2024年高中生物新教材同步選擇性必修第三冊 第3章 第2節(jié) 第1課時 目的基因的篩選與獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建含答案

2024年高中生物新教材同步選擇性必修第三冊第3章第2節(jié)第1課時目的基因的篩選與獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建含答案第2節(jié)基因工程的基本操作程序第1課時目的基因的篩選與獲取、基因表達(dá)載體的構(gòu)建[學(xué)習(xí)目標(biāo)]1.簡述PCR的原理、條件及過程。2.簡述基因表達(dá)載體的組成及構(gòu)建過程。一、目的基因的篩選與獲取1．培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的四個步驟(1)目的基因的篩選與獲取。(2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建。(3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞。(4)目的基因的檢測與鑒定。2．目的基因(1)概念：在基因工程的設(shè)計和操作中，用于改變受體細(xì)胞性狀或獲得預(yù)期表達(dá)產(chǎn)物等的基因就是目的基因。(2)作用：根據(jù)不同的需要，目的基因是不同的，它主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因。(3)類型：與生物抗逆性、生產(chǎn)藥物、毒物降解和工業(yè)用酶等相關(guān)的基因，如培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉用到的Bt抗蟲蛋白基因，即Bt基因。3．篩選合適的目的基因：從相關(guān)的已知結(jié)構(gòu)和功能清晰的基因中進(jìn)行篩選是較為有效的方法之一。4．獲取目的基因的方法(1)人工合成目的基因。(2)常用PCR特異性地快速擴(kuò)增目的基因。(3)通過構(gòu)建基因文庫來獲取目的基因。5．利用PCR獲取和擴(kuò)增目的基因(1)含義：PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的縮寫。它是一項在體外提供參與DNA復(fù)制的各種組分與反應(yīng)條件，對目的基因的核苷酸序列進(jìn)行大量復(fù)制的技術(shù)。(2)原理：DNA半保留復(fù)制。(3)基本條件①場所：在一定的緩沖液中進(jìn)行，其中一般要添加Mg2＋。②模板：DNA母鏈。③原料：4種脫氧核苷酸。④酶：耐高溫的DNA聚合酶。⑤引物：使DNA聚合酶能夠從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸。(4)過程①變性：當(dāng)溫度超過90℃時，雙鏈DNA解聚為單鏈。②復(fù)性：當(dāng)溫度下降到50℃左右時，兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對與兩條單鏈DNA結(jié)合。③延伸：當(dāng)溫度上升到72℃左右時，溶液中的4種脫氧核苷酸在耐高溫的DNA聚合酶的作用下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則合成新的DNA鏈。(5)上一輪循環(huán)的產(chǎn)物可以作為下一個循環(huán)的模板，因而每一次循環(huán)后目的基因的量可以增加一倍，即成指數(shù)形式擴(kuò)增(約為2n，其中n為擴(kuò)增循環(huán)的次數(shù))。(6)鑒定：常采用瓊脂糖凝膠電泳來鑒定PCR的產(chǎn)物。判斷正誤(1)PCR反應(yīng)中溫度的周期性改變是為了DNA聚合酶催化不同的反應(yīng)()(2)PCR擴(kuò)增技術(shù)中，需用解旋酶使雙鏈DNA解聚()(3)PCR過程使用的DNA聚合酶的特點(diǎn)是耐高溫()(4)PCR技術(shù)中，DNA模板鏈上堿基G和C的比例越高，DNA變性解鏈的溫度就越高()答案(1)×(2)×(3)√(4)√解析(1)PCR反應(yīng)中溫度的周期性改變是為了變性、復(fù)性、延伸，DNA聚合酶催化子鏈的延伸。(2)PCR擴(kuò)增技術(shù)中，高溫使雙鏈DNA解聚。任務(wù)一：PCR擴(kuò)增技術(shù)圖1、圖2分別是PCR擴(kuò)增技術(shù)相關(guān)過程，請思考回答下列問題：1．PCR擴(kuò)增的是完整的模板DNA分子嗎？并說明理由。提示不是；PCR擴(kuò)增的僅僅是兩種引物之間所對應(yīng)的特定DNA片段。2．圖1所示利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，在第幾輪循環(huán)產(chǎn)物中開始出現(xiàn)兩條脫氧核苷酸鏈等長的DNA片段？比例是多少？提示第3輪；1/4。3．如果已知某目的基因的序列和結(jié)構(gòu)，利用PCR篩選和擴(kuò)增出該目的基因的關(guān)鍵是什么？提示根據(jù)目的基因兩端的核苷酸序列設(shè)計引物。4．圖2是某同學(xué)設(shè)計的兩組引物(只標(biāo)注了部分堿基序列)都不合理，請分別說明理由。提示第1組：引物Ⅰ和引物Ⅱ會因局部發(fā)生堿基互補(bǔ)配對而失效。第2組：引物Ⅰ′自身折疊后會因出現(xiàn)局部堿基互補(bǔ)配對而失效。5．要保證目的基因能與載體相連接，還要對引物進(jìn)行什么操作？提示要在兩種引物的5′端分別添加上限制酶的識別序列。6．如果循環(huán)n次，則共需消耗多少對引物？提示共需消耗2n－1對引物。PCR中的數(shù)量關(guān)系復(fù)制次數(shù)123nDNA分子數(shù)2482n含引物的DNA分子數(shù)2482n含其中一種引物的DNA分子數(shù)1＝21－13＝22－17＝23－12n－1同時含兩種引物的DNA分子數(shù)0＝21－22＝22－26＝23－22n－2共消耗引物的對數(shù)1＝21－13＝22－17＝23－12n－1含脫氧核苷酸鏈等長的DNA分子數(shù)0＝21－20＝22－42＝23－62n－2n1．(2023·山西太原高二診斷)下列有關(guān)獲取目的基因的敘述，錯誤的是()A．目的基因就是編碼蛋白質(zhì)的基因B．獲取目的基因是基因工程的第一步C．來自蘇云金桿菌的Bt抗蟲蛋白基因可作為轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的目的基因D．序列比對工具的應(yīng)用為科學(xué)家找到合適的目的基因提供了更多的機(jī)會答案A解析目的基因主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因，也可以是一些具有調(diào)控作用的因子，A錯誤。2．如圖表示利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的部分過程，其原理與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制類似。下列有關(guān)敘述錯誤的是()A．耐高溫的DNA聚合酶總將游離的脫氧核苷酸連接到3′端B．在第三輪循環(huán)產(chǎn)物中開始出現(xiàn)兩條脫氧核苷酸鏈等長的DNA片段C．引物之間或引物自身發(fā)生堿基互補(bǔ)配對，則不能有效擴(kuò)增目的基因D．從理論上推測，第三輪循環(huán)產(chǎn)物中含有引物A的DNA片段占3/4答案D解析由題圖可知，以原來的每條母鏈為模板經(jīng)第一輪合成的兩個DNA分子中，只含有引物A或引物B，而以新合成的子鏈為模板合成新DNA分子時，兩種引物都含有，故第三輪循環(huán)共產(chǎn)生8個DNA分子，其中含有引物A的分子是7個，即占7/8，D錯誤。二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建1．基因表達(dá)載體構(gòu)建的目的讓目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。2．基因表達(dá)載體的組成3．基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程(1)首先用一定的限制酶切割載體。(2)然后用同種限制酶或能產(chǎn)生相同末端的限制酶切割含有目的基因的DNA片段。(3)再利用DNA連接酶將含目的基因的DNA片段拼接到載體的切口處(如圖所示)。判斷正誤(1)基因工程操作程序的核心步驟是目的基因的獲取()(2)基因表達(dá)載體中有的含有啟動子和終止密碼子()(3)標(biāo)記基因不一定是抗生素抗性基因()答案(1)×(2)×(3)√解析(1)基因工程操作程序的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建。(2)基因表達(dá)載體中有的含有啟動子和終止子，終止密碼子位于mRNA上。任務(wù)二：分析基因表達(dá)載體構(gòu)建的目的和方法1．獲取Bt基因后不能直接將它導(dǎo)入受體細(xì)胞，是因為游離的DNA進(jìn)入受體細(xì)胞，一般會直接被分解，即使可以轉(zhuǎn)錄翻譯成蛋白質(zhì)，游離的DNA片段也無法隨著細(xì)胞分裂而進(jìn)行復(fù)制，導(dǎo)致子代細(xì)胞中不再含有目的基因。因此，獲取Bt基因后，還需要借助載體將其導(dǎo)入棉花細(xì)胞，才能使棉花植株獲得抗蟲特性。2．構(gòu)建基因表達(dá)載體時目的基因插入的位置應(yīng)該在哪里？為什么？提示啟動子下游和終止子上游；因為只有插入在啟動子和終止子之間，目的基因才可以正常表達(dá)。3．請結(jié)合圖示，回答下列問題：(1)構(gòu)建基因表達(dá)載體時，能否用SmaⅠ酶切割質(zhì)粒？為什么？提示不能；因為SmaⅠ會破壞質(zhì)粒的抗生素抗性基因。該基因是標(biāo)記基因，便于重組DNA分子的篩選，若被破壞，無法進(jìn)一步篩選。(2)與只使用EcoRⅠ相比較，使用BamHⅠ和HindⅢ兩種限制酶同時處理質(zhì)粒、外源DNA的優(yōu)點(diǎn)是什么？提示可以防止質(zhì)粒和目的基因的自身環(huán)化以及目的基因與載體的反向連接。1．區(qū)分啟動子和終止子與起始密碼子和終止密碼子啟動子和終止子位于DNA上，是基因表達(dá)載體必需的部分，而起始密碼子和終止密碼子位于mRNA上，決定翻譯的開始和結(jié)束。2．圖解限制酶的選擇原則(1)不破壞目的基因原則：如圖甲中可選擇PstⅠ，而不選擇SmaⅠ。(2)保留標(biāo)記基因、啟動子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)原則：所選擇的限制酶盡量不要破壞這些結(jié)構(gòu)，如圖乙中不選擇SmaⅠ。(3)確保出現(xiàn)相同黏性末端原則：通常選擇與切割目的基因相同的限制酶切割質(zhì)粒，如圖中PstⅠ；為避免目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化和隨意連接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，如圖也可選擇PstⅠ和EcoRⅠ兩種限制酶。拓展延伸真、原核細(xì)胞基因的結(jié)構(gòu)和表達(dá)(1)基因的結(jié)構(gòu)(2)基因表達(dá)遺傳信息①原核生物基因②真核生物基因3．下列關(guān)于基因表達(dá)載體構(gòu)建的敘述，錯誤的是()A．啟動子是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，組成它的基本單位是脫氧核苷酸B．基因表達(dá)載體的組成包括目的基因、啟動子、終止密碼子、標(biāo)記基因等組件C．人工構(gòu)建的誘導(dǎo)型啟動子，當(dāng)誘導(dǎo)物存在時，可激活或抑制目的基因的表達(dá)D．由于受體細(xì)胞不同，基因表達(dá)載體的構(gòu)建也有所差別答案B解析啟動子在基因的上游，它是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，組成它的基本單位是脫氧核苷酸，A正確；基因表達(dá)載體的組成包括目的基因、啟動子、終止子、標(biāo)記基因等，B錯誤；由于受體細(xì)胞有植物、動物以及微生物之分，以及目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法不同，因此基因表達(dá)載體的構(gòu)建是不完全相同的，D正確。4．(2023·江蘇蘇州高二期末)某科研小組利用質(zhì)粒(圖甲)和目的基因(圖乙)構(gòu)建重組DNA。