眼科遺傳病基因檢測(cè)簡(jiǎn)介

眼科遺傳病基因檢測(cè)1主要內(nèi)容檢測(cè)介紹病例分享背景介紹2世界和中國(guó)的視力殘疾情況據(jù)WHO2010報(bào)告估算：全世界有盲人0.39億，視力低下患者2.64億，視力障礙病人2.85億；其中，我國(guó)有825萬(wàn)盲人，占全世界盲人數(shù)的20.9%;據(jù)2006年我國(guó)殘疾人調(diào)查顯示：我國(guó)視力殘疾人數(shù)為1223萬(wàn)人，占?xì)埣踩丝诘?4.86%；

6-14歲學(xué)齡殘疾兒童中，視力殘疾兒童為13萬(wàn)人，占?xì)埣矁和?.28%。3全球各地失明、視力低下和視力障礙發(fā)病率數(shù)據(jù)來(lái)源：WHO--GLOBALDATAONVISUALIMPAIRMENTS20102006年殘疾人口分布數(shù)據(jù)來(lái)源：2006年4月1日我國(guó)殘疾人調(diào)查結(jié)果眼病的致盲原因4數(shù)據(jù)來(lái)源：WHO--GLOBALDATAONVISUALIMPAIRMENTS2010白內(nèi)障、青光眼、黃斑變性、角膜病、兒童眼病等是致盲主要原因，基因遺傳是重要因素。眼科遺傳病5遺傳性眼病單基因遺傳性眼病常染色體顯性遺傳常染色體隱性遺傳性連鎖遺傳多基因遺傳性眼病染色體遺傳性眼病體細(xì)胞遺傳性眼病線粒體遺傳性眼病已發(fā)現(xiàn)約600多種遺傳性眼病，其中相當(dāng)部分為單基因遺傳?。?00多種），占遺傳性眼病的1/3。

我國(guó)單基因眼病總體發(fā)病率4%。遺傳性眼病分類單基因眼科疾病的特點(diǎn)

高度異質(zhì)性；–臨床異質(zhì)性（已知就達(dá)200多種）–遺傳異質(zhì)性(如RP已知致病基因達(dá)50多個(gè))遺傳方式多樣性；–AD、AR、X-link–線粒體遺傳診斷難、治療更難6眼結(jié)構(gòu)及視沖動(dòng)傳導(dǎo)途徑7角膜虹膜黃斑眼睛各部位的缺損都有可能致盲RP、LCA、色盲、夜盲角膜營(yíng)養(yǎng)不良先天無(wú)虹膜黃斑病變視神經(jīng)萎縮視錐視桿細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)不良基因檢測(cè)全方位解決方案1.單一眼科疾病基因檢測(cè)、2.一類眼科疾病基因檢測(cè)---遺傳眼科疾病Panel檢測(cè)3.線粒體遺傳眼病---線粒體遺傳眼科基因檢測(cè)4.復(fù)雜疾病、多器官系統(tǒng)---全外顯子組基因檢測(cè)全方位解決方案8單基因眼科遺傳病檢測(cè)內(nèi)容9包括三大類產(chǎn)品，涵蓋35種眼科疾病，涉及215個(gè)基因，外顯子覆蓋度95%以上。常見(jiàn)非綜合癥型眼科遺傳病基因檢測(cè)常見(jiàn)綜合癥型眼科遺傳病基因檢測(cè)眼科遺傳病基因篩查視網(wǎng)膜病:如RP、先天黑蒙、先天性靜止性夜盲、色盲、黃斑變性等視神經(jīng)病：視神經(jīng)萎縮玻璃體?。翰Ａw視網(wǎng)膜病變、視網(wǎng)膜劈裂癥角膜病：角膜營(yíng)養(yǎng)不良葡萄膜?。合忍鞜o(wú)虹膜眼球?。貉矍蛘痤潯⑿⊙刍蔚?大綜合癥：如巴-比綜合征、Senior-Loken綜合征、尤塞氏綜合征、Joubert綜合征等疾病易感基因篩查:年齡相關(guān)性黃斑變性基因檢測(cè)（目標(biāo)區(qū)域測(cè)序）

