TCI 270-2024 甘蔗赤腐病抗病性鑒定技術(shù)規(guī)程

CCSB15Technicalregulationsforresistanceidentificationofsug2024-1-18發(fā)布中國國際科技促進會發(fā)布T/CI270—2024本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利的責任。本文件由云南省農(nóng)業(yè)科學院甘蔗研究所提出。本文件由中國國際科技促進會歸口。本文件起草單位：云南省農(nóng)業(yè)科學院甘蔗研究所、云南省農(nóng)業(yè)科學院生物技術(shù)與種質(zhì)資源研究所、廣西博慶食品有限公司、普洱市經(jīng)濟作物工作站、云南紫辰農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司、新平縣經(jīng)濟作物工作站、保山市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心、廣西博東食品有限公司。本文件主要起草人：黃應(yīng)昆、王曉燕、盧文潔、梁宏衛(wèi)、李婕、盧海發(fā)、伍曉華、徐宏、普金安、白志剛、韋炳春、韋海勇、普家榮、石浩丁、楊兆貴、王振宇、單紅麗、張榮躍、李銀煳。1T/CI270—2024甘蔗赤腐病抗病性鑒定技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了甘蔗赤腐病抗病性鑒定的術(shù)語和定義、病害癥狀及流行特點、材料準備與種植、接種體準備、接種液制備、接種方法、病情調(diào)查、抗病性評價。本文件適用于甘蔗屬及其近緣屬中的種質(zhì)資源、甘蔗屬種間雜交種對甘蔗赤腐病抗病性的人工接種鑒定與評價。2規(guī)范性引用文件本文件沒有規(guī)范性引用文件。3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1甘蔗赤腐病sugarcaneredrotdisease由鐮孢炭疽菌Colletotrichumfalcatum侵染甘蔗葉片中脈、蔗莖、蔗頭引起葉片中脈、蔗莖、蔗頭腐爛壞死的一種流行性真菌病害。3.2對照品種controlvariety已知抗病性的標準品種，把待鑒定品種的抗病性表現(xiàn)與其相比較。3.3接種體inoculum通過人工制備能夠侵染寄主引起相應(yīng)病害的病原物。3.4抗病性diseaseresistance植物體所具有的能夠減輕或克服病原物致病作用的可遺傳形狀。4病害癥狀及流行特點甘蔗赤腐病的癥狀及流行特點參見附錄A。5材料與種植2T/CI270—20245.1材料選擇選擇無病的健壯甘蔗植株。5.2對照品種鑒定材料中應(yīng)加入粵糖93159和新臺糖1號作為感病對照品種，粵糖86368和柳城05136作為抗病對照品種。5.3材料處理將待鑒定甘蔗植株分別切成雙芽段，共80個芽，用70%噻蟲嗪水分散劑和50%多菌靈可濕性粉劑1：800液浸種5min～10min。5.4材料種植種植時間為2月～3月，采用完全隨機區(qū)組設(shè)計，每份材料各種植4行，4次重復(fù)，行距1m、行長5m，每行20個芽，共80個芽，常規(guī)栽培管理。6接種體準備6.1培養(yǎng)基準備馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基：馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂粉20g。將馬鈴薯去皮、切成小塊，加1000mL去離子水煮沸30min，80目～100目雙層紗布過濾。濾液中加入葡萄糖和瓊脂，用去離子水定容至1000mL，混勻加熱融化。濾液分裝至三角瓶并用耐高溫封口膜封口，121℃高壓滅菌20min，在超凈臺中倒入無菌培養(yǎng)皿，冷卻后備用。6.2病樣處理在超凈臺中將帶有赤腐病癥狀葉片于病健相間部位切下長寬5mm葉組織，用75%酒精浸泡20s消毒，再將其浸泡于0.2%次氯酸鈉中，搖動使其充分接觸消毒液1min，用無菌水沖洗3遍，放置于無菌濾紙上吸干表面水分。6.3病原培養(yǎng)將6.2處理的葉組織平放在加有50mg/mL氯霉素PDA培養(yǎng)基表面，將培養(yǎng)皿倒置，放于29℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2d～3d。菌落長出后，用接種針挑取菌落邊緣菌絲接種于PDA培養(yǎng)基于28℃恒溫培養(yǎng)10d～14d。經(jīng)2～3次轉(zhuǎn)接后菌株得以純化可作接種體，放4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?接種液制備取6.3培養(yǎng)的接種體加入滅菌雙蒸水稀釋混勻，用80目～100目雙層紗布過濾，濾液即為孢子懸浮液。攪拌均勻后用血球計數(shù)板計數(shù)法加滅菌雙蒸水配制成8×105～10×105個孢子/mL的懸浮液用于接種，現(xiàn)配現(xiàn)用。8接種方法3T/CI270—20248.1接種方法選擇接種方法可根據(jù)各自條件選擇田間鉆孔接種法或可控條件接種法。8.2田間鉆孔接種法供試材料5月～6月株齡，選擇無赤腐病甘蔗植株進行田間鉆孔接種。用直徑8mm鉆孔器在地面上第2或第3節(jié)間中部鉆孔（直徑8mm，深12mm用移液槍將100μL接種液滴入鉆孔中，取厚濕無菌脫脂棉封孔，再用無菌保鮮膜包裹住，每份材料每重復(fù)（每行）接種5株共20株。整個接種期間，每天噴水1次～2次保持相對濕度在75%～90%。8.3可控條件接種法供試材料8月～10月株齡，選擇未開花無赤腐病甘蔗植株置于可控溫室中用于接種。每份材料每重復(fù)（每行）選擇5株共20株，從田間取上部2/3蔗莖，保留頂部功能葉葉片、葉鞘完整，用滅菌刀剔除老葉及葉鞘、修剪頂部葉片、不損傷節(jié)間。將處理好的蔗莖垂直排列在裝有10cm～15cm潮濕砂床中，并確保最底部蔗莖節(jié)在砂床表面以下。選擇頂部完整葉鞘下第1和第2個節(jié)進行接種。取長10cm寬3cm無菌脫脂棉條浸泡在接種液中，然后把棉條纏繞在選擇的接種節(jié)上，再用無菌保鮮膜將整個節(jié)包裹住。接種期間保持相對濕度90%，溫度32℃;10m2鑒定溫室中每天用日照燈照明8h，總光能輸出320瓦。9病情調(diào)查田間鉆孔法接種60d或可控條件法接種10d后，用鋒利刀刮擦甘蔗植株接種節(jié)點和節(jié)間區(qū)域并縱向剖開蔗莖，觀察記錄甘蔗植株接種節(jié)點和節(jié)間病斑特征、病斑顏色及擴展、組織病變與腐爛、芽壞死和葉片干枯等發(fā)病情況。10抗病性評價兩種接種方法都根據(jù)病情調(diào)查結(jié)果確定抗病性等級，并按以下分級標準進行抗病性評價，4級應(yīng)型1抗病(R)間形成紅色病斑(見圖1.A)。2中抗外部僅在節(jié)點區(qū)域出現(xiàn)少量暗紅褐色病斑；內(nèi)部組織形成紅色連片貫穿2～3個節(jié)間病斑(見圖1.B)。3中感外部生長帶、葉痕出現(xiàn)壞死，部分根點和蔗芽壞死；表皮內(nèi)部紅褐色病斑、不擴展；內(nèi)部組織形成紅色連片貫穿3～4個病斑(見圖1.C)。4感病(S)外部生長帶、根點、葉痕和蔗芽中等壞死；無表皮消解和組織液5高感(HS)外部生長帶、根點、葉痕和蔗芽嚴重壞死；表皮消解、組織液滲出，表皮內(nèi)部褐色病變；內(nèi)部組織節(jié)和節(jié)間上形成大量紅色連片貫穿整個蔗莖病斑(見圖1.E)。5a:病葉(中脈赤腐);b:病株(蔗6T/CI270—2024有直接關(guān)系。病菌主要通過傷口如螟害孔、生