下列分析不正確的是()A．用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割質(zhì)粒，可得到2條DNA片段B．不能用AluⅠ酶切割質(zhì)粒和外源DNA的原因是AluⅠ酶會破壞目的基因C．構(gòu)建重組DNA時，需選擇SmaⅠ酶和PstⅠ酶同時切割質(zhì)粒和外源DNAD．導(dǎo)入了重組DNA的細(xì)菌能在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長而不能在含氯霉素的培養(yǎng)基上生長答案C解析限制酶HindⅢ和PstⅠ在質(zhì)粒上各有一個識別切割位點(diǎn)，用HindⅢ和PstⅠ切割質(zhì)粒，可得到2條DNA片段，A正確；AluⅠ的切割位點(diǎn)位于目的基因中，用AluⅠ酶切割外源DNA會破壞目的基因，B正確；不宜選擇SmaⅠ酶和PstⅠ酶同時切割質(zhì)粒和外源DNA，因為質(zhì)粒中的兩個標(biāo)記基因均會被破壞，且DNA會反向連接至載體上，C錯誤；構(gòu)建重組DNA時，選擇限制酶HindⅢ和PstⅠ同時切割質(zhì)粒和外源DNA，會破壞質(zhì)粒中的氯霉素抗性基因，保留四環(huán)素抗性基因，所以導(dǎo)入了重組DNA的細(xì)菌能在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長而不能在含氯霉素的培養(yǎng)基上生長，D正確。題組一目的基因的篩選與獲取1．(2023·陜西西安高二調(diào)研)基因工程操作“四步曲”的正確順序是()①目的基因的篩選與獲?、趯⒛康幕?qū)胧荏w細(xì)胞③基因表達(dá)載體的構(gòu)建④目的基因的檢測與鑒定A．①②③④ B．④①③②C．①③②④ D．③①②④答案C2．下列關(guān)于PCR技術(shù)的敘述，正確的是()A．PCR技術(shù)建立在對擴(kuò)增的目的基因序列完全已知的基礎(chǔ)上B．該技術(shù)需要解旋酶和耐高溫的DNA聚合酶C．該技術(shù)需要一對特異性的引物，要求一對引物的序列是互補(bǔ)的D．該技術(shù)應(yīng)用DNA半保留復(fù)制原理，也需要模板、原料、能量、酶等條件答案D解析PCR技術(shù)擴(kuò)增的目的基因序列不一定完全是已知的，A錯誤；該技術(shù)是通過高溫來使DNA解旋的，不需要解旋酶，B錯誤；該技術(shù)需要的一對引物，分別能與模板DNA的兩條鏈進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對，其序列不是互補(bǔ)的，C錯誤。3．用PCR擴(kuò)增下面的DNA片段：5′GACCTGTGGAAGC……CATACGGGATTG3′3′CTGGACACCTTCG……GTATGCCCTAAC5′供選擇的引物有：①5′GACCTGTGGAAGC3′②5′CATACGGGATTG3′③5′GTATGCCCTAAC3′④5′CAATCCCGTATG3′共四種，應(yīng)選擇()A．①②B．②③C．③④D．①④答案D解析用PCR擴(kuò)增DNA片段的過程中，在引物作用下，DNA聚合酶從引物3′端開始延伸DNA鏈，即DNA的合成方向是從子鏈的5′端至3′端延伸的，故引物的堿基序列應(yīng)與每條模板鏈5′端的一段核苷酸鏈的堿基序列相同，即應(yīng)以模板鏈5′端的一段脫氧核苷酸單鏈片段作為引物；由題干信息分析可知，5′端的堿基序列是5′GACCTGTGGAAGC和5′CAATCCCGTATG，故對應(yīng)的引物為①④，D正確。4．(2023·河北邢臺高二月考)用PCR技術(shù)特異性地拷貝“X基因”，經(jīng)四輪循環(huán)后產(chǎn)物中有五種不同的DNA分子。下列有關(guān)敘述錯誤的是()A．第一輪循環(huán)得到2個DNA分子，即①②各一個B．第二輪循環(huán)得到4個DNA分子，即①②③④各一個C．第三輪循環(huán)得到8個DNA分子，其中有2個是等長的，也就是有2個⑤D．第四輪循環(huán)得到16個DNA分子，其中有4個⑤答案D解析第四輪循環(huán)得到的16個DNA分子中，兩條脫氧核苷酸鏈等長的DNA片段有24－2×4＝8(個)，即有8個⑤，D錯誤。題組二基因表達(dá)載體的構(gòu)建5．基因工程的核心是構(gòu)建基因表達(dá)載體，下列不屬于載體作用的是()A．載體能防止目的基因被受體細(xì)胞限制酶“切割”B．載體能協(xié)助目的基因在受體細(xì)胞中復(fù)制C．載體含有啟動子和終止子協(xié)助目的基因表達(dá)D．載體具有標(biāo)記基因，便于篩選含目的基因的受體細(xì)胞答案A解析載體不能防止目的基因被受體細(xì)胞限制酶“切割”，A錯誤；載體在受體細(xì)胞中能夠穩(wěn)定存在，并且自我復(fù)制，使目的基因數(shù)量擴(kuò)大，B正確；啟動子是RNA聚合酶的識別和結(jié)合的位點(diǎn)，能啟動轉(zhuǎn)錄過程；終止子控制著轉(zhuǎn)錄的結(jié)束，所以載體含有的啟動子和終止子可協(xié)助目的基因的表達(dá)，C正確；載體具有標(biāo)記基因，標(biāo)記基因便于篩選含有目的基因的受體細(xì)胞，D正確。6．下列關(guān)于基因表達(dá)載體的說法，不正確的是()A．基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心步驟B．基因表達(dá)載體包含啟動子、目的基因、終止子、標(biāo)記基因等C．終止子位于目的基因的下游，能夠終止翻譯過程D．不同的目的基因所需的啟動子不一定相同答案C解析基因表達(dá)載體包括啟動子、終止子、目的基因、標(biāo)記基因等，其中啟動子位于目的基因的上游，是啟動轉(zhuǎn)錄的一段DNA片段，終止子位于目的基因的下游，能夠終止轉(zhuǎn)錄過程，B正確，C錯誤；不同的目的基因具有不同的核苷酸序列，其啟動子也不盡相同，D正確。7．(2023·銀川高二階段考)科學(xué)家利用質(zhì)粒(如圖)成功構(gòu)建了蛛絲蛋白基因的重組質(zhì)粒，并在家蠶絲腺細(xì)胞中獲得大量蛛絲蛋白。下列有關(guān)說法錯誤的是()A．為防止目的基因自身環(huán)化，可以用限制酶XbaⅠ和SacⅠ來切割目的基因B．構(gòu)建基因表達(dá)載體時選用蠶絲蛋白基因的啟動子利于基因在家蠶絲腺細(xì)胞中表達(dá)C．