《微生物基礎(chǔ)》課件-菌種保藏

菌種保藏微生物基礎(chǔ)菌種保藏原理微生物具有容易變異的特性，在菌種保藏過(guò)程中，必須使微生物的代謝處于最不活躍或相對(duì)靜止的狀態(tài)，才能在一定的時(shí)間內(nèi)使其不發(fā)生變異而又保持生活能力。低溫干燥缺氧缺乏營(yíng)養(yǎng)怎樣使微生物生長(zhǎng)在代謝不活潑，生長(zhǎng)受抑制的環(huán)境中呢？一、懸液保存法使微生物混懸于適當(dāng)溶液中進(jìn)行保存的方法①蒸餾水保存法適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于無(wú)菌蒸餾水中，容器封好口，于10℃保藏即可保存數(shù)年。本法應(yīng)注意避免水分的蒸發(fā)。②糖液保存法適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長(zhǎng)達(dá)10年除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進(jìn)行保存。二、斜面保藏法此法是微生物菌種的短期保藏法，適合大多數(shù)微生物細(xì)菌放線菌酵母菌霉菌放線菌霉菌有芽孢的細(xì)菌保存6個(gè)月左右無(wú)芽孢的細(xì)菌酵母菌保存1個(gè)月左右保存3個(gè)月左右斜面保藏法優(yōu)點(diǎn)簡(jiǎn)單便捷不需要特殊設(shè)備缺點(diǎn)保藏期相對(duì)較短，菌株的遺傳性狀容易發(fā)生變異；雜菌的污染機(jī)會(huì)較多。三、液體石蠟中封存法隔絕空氣防止水分揮發(fā)保藏期比斜面保藏法的效果好四、冷凍干燥保藏法冷凍干燥機(jī)干燥無(wú)氧低溫菌種保藏期長(zhǎng)(一般為5~15年)、保藏效果好，攜帶方便，適用而廣。操作比較復(fù)雜技術(shù)要求高設(shè)備比較昂貴五、液氮保藏法液氮液氮的溫度為-196℃,在此溫度下可認(rèn)為微生物細(xì)胞的代謝速率接近為零，因此保藏期很長(zhǎng)。一般可超過(guò)10年。保護(hù)劑：濃度為10%~30%將菌種與保護(hù)劑一起制備成濃度大于10°個(gè)/mL的菌懸液或孢子懸液。分裝于凍存管中，置于冰水浴中降溫到0℃左右。使用程序降溫儀以1~2℃/min的速度降溫至-35℃左右，迅速把凍存管置于液氮中保藏。優(yōu)點(diǎn)保藏期很長(zhǎng)有效防止細(xì)胞變異是目前公認(rèn)的最有效的菌種長(zhǎng)期保藏技術(shù)之一缺點(diǎn)購(gòu)置液氮設(shè)備耗能高、耗資高六、載體保藏法使微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體(土壤、砂土、濾紙等)上進(jìn)行干燥保存的方法。①土壤保存法主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌種的保藏。①土壤保存法①土壤保存法肥沃的耕土為宜土壤需風(fēng)干、粉碎、過(guò)篩和滅菌③硅膠保存法以6～16目的無(wú)色硅膠代替砂子，干熱滅菌后，加入菌液。加菌液時(shí)，由于硅膠的吸附熱常使溫度升高，因而需設(shè)法加以冷卻。④磁珠保存法瓷珠菌種保存管放置于-20℃或-80℃下便可創(chuàng)造干燥、低溫、缺營(yíng)養(yǎng)的環(huán)境，使菌株處于“休眠”狀態(tài)，可長(zhǎng)期保存，視不同菌種與保存溫度，一般可保存3-10年。⑥紙片（濾紙）保存法常壓或減壓干燥后置于裝有干燥劑的容器內(nèi)進(jìn)行保存七、寄主保藏法只能寄生在活的動(dòng)物、植物或細(xì)菌中才能繁殖傳代病毒立克次體螺旋體少數(shù)絲狀真菌植物病毒噬菌體動(dòng)物病毒用植物幼葉的汁液與病毒混合