《微生物基礎(chǔ)》課件-革蘭氏染色

革蘭氏染色微生物基礎(chǔ)細菌個體微小、結(jié)構(gòu)簡單，通常呈透明狀態(tài)未經(jīng)染色的細菌在光學(xué)顯微鏡下難以觀察和區(qū)分陽性菌陰性菌陽性菌細胞壁具有較厚(30～40nm)而致密的肽聚糖層，多達20層，占細胞壁成分的60%～90%，它同細胞膜的外層緊密相連。有的革蘭氏陽性細菌細胞壁中含有磷壁酸外膜上含有許多獨特的結(jié)構(gòu)，如把外膜與肽聚糖層連接起來的脂蛋白，使營養(yǎng)物被動運輸通過膜的膜蛋白，起保護細胞作用的脂多糖(LPS)脂多糖也稱為內(nèi)毒素對哺乳動物有高度毒性結(jié)晶紫初染酒精脫色酒精脫色番紅復(fù)染滲透學(xué)說0101等電點學(xué)說0202化學(xué)學(xué)說0303滲透學(xué)說革蘭氏陽性菌細胞壁厚(約20～80nm)，結(jié)構(gòu)較簡單，主要含肽聚糖和磷壁酸革蘭氏陰性菌細胞壁薄(約10nm)，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，分外壁層和內(nèi)壁層外壁層又分三層:最外層是脂多糖，中間是磷脂層，內(nèi)層是脂蛋白內(nèi)壁含肽聚糖(含量低，結(jié)構(gòu)松散)，不含磷壁酸。肽聚糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)G+G-均含有肽聚糖肽聚糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)G+的肽聚糖結(jié)構(gòu)N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸經(jīng)β-1.4糖苷鍵連接形成的多糖支架肽聚糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)N-乙酰胞壁酸分子連接四肽側(cè)鏈，肽鏈之間再由五肽橋或肽鏈聯(lián)系起來，組成一個機械性很強的三維空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，層次多達50層。肽聚糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)G-的肽聚糖結(jié)構(gòu)N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸經(jīng)β-1.4糖苷鍵連接形成的多糖支架。肽聚糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)N-乙酰胞壁酸分子連接四肽側(cè)鏈，但沒有五肽橋，因此是二維平面結(jié)構(gòu)，層次少，僅兩層。結(jié)晶紫初染碘液媒染碘與結(jié)晶紫的復(fù)合物結(jié)晶紫初染和碘液媒染后陽性菌由于細胞壁較厚、脂類含量低，肽聚糖網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)交聯(lián)致密。因而在乙醇脫色時，細胞因失水使網(wǎng)孔收縮，結(jié)晶紫與碘復(fù)合物滯留在壁內(nèi)，細胞呈紫色。結(jié)晶紫初染和碘液媒染后陰性菌細胞壁薄且類脂含量高、肽聚糖含量低且交聯(lián)松散。在乙醇脫色時，含脂層迅速溶解，結(jié)晶紫與碘復(fù)合物很容易從薄而松散的結(jié)構(gòu)中洗脫，再經(jīng)紅色染料復(fù)染后，陰性菌就呈紅色。等電點學(xué)說關(guān)注不同細菌的等電點差異細菌的等電點在pH為2～5，在中性環(huán)境中，菌體帶負電，很容易與堿性染料結(jié)合(如結(jié)晶紫、甲基紫)并且陽性菌的等電點(2～3)通常比陰性菌(4～5)低弱氧化劑可以降低陽性菌的等電點，使兩者等電點差異擴大初染的結(jié)晶紫陽性菌結(jié)合力比陰性菌強不易被乙醇洗脫化學(xué)學(xué)說核糖核酸鎂鹽-蛋白復(fù)合物核糖核酸鎂鹽-