啟動子是DNA聚合酶的識別和結(jié)合部位，可以驅(qū)動遺傳信息的轉(zhuǎn)錄D．基因表達(dá)載體中的標(biāo)記基因可以用來鑒別與選擇含有蛛絲蛋白基因的受體細(xì)胞答案C解析啟動子是RNA聚合酶的識別和結(jié)合部位，C錯誤。8．(2023·江蘇南通高二期中)如圖表示pBR322質(zhì)粒和人生長激素基因所在片段的結(jié)構(gòu)信息，將二者構(gòu)建的重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體菌并進(jìn)行篩選。下列有關(guān)敘述正確的是()注：AmpR為氨芐青霉素抗性基因，TetR為四環(huán)素抗性基因。A．可選擇的限制酶組合是酶E和酶GB．所選用的受體菌不能含有AmpR和TetR基因C．用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基就能篩選出含重組質(zhì)粒的受體菌D．同時用三種限制酶處理圖中質(zhì)粒，電泳后可得到3個條帶答案B解析酶E會破壞兩種標(biāo)記基因，為避免切割后DNA片段的自身環(huán)化，又保留質(zhì)粒上的標(biāo)記基因，切割時應(yīng)選擇的限制酶組合是酶F和酶G，A錯誤；重組質(zhì)粒上的四環(huán)素抗性基因被破壞，而重組質(zhì)粒上的氨芐青霉素抗性基因能表達(dá)，用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基篩選出的有導(dǎo)入重組質(zhì)粒的受體菌和導(dǎo)入普通質(zhì)粒的受體菌，C錯誤；據(jù)圖可知，因酶E有兩個作用位點(diǎn)，同時用三種限制酶處理圖中質(zhì)粒，能將質(zhì)粒切割成4個DNA片段，電泳后可得到4個條帶，D錯誤。9．RT－PCR是以提取的RNA為模板，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得與之互補(bǔ)的DNA(cDNA)序列，再以cDNA序列為模板進(jìn)行目的片段的擴(kuò)增，具體過程如圖所示。下列有關(guān)RT－PCR的敘述，正確的是()A．過程1需要使用耐高溫的DNA聚合酶B．過程2中的引物B可與mRNA互補(bǔ)配對C．游離的脫氧核苷酸只能加到引物的5′端D．RT－PCR可用于對RNA病毒的檢測與鑒定答案D解析過程1是由mRNA形成單鏈DNA的過程，為逆轉(zhuǎn)錄，該過程需要逆轉(zhuǎn)錄酶，A錯誤；過程2中的引物B可與cDNA互補(bǔ)配對，而mRNA與cDNA堿基互補(bǔ)配對，則引物B和mRNA除堿基T和U的區(qū)別外，其余序列相同，不能互補(bǔ)配對，B錯誤；游離的脫氧核苷酸只能加到引物的3′端，C錯誤；利用RT－PCR技術(shù)對某些微量RNA病毒進(jìn)行檢測，并可提高檢測的靈敏度(因為增加了待測RNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA的數(shù)量，因此便于檢測)，D正確。10．研究人員用如圖1中質(zhì)粒和圖2中含目的基因的片段構(gòu)建重組質(zhì)粒(圖中標(biāo)注了相A．構(gòu)建重組質(zhì)粒的過程應(yīng)選用BclⅠ和HindⅢ兩種限制酶B．使用DNA連接酶將酶切后的質(zhì)粒和目的基因片段進(jìn)行重組C．能在添加四環(huán)素的培養(yǎng)基上生存的一定是含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌D．利用PCR鑒定含目的基因的大腸桿菌時應(yīng)選用引物甲和引物丙答案C解析選擇的限制酶應(yīng)在目的基因兩端存在識別位點(diǎn)，但BamHⅠ可能使質(zhì)粒中的兩種標(biāo)記基因都被破壞，因此只能選BclⅠ和HindⅢ兩種限制酶切割，A正確；酶切后的質(zhì)粒和目的基因片段要用DNA連接酶連接，構(gòu)建重組載體，B正確；能在添加四環(huán)素的培養(yǎng)基上生存的也可能是只含有質(zhì)粒的大腸桿菌，C錯誤；PCR技術(shù)要求兩種引物分別和目的基因的11．(2023·哈爾濱高二期末)下列有關(guān)PCR的敘述，錯誤的是()A．PCR的原理是DNA半保留復(fù)制，解旋和復(fù)制不是同時進(jìn)行的B．PCR的過程主要包括變性→延伸→復(fù)性，溫度逐漸降低C．PCR技術(shù)擴(kuò)增時，一個DNA分子經(jīng)過n輪復(fù)制共需引物2n－1對D．常采用瓊脂糖凝膠電泳來鑒定PCR的產(chǎn)物答案B解析PCR的原理是DNA半保留復(fù)制，PCR技術(shù)是在較高溫度條件下打開雙鏈后進(jìn)行擴(kuò)增的，是先解旋后復(fù)制，A正確；PCR的過程主要包括高溫變性→低溫復(fù)性→中溫延伸，可見該過程中溫度不是逐漸降低，B錯誤。12．聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)是一種用于擴(kuò)增特定DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)。下列關(guān)于PCR引物的敘述，不正確的是()A．為保證模板鏈與引物結(jié)合的效率，兩種引物之間盡量避免存在互補(bǔ)序列B．為了便于將擴(kuò)增的DNA片段與載體連接，可在引物的3′端加上限制酶識別序列C．在兩種引物上設(shè)計加入不同的限制酶識別序列，主要目的是使目的基因定向插入載體并可避免目的基因自身環(huán)化D．復(fù)性所需的溫度、時長和延伸所需的溫度、時長均與引物有關(guān)答案B解析引物自身不應(yīng)存在互補(bǔ)序列，否則會出現(xiàn)引物與自身配對、引物跟引物配對情況，降低PCR的效率，A正確；引物引導(dǎo)子鏈合成的方向是5′端→3′端，因此為了便于擴(kuò)增的DNA片段與載體連接，需要在引物的5′端加上限制酶識別序列，B錯誤；為了便于擴(kuò)增的DNA片段與載體連接，常在兩條引物上設(shè)計加入不同的限制酶識別序列，主要目的是使目的基因能定向插入表達(dá)載體，避免目的基因自身環(huán)化，C正確；復(fù)性所需的溫度、時長和延伸所需的溫度、時長均與引物有關(guān)，如引物中G與C含量高，需要設(shè)定更高的復(fù)性和延伸溫度，D正確。13．基因工程中可以通過PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因。