TZNZ 234-2023 水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中五氯酚殘留量的測定 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

CCSB50T/ZNZ浙江省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全學(xué)會發(fā)布IT/ZNZ234—2023本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由浙江省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全學(xué)會提出并歸口。本文件起草單位：浙江省水產(chǎn)技術(shù)推廣總站（浙江省漁業(yè)檢驗檢測與疫病防控中心）。本文件主要起草人：周欽、李詩言、王揚、何輝、柯慶青、王鼎南、丁雪燕、陸煒、牟哲松。1T/ZNZ234—2023水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中五氯酚殘留量測定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法本文件規(guī)定了水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中五氯酚殘留量的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。本文件適用于水體和底泥等水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中的五氯酚殘留的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法SC/T9102.1漁業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測規(guī)范第1部分：總則SC/T9102.2漁業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測規(guī)范第2部分：海洋SC/T9102.3漁業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測規(guī)范第3部分：淡水3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理在酸性條件下，試樣中的五氯酚用正己烷萃取，提取液經(jīng)過濃縮，經(jīