNA聚合酶以及衣殼蛋白的核苷酸序列的差別，可以將諾如病毒區(qū)分為5個遺傳組，GⅠ及GⅡ為導(dǎo)致非細(xì)菌性胃腸炎暴發(fā)的主要原因[5-6]。

諾如病毒為單股正鏈病毒，呈現(xiàn)圓球狀，直徑大小在25～38nm。

從諾如病毒發(fā)現(xiàn)至今，臨床上諾如病毒的診斷也有了極大的突破[7]。

諾如病毒不能通過細(xì)菌培養(yǎng)，并且為發(fā)現(xiàn)適合的動物模型，傳統(tǒng)的諾如病毒檢測方法是應(yīng)用電鏡檢出，但電鏡檢出具有檢出率低且檢測結(jié)果與操作者的手法密切相關(guān)，因此，使人們忽視了諾如病毒的危害[8]。

隨著我國因諾如病毒而暴發(fā)的病毒性胃腸炎報道的增加，諾如病毒的嚴(yán)重性及危害性也受到廣泛的重視。

目前，臨床普遍應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法及轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實驗檢測諾如病毒，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)具有靈敏度和特異性高的特點，但同時對檢測人員技術(shù)水平要求較高，需要更加先進的儀器設(shè)備[9]。

諾如病毒屬于杯狀病毒科中諾如病毒屬，按照其生物分子學(xué)體征可以分為5個基因型，GⅠ～GⅤ，其中GⅠ、GⅡ及GⅣ可感染人[10]。

我國病毒性胃腸炎患者中諾如病毒感染較為普遍，其中以GⅡ型感染為主。

我國以往對諾如病毒感染多針對于嬰幼兒腹瀉，但研究顯示在各年齡段均可能感染諾如病毒[11]。

由于諾如病毒不能進行體外培養(yǎng)，也位找到適合的動物模型，使其研究受到制約[12]。

臨床常用的諾如病毒檢測方法包括，電鏡法、分子檢測等[13]。

逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法具有特異性高、靈敏度好的特點，目前逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法仍為臨床常用的諾如病毒檢測方法[14-15]。

本研究，通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法與轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實驗檢測諾如病毒結(jié)果進行比較。

轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實驗對病毒性胃腸炎患者的糞便進行檢測，陽性患者53例，占44.17%，其中GGⅠ患者7例，占陽性患者的13.21%，GGⅡ患者46例，占陽性患者的86.79%；恒溫快速檢測法檢測出陽性患者53例，占44.17%，以逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)為標(biāo)準(zhǔn)，計算轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實驗的靈敏度及特異性，靈敏度為89.09%，特異度93.85%，陽性預(yù)測值92.45%，陰性預(yù)測值91.04%。

兩種檢測結(jié)果比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.1260.05）。

總而言之，轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實驗可以快速、有效、靈敏的檢測諾如病毒，臨床值得推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)[1]田耕，王晶，李全瑞，等.56例散發(fā)性諾如病毒性腸炎臨床特點分析[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2009，36（6）：

1187-1191.[2]高志勇，呂虹，黃芳，等.90例病毒性胃腸炎患者糞便中諾如病毒檢出情況分析[J].中國病原生物學(xué)雜志，2008，3（8）：

564-566.[3]張海龍，楊洪，陽帆，等.2008年深圳市感染性病毒性腹瀉中諾如病毒的感染分析[J].疾病監(jiān)測，2009，24（12）：

918-923.[4]陳振明，曹曉鷗，曾紅惠，等.佛山市南海區(qū)病毒性胃腸炎的病原體監(jiān)測分析[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2012，39（4）：

995-998.[5]MathapatiBS，MishraN，RajukumarK，etal.Entryofbovineviraldiarrheavirusintoovinecellsoccursthroughclathrin-dependentendocytosisandlowpH-dependentfusion[J].InVitroCellDevBiolAnim，2010，46（5）：

403-407.[6]紀(jì)蕾，吳曉芳，徐德順，等.湖州市非細(xì)菌性急性胃腸炎暴發(fā)中諾如病毒的分析生物學(xué)特點初步研究[J].病毒學(xué)報，2011，27（5）：

469-474.[7]陳永志，陳小岳.諾如病毒暴發(fā)的流行病學(xué)研究進展[J].中國人獸共患病學(xué)報，2012，28（4）：

398-402.[8]呂虹，高志勇，張國軍，等.諾如病毒性胃腸炎快速檢測方法的研究[J].首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2012，33（2）：

148-152.[9]弋英，汪照國，張洪花.青島地區(qū)2010年諾如病毒感染流行病學(xué)及基因型分析[J].醫(yī)學(xué)動物防制，2013，29（4）：

376-378.[10]鄭惠能，李莉，陳娟娟，等.廈門地區(qū)病毒性腹瀉諾如病毒感