回答下列問題：(1)生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是______________。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是____________________。上述兩個解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的_________。(2)目前在PCR反應(yīng)中不使用大腸桿菌DNA聚合酶的主要原因是_______________________。(3)含有限制酶的細(xì)胞中通常還具有相應(yīng)的甲基化酶，這兩種酶對DNA分子有相同的作用序列，但具有不同的催化功能。甲基化酶可以對DNA序列進(jìn)行修飾，使限制酶不能對這一序列進(jìn)行識別和切割。含有某種限制酶的細(xì)胞，可以利用限制酶切割外源DNA，但不破壞細(xì)胞自身的DNA，其原因可能有：①___________________________________________________________________________________；②___________________________________________________________________________________________________________________________。(4)利用PCR擴(kuò)增目的基因的過程由高溫變性(90℃以上)、低溫復(fù)性(50℃左右)、適溫延伸(72℃左右)三個步驟構(gòu)成一個循環(huán)，為使得DNA聚合酶能夠重復(fù)利用，選用的酶應(yīng)在_________________處理后仍然具備催化活性。答案(1)解旋酶加熱至90℃以上氫鍵(2)大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會失活(3)①細(xì)胞自身的DNA分子沒有該限制酶的識別序列②甲基化酶對細(xì)胞自身的DNA分子進(jìn)行了修飾(4)90℃以上高溫14．(2023·江蘇鎮(zhèn)江高二聯(lián)考)某質(zhì)粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三種限制酶切割位點(diǎn)，同時還含有四環(huán)素抗性基因和氨芐青霉素抗性基因。利用此質(zhì)粒獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的過程如圖1所示，請回答下列問題：(1)將抗鹽基因?qū)霟煵菁?xì)胞內(nèi)，使煙草植株產(chǎn)生抗鹽性狀，這種新性狀(變異性狀)的來源屬于____________________。(2)如果將抗鹽基因直接導(dǎo)入煙草細(xì)胞，一般情況下，煙草不會具有抗鹽特性，原因是抗鹽基因在煙草細(xì)胞中不能________，也不能______________________________________________。(3)在構(gòu)建重組質(zhì)粒時，應(yīng)選用__________________兩種酶對質(zhì)粒和含抗鹽基因的DNA進(jìn)行切割，以保證重組DNA序列的唯一性。(4)如圖2表示運(yùn)用影印培養(yǎng)法(使一系列培養(yǎng)皿的相同位置上能出現(xiàn)相同菌落的一種接種培養(yǎng)方法)檢測基因表達(dá)載體是否導(dǎo)入了農(nóng)桿菌。培養(yǎng)基除了含有細(xì)菌生長繁殖必需的成分外，培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B分別還含有____________、____________。從檢測篩選的結(jié)果分析，含有目的基因的是____________(填圖2中的數(shù)字)菌落中的細(xì)菌。答案(1)基因重組(2)復(fù)制表達(dá)(或合成抗鹽基因的mRNA)(3)SalⅠ和HindⅢ(4)氨芐青霉素四環(huán)素(或氨芐青霉素和四環(huán)素)4和6[學(xué)習(xí)目標(biāo)]1.闡明將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法。2.闡明目的基因的檢測與鑒定的方法。1．將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞(1)將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞①花粉管通道法a．用微量注射器將含目的基因的DNA溶液直接注入子房中。b．在植物受粉后的一定時間內(nèi)，剪去柱頭，將DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道進(jìn)入胚囊。②農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法a．轉(zhuǎn)化：目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。b．農(nóng)桿菌的特點(diǎn)：農(nóng)桿菌細(xì)胞內(nèi)含有Ti質(zhì)粒，當(dāng)它侵染植物細(xì)胞后，能將Ti質(zhì)粒上的T－DNA(可轉(zhuǎn)移的DNA)轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞內(nèi)，并且將其整合到該細(xì)胞的染色體DNA上。c．目的基因插入Ti質(zhì)粒的T－DNA中→導(dǎo)入植物細(xì)胞→整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上→表現(xiàn)出新性狀的植株。(2)將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞①方法：顯微注射技術(shù)。②受體細(xì)胞：受精卵。③過程：目的基因表達(dá)載體提純→取卵(受精卵)→顯微注射→受精卵發(fā)育→獲得具有新性狀的動物。(3)將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞常以大腸桿菌作為受體細(xì)胞，一般先用Ca2＋處理大腸桿菌細(xì)胞，使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，然后再將重組的基因表達(dá)載體導(dǎo)入其中。