年齡相關(guān)性黃斑病變風(fēng)險(xiǎn)基因篩查（飛行時(shí)間質(zhì)譜）檢測(cè)內(nèi)容檢測(cè)人群及意義10輔助診斷指導(dǎo)治療風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估遺傳咨詢確定致病突變，精確診斷對(duì)患者指導(dǎo)基因或干細(xì)胞治療，指導(dǎo)護(hù)理，降低復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)；對(duì)無(wú)臨床癥狀表現(xiàn)者，了解基因攜帶情況，及早干預(yù)為患者家庭提供指導(dǎo)，指導(dǎo)優(yōu)生優(yōu)育評(píng)估患病的風(fēng)險(xiǎn)，采取必要措施降低發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)；適用人群:有臨床表型的疑似患者有眼病家族史的人群生育過(guò)眼病患兒的夫婦眼科遺傳病高發(fā)地區(qū)及近親婚配人群普通人群(如年齡相關(guān)性黃斑變性基因篩查針對(duì)40歲以上人群)11視網(wǎng)膜色素變性眼底掃描發(fā)病率：1/3500，全球至少有150萬(wàn)人患有此病。特點(diǎn)：視錐細(xì)胞、視桿細(xì)胞退化，并同時(shí)出現(xiàn)不正常的色素凝塊。因中央和周圍的視覺(jué)退化，只能看見(jiàn)前方如管狀范圍的“管狀視野”。檢測(cè)基因：RP1，RP2，RPGR，RHO，PRPH2，ROM1，RP9等57個(gè)基因。正常視力所見(jiàn)患者所見(jiàn)正常視力所見(jiàn)患者所見(jiàn)視網(wǎng)膜色素變性先天性黑蒙（LCA）12發(fā)病率：1/80000，占遺傳性視網(wǎng)膜病變5%以上，是導(dǎo)致嬰幼兒先天性盲的主要疾?。ㄕ?0%-20%）。特點(diǎn)：發(fā)生最早、最嚴(yán)重的遺傳性視網(wǎng)膜病變。遺傳機(jī)制：多呈常染色體隱性遺傳，研究發(fā)現(xiàn)數(shù)種相關(guān)的致病基因。預(yù)防及治療：檢查血液中氨基己糖苷酶A活性。少數(shù)臨床案例通過(guò)基因治療取得成效。檢測(cè)基因：包括RPE65，GUCY2D，CRX,，RPGRIP1，CRB1，AIPL1等19個(gè)相關(guān)基因年齡相關(guān)性黃斑變性發(fā)病率：一般從40歲開(kāi)始發(fā)病，隨著年齡的增長(zhǎng)發(fā)病率增加。據(jù)統(tǒng)計(jì)，60至74歲的老年人患病率在10%左右，而75至85歲的老年人患病率上升至30%。該病在美國(guó)已成為50歲以上人群致盲的首要因素。在我國(guó)，其致盲率僅次于白內(nèi)障。該疾病的發(fā)生具有較明顯的家族遺傳性，其中50%的患病者家族中都曾出現(xiàn)過(guò)該病患者。發(fā)病機(jī)理：可由遺傳性病變、老年性改變、炎癥性病變所引起，也可受其他眼底病變的累及。預(yù)防：停止吸煙、適當(dāng)補(bǔ)充葉黃素可以預(yù)防黃斑變性的發(fā)生，或控制病情惡化。檢測(cè)基因：