2．目的基因的檢測與鑒定(1)分子水平的檢測①導(dǎo)入水平：通過PCR等技術(shù)檢測受體細(xì)胞的染色體DNA上是否插入了目的基因。②轉(zhuǎn)錄水平：利用PCR等技術(shù)檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA。③翻譯水平：用相應(yīng)抗體進(jìn)行抗原—抗體雜交檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)等。(2)個體生物學(xué)水平的鑒定：抗蟲、抗病接種實(shí)驗等。3．基因工程的基本操作程序判斷正誤(1)為培育抗除草劑的作物新品種，導(dǎo)入抗除草劑基因時只能以受精卵為受體細(xì)胞()(2)Ti質(zhì)粒上的T－DNA可轉(zhuǎn)移到植物細(xì)胞內(nèi)，并且與其染色體DNA整合在一起()(3)常用卵細(xì)胞作為培育轉(zhuǎn)基因動物的受體細(xì)胞()(4)檢測目的基因是否成功表達(dá)可用抗原—抗體雜交技術(shù)()(5)用PCR技術(shù)檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA，利用了堿基互補(bǔ)配對原則()(6)基因工程是否成功需進(jìn)行個體生物學(xué)水平的鑒定()答案(1)×(2)√(3)×(4)√(5)√(6)√解析(1)為培育抗除草劑的作物新品種，受體細(xì)胞可以是受精卵，也可以是體細(xì)胞。(3)常用受精卵作為培育轉(zhuǎn)基因動物的受體細(xì)胞。任務(wù)：分析將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞和目的基因的檢測與鑒定1．在用土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的過程中，一定要將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T－DNA上的原因是什么？提示原因是農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T－DNA(可轉(zhuǎn)移的DNA)可轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞，并且將其整合到該細(xì)胞的染色體DNA上。2．基因表達(dá)載體中已經(jīng)具備標(biāo)記基因(如抗生素抗性基因)，對受體細(xì)胞進(jìn)行了篩選，為什么基因工程的第四步還要對目的基因進(jìn)行檢測和鑒定？提示在含抗生素的選擇培養(yǎng)基上能生長的是導(dǎo)入了載體的細(xì)胞，這里的載體可能是基因表達(dá)載體，也可能是未插入目的基因的空載體。因此第四步需要對目的基因是否導(dǎo)入進(jìn)行進(jìn)一步的檢測。此外，即便在選擇培養(yǎng)基上能生長的細(xì)胞中導(dǎo)入的是基因表達(dá)載體，但是仍然不知道目的基因插入的位置、方向等是否正確，能否正確表達(dá)，因此也需要在轉(zhuǎn)錄和翻譯以及個體水平上進(jìn)行檢測和鑒定。3．如果目的基因是抗蟲基因，在個體水平上怎么檢測？如果目的基因是耐鹽基因呢？提示如果目的基因是抗蟲基因，則要進(jìn)行抗蟲接種實(shí)驗。如果目的基因是耐鹽基因，則要用一定濃度的鹽水澆灌。1．農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法中兩次拼接、兩次導(dǎo)入的辨析(1)兩次拼接：第一次拼接是將目的基因拼接到Ti質(zhì)粒的T－DNA上；第二次拼接(非人工操作)指被插入目的基因的T－DNA拼接到受體細(xì)胞染色體的DNA上。(2)兩次導(dǎo)入：第一次導(dǎo)入是將含目的基因的重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌；第二次導(dǎo)入(非人工操作)是將含目的基因的T－DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞。2．受體細(xì)胞的選擇(1)對于植物來說，受體細(xì)胞可以是受精卵或體細(xì)胞，因為植物細(xì)胞具有全能性。(2)對于動物來說，受體細(xì)胞一般是受精卵，因為受精卵的全能性高，而高度分化的動物體細(xì)胞的全能性受到抑制。(3)大腸桿菌和酵母菌在基因工程中都可以作為受體細(xì)胞，但又有所不同。大腸桿菌為原核細(xì)胞，而酵母菌為真核細(xì)胞(具有多種細(xì)胞器)，所以在生產(chǎn)需要加工和分泌的蛋白質(zhì)時，酵母菌比大腸桿菌有優(yōu)勢。A．圖中Ⅰ是質(zhì)粒，步驟①需要用到限制酶和DNA連接酶B．圖中Ⅱ是含目的基因的重組質(zhì)粒，步驟②是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入棉花細(xì)胞C．圖中Ⅲ是農(nóng)桿菌，通過步驟③將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞D．剔除培育成功的抗蟲棉體內(nèi)的四環(huán)素抗性基因不會影響抗蟲基因的表達(dá)答案B解析題圖中Ⅰ為質(zhì)粒，步驟①為基因表達(dá)載體的構(gòu)建，需要用到限制酶和DNA連接酶，A正確；題圖中步驟②是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌細(xì)胞，B錯誤；基因的表達(dá)具有一定的獨(dú)立性，剔除培育成功的抗蟲棉體內(nèi)的四環(huán)素抗性基因不影響抗蟲基因的表達(dá)，D正確。2．(2023·陜西西安高二調(diào)研)科學(xué)家將蘇云金桿菌中的Bt抗蟲蛋白基因(抗蟲基因)導(dǎo)入棉花的愈傷組織細(xì)胞并進(jìn)行組織培養(yǎng)獲得棉花植株。經(jīng)棉鈴蟲飼喂實(shí)驗，發(fā)現(xiàn)棉花植株并無抗蟲性狀，科學(xué)家提取棉花葉片細(xì)胞中的有關(guān)成分進(jìn)行了如下操作。下列有關(guān)分析錯誤的是()A．提取細(xì)胞中的蛋白質(zhì)，采用抗原—抗體雜交技術(shù)進(jìn)行檢測，若檢測到細(xì)胞中無Bt抗蟲蛋白，則說明抗蟲基因不能表達(dá)B．若經(jīng)A檢測確定細(xì)胞中無Bt抗蟲蛋白，可采用PCR等技術(shù)檢測細(xì)胞中的RNA，若測到Bt抗蟲蛋白的mRNA，則說明抗蟲基因能正常轉(zhuǎn)錄和翻譯C．若經(jīng)B檢測確定細(xì)胞中無Bt抗蟲蛋白的mRNA，可采用PCR等技術(shù)檢測細(xì)胞中的DNA，若能檢測到抗蟲基因，則可能是抗蟲基因反向插入載體中或抗蟲基因不能正常轉(zhuǎn)錄D．若經(jīng)C檢測確定細(xì)胞中無抗蟲基因，則可能是將沒有目的基因的載體DNA分子導(dǎo)入了受體細(xì)胞答案B解析若經(jīng)A檢測確定細(xì)胞中無Bt抗蟲蛋白，可采用PCR等技術(shù)檢測細(xì)胞中的RNA，若能檢測到Bt抗蟲蛋白的mRNA，則可能是抗蟲基因能轉(zhuǎn)錄，但不能正常翻譯出蛋白質(zhì)，B錯誤。題組一將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞1．我國科學(xué)家獨(dú)創(chuàng)的花粉管通道法，可以使目的基因借助花粉管通道進(jìn)入受體細(xì)胞，是一種十分簡便經(jīng)濟(jì)的方法，對此認(rèn)識正確的是()A．不必構(gòu)建表達(dá)載體就可以直接導(dǎo)入B．此方法可用于轉(zhuǎn)基因動物C．受體細(xì)胞只能是植物的卵細(xì)胞D．有時可以取代農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法答案D解析要讓目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞后能穩(wěn)定存在并得到復(fù)制和表達(dá)，不管采用什么導(dǎo)入方法，都需要構(gòu)建表達(dá)載體才能實(shí)現(xiàn)，A錯誤；花粉管通道法只適用于轉(zhuǎn)基因植物的培育，B錯誤；采用花粉管通道法時，植物受體細(xì)胞一般是植物體細(xì)胞或受精卵，通常不選卵細(xì)胞，C錯誤。2．(2023·福建南平高二檢測)下列關(guān)于將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的敘述，錯誤的是()A．用一定濃度的CaCl2溶液處理大腸桿菌，以改變大腸桿菌細(xì)胞的生理狀態(tài)B．將目的基因轉(zhuǎn)入微生物細(xì)胞常用顯微注射法C．對于動物來說，受體細(xì)胞一般是受精卵D．通過基因工程大量獲得胰島素時，受體細(xì)胞選擇酵母菌比大腸桿菌更有優(yōu)勢答案B解析將目的基因轉(zhuǎn)入動物細(xì)胞常用顯微注射法，將目的基因轉(zhuǎn)入微生物細(xì)胞常用Ca2＋處理法，B錯誤。題組二目的基因的檢測與鑒定3．(2023·吉林白城高二期末)利用外源基因在受體細(xì)胞中表達(dá)，可生產(chǎn)人類所需要的產(chǎn)品。下列各項中能說明目的基因在受體細(xì)胞中完成了表達(dá)的是()A．從酵母菌細(xì)胞中提取到人干擾素蛋白B．山羊乳腺細(xì)胞中檢測到人生長激素DNA序列C．大腸桿菌中檢測到人胰島素基因及其mRNAD．棉花二倍體細(xì)胞中檢測到細(xì)菌的抗蟲基因答案A解析基因表達(dá)的產(chǎn)物是蛋白質(zhì)，因此，只有在受體細(xì)胞中檢測或提取到了相應(yīng)蛋白質(zhì)才能證明目的基因在受體細(xì)胞中完成了表達(dá)，B、D項只能說明完成了目的基因的導(dǎo)入，C項只能說明完成了目的基因的導(dǎo)入和目的基因的轉(zhuǎn)錄過程。4．目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，需要檢測目的基因是否可以維持穩(wěn)定和表達(dá)其遺傳特性。下列關(guān)于目的基因的檢測和鑒定的敘述，正確的是()A．目的基因能否在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是能否轉(zhuǎn)錄出mRNAB．可采用PCR檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄和翻譯C．可從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)來檢測目的基因是否翻譯成相應(yīng)蛋白質(zhì)D．抗蟲、抗病檢驗用于確定轉(zhuǎn)基因生物是否具備相關(guān)性狀屬于分子水平的檢測答案C解析目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，首先要檢測轉(zhuǎn)基因生物(染色體)DNA上是否插入了目的基因，這是目的基因能否在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵，A錯誤；PCR可用于檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄，檢測目的基因是否翻譯用抗原—抗體雜交技術(shù)，B錯誤；抗蟲、抗病檢驗用于確定轉(zhuǎn)基因生物是否具備相關(guān)性狀屬于個體生物學(xué)水平的鑒定，D錯誤。題組三基因工程基本操作程序5．下列敘述不正確的是()A．啟動子是RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點(diǎn)B．在基因工程的基本步驟中，不進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對的是將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞C．細(xì)菌常常用作基因工程的受體細(xì)胞，主要原因是繁殖速度快D．某醫(yī)學(xué)遺傳研究所成功培育出第一頭攜帶人白蛋白基因的轉(zhuǎn)基因牛，可以想象這頭牛發(fā)生了基因突變答案D解析某醫(yī)學(xué)遺傳研究所成功培育出第一頭攜帶人白蛋白基因的轉(zhuǎn)基因牛，這頭牛發(fā)生了基因重組，D錯誤。6．科學(xué)家將人的生長激素基因與某種細(xì)菌(不含抗生素抗性基因)的DNA分子進(jìn)行重組，并成功地在該細(xì)菌中得以表達(dá)(如圖)。下列相關(guān)敘述錯誤的是()A．過程①合成人生長激素基因的過程需要用到逆轉(zhuǎn)錄酶B．