年齡相關(guān)性黃斑變性基因檢測(cè)：ABCA1，ABCA4，ACE，ADIPOR1等57個(gè)基因；

年齡相關(guān)性黃斑變性風(fēng)險(xiǎn)基因篩查：選取三個(gè)基因位點(diǎn)，利用飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)檢測(cè)；13為什么健康人群有必要參加黃斑變性風(fēng)險(xiǎn)基因篩查？年齡相關(guān)性黃斑變性早期不易被察覺(jué)；發(fā)病率高，盡早篩查，可以有效預(yù)防；致盲具有不可逆轉(zhuǎn)性。如果受檢者感覺(jué)視力受影響后再檢查，往往到了中晚期，錯(cuò)過(guò)了預(yù)防和治療的最佳時(shí)期。14基因檢測(cè)的策略及流程15醫(yī)生進(jìn)行報(bào)告解讀和遺傳咨詢及后期臨床處理在找到患者的致病突變或了解了患者親屬的突變攜帶情況后，患者及其親屬懷孕后，可到婦產(chǎn)科采集絨毛或羊水進(jìn)行胎兒突變位點(diǎn)的驗(yàn)證，檢測(cè)胎兒是否遺傳到致病突變患者結(jié)果驗(yàn)證醫(yī)生根據(jù)報(bào)告結(jié)果和臨床需求建議家系成員進(jìn)行突變位點(diǎn)驗(yàn)證對(duì)患者進(jìn)行相關(guān)疾病目前已知致病基因檢測(cè)對(duì)患者進(jìn)行已知遺傳方式的相關(guān)疾病及基因檢測(cè)篩查出已知致病突變遺傳方式不明已知家族遺傳方式確診患者家族有患者的表型正常人群已生育過(guò)患者患兒的父母高通量測(cè)序技術(shù)方法161.目標(biāo)序列捕獲+新一代高通量測(cè)序技術(shù)（主要）液相捕獲

技術(shù)流程：1基因組DNA打斷；2文庫(kù)制備；3液相雜交；4磁珠捕獲；5洗滌；6洗脫目的片段PCR擴(kuò)增；7QC檢測(cè)富集度；8測(cè)序分析。2.飛行時(shí)間質(zhì)譜（只針對(duì)“年齡相關(guān)性黃斑變性風(fēng)險(xiǎn)基因篩查”項(xiàng)目）ddATPddCTPddGTPddTTP單堿基延伸技術(shù)（iPLEX?）服務(wù)流程及樣品要求17華大流程受檢者醫(yī)院眼科檢查醫(yī)生推薦進(jìn)行基因檢測(cè)醫(yī)生指導(dǎo)知情同意收費(fèi)樣本采集、運(yùn)輸臨檢中心收樣檢測(cè)出具報(bào)告并發(fā)放醫(yī)生負(fù)責(zé)報(bào)告解讀樣本類型體積/總量運(yùn)輸/保存新鮮全血5mL嬰幼兒3mL保存于EDTA抗凝采血管中，充分顛倒混勻，避免凝固，冰袋/干冰運(yùn)輸。室溫放置不超過(guò)3天。凍存全血5mL保存于EDTA抗凝采血管中，-20℃保存不超過(guò)2年，反復(fù)凍融不超過(guò)5次。DNA≥6ug溶液：-20℃保存不超過(guò)2年，盡量避免反復(fù)凍融。干粉：-20℃保存，較溶液穩(wěn)定，建議采用此形式。干血片3個(gè)血斑常溫運(yùn)輸(干血片僅針對(duì)年齡相關(guān)性黃斑變性風(fēng)險(xiǎn)基因篩查)服務(wù)流程樣本要求Gavin的故事

——全外顯子組尋找致病突變篩查L(zhǎng)CA17個(gè)已知相關(guān)基因，未見(jiàn)致病突變18LCA:先天性利伯氏黑蒙全外顯子組基因檢測(cè)2460未經(jīng)報(bào)道的變異10個(gè)無(wú)義突變改變了蛋白質(zhì)的表達(dá)5個(gè)突變表達(dá)在視網(wǎng)膜上NMNAT1,LCA9,1p36.22769G>Ap.Glu257Lys/507G>Ap.Trp169*+/+c.769G>A,p.Glu257Lysc.507G>A,p.Trp169*用Sanger法驗(yàn)證TheNMNAT1mutationinother10casesfrom9unrelatedfamilies錯(cuò)義突變無(wú)義突變ChiangPWetal.,2012驗(yàn)證9個(gè)家庭的10個(gè)病例均發(fā)現(xiàn)了NMNAT1突變19檢測(cè)機(jī)構(gòu)檢測(cè)內(nèi)容周期價(jià)格檢測(cè)方法Baylor20+種病（亞型）AlleleSpecificTesting,NGS,

microarrayAPEX(arrayedprimerextension)Emory9種病8wksgenedx35種病（亞型）6-10wkscarverlab29種病4-14wks$121-1377NIH(EyeInstitute)eyeGENE?34種病ShileyEyeCenter18種病12-16wks$850-2500俄國(guó)Oftalmic55種病4-10wks8000-95000RURSanger,NGSsequencing,MLPA德國(guó)CeGaT11panels-126genesSureSelectEnrichmentandSOLiDTMSystem華康基因眼科PAN