過程③是將重組質(zhì)粒溶于緩沖液后與經(jīng)Ca2＋處理的細(xì)菌B混合C．成功導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的細(xì)菌B在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上不能生長D．可采用抗原—抗體雜交技術(shù)檢測工程菌中生長激素基因是否成功表達(dá)答案C解析成功導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的細(xì)菌B，因目的基因插入質(zhì)粒后，破壞了四環(huán)素抗性基因，所以在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上不能生長，C錯誤。7．科學(xué)家通過改變一種名為NR2B的基因研制出了轉(zhuǎn)基因超級小鼠Hobbie－J，Hobbie－J比普通老鼠更加聰明，大腦運(yùn)轉(zhuǎn)更加迅速，它能夠輕松完成迷宮任務(wù)。下列關(guān)于Hobbie－J產(chǎn)生過程的描述，錯誤的是()A．NR2B基因可通過PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增B．改變后的NR2B基因作為目的基因，可直接注入小鼠受精卵內(nèi)C．通常采用顯微注射技術(shù)將改變后的NR2B基因重組質(zhì)粒導(dǎo)入小鼠受精卵內(nèi)D．可采用PCR等技術(shù)檢測改變后的NR2B基因是否插入到小鼠染色體DNA答案B解析8．下列敘述正確的是()A．欲培育出在肝細(xì)胞特異性表達(dá)目的基因的轉(zhuǎn)基因小鼠，需將基因表達(dá)載體導(dǎo)入小鼠肝細(xì)胞B．PCR擴(kuò)增目的基因需設(shè)計特異性的引物C．構(gòu)建表達(dá)載體需要限制酶和RNA聚合酶D．通過PCR檢測目的基因是否完成表達(dá)答案B解析將基因表達(dá)載體導(dǎo)入小鼠受精卵以獲得轉(zhuǎn)基因小鼠，A錯誤；構(gòu)建表達(dá)載體需要限制酶和DNA連接酶，C錯誤；檢測目的基因是否完成表達(dá)常用抗原—抗體雜交技術(shù)，D錯誤。9．(2023·江蘇淮安高二質(zhì)檢)α1-抗胰蛋白酶缺乏癥是北美常見的一種單基因遺傳病，患者成年后會出現(xiàn)肺氣腫及其他疾病，嚴(yán)重者甚至死亡。利用基因工程技術(shù)將控制該酶合成的基因?qū)胙虻氖芫?，最終培育出能在乳腺細(xì)胞表達(dá)人α1-抗胰蛋白酶的轉(zhuǎn)基因羊，從而更容易獲得這種酶。下列關(guān)于該過程的敘述中，錯誤的是()A．載體上綠色熒光蛋白基因(GFP基因)的作用是便于篩選含有目的基因的受體細(xì)胞B．將目的基因?qū)胙蚴芫阎?，可以使用顯微注射法C．培養(yǎng)出的轉(zhuǎn)基因羊的所有細(xì)胞中都含有該目的基因，故該羊有性生殖產(chǎn)生的后代也都能產(chǎn)生α1-抗胰蛋白酶D．轉(zhuǎn)基因母羊乳腺細(xì)胞中α1-抗胰蛋白酶基因才會得以表達(dá)，因此可以從乳汁中提取α1-抗胰蛋白酶答案C解析轉(zhuǎn)基因羊有性生殖產(chǎn)生的后代發(fā)生性狀分離，產(chǎn)生的后代可能沒有目的基因，也就不能產(chǎn)生α1-抗胰蛋白酶，C錯誤。10．研究人員用三種基因探針，通過分子雜交技術(shù)分別對某動物三種細(xì)胞中的mRNA進(jìn)行檢測，結(jié)果(有無雜交帶)如表所示。下列說法正確的是()探針細(xì)胞輸卵管細(xì)胞未成熟紅細(xì)胞胰島B細(xì)胞卵清蛋白基因探針有無無β-珠蛋白基因探針無有無胰島素基因探針無無有A.不出現(xiàn)雜交帶表明相應(yīng)基因不表達(dá)B．三種探針中的核苷酸序列相同C．三種細(xì)胞中蛋白質(zhì)種類完全不同D．用上述探針分別檢測三種細(xì)胞的DNA，實(shí)驗結(jié)果不變答案A解析不出現(xiàn)雜交帶可說明相應(yīng)的基因沒有轉(zhuǎn)錄形成mRNA，即沒有表達(dá)，A正確；三種基因不同，因此三種探針的核苷酸序列也不相同，B錯誤；由于基因的選擇性表達(dá)，三種細(xì)胞中蛋白質(zhì)種類不完全相同，C錯誤；三種細(xì)胞來源于同一個受精卵的有絲分裂，含有的DNA相同，用題述探針分別檢測三種細(xì)胞的DNA，實(shí)驗結(jié)果相同，D錯誤。11．(2023·山東煙臺高二期中)如圖是利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育新品種植物的部分操作程序，下列相關(guān)敘述錯誤的是()A．過程①需使用不同的限制酶切割B．過程②需用T4DNA連接酶連接C．過程③需采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法介導(dǎo)D．過程④需采用選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行篩選答案C解析過程②是目的基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，由題圖可知，該過程既要連接黏性末端又要連接平末端，因此該過程中需用T4DNA連接酶連接，B正確；過程③是將重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌的過程，該過程可以用鈣離子處理使農(nóng)桿菌處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，C錯誤。12．番茄葉片受害蟲的損傷后，葉肉細(xì)胞迅速合成蛋白酶抑制劑，抑制害蟲的消化作用。人們嘗試將番茄的蛋白酶抑制劑基因?qū)胗衩祝詫Ω恫钡挠衩酌?。如圖為培育轉(zhuǎn)基因抗蟲玉米的流程圖，下列有關(guān)敘述正確的是()A．用限制性內(nèi)切核酸酶切割番茄的DNA得到的產(chǎn)物就是蛋白酶抑制劑基因B．用Ca2＋處理玉米受體細(xì)胞，有利于含目的基因的重組質(zhì)粒導(dǎo)入C．重組Ti質(zhì)粒應(yīng)有RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，以啟動蛋白酶抑制劑基因的轉(zhuǎn)錄D．若將目的基因?qū)胗衩谆ǚ奂?xì)胞，通過花藥離體培養(yǎng)可獲得穩(wěn)定遺傳的轉(zhuǎn)基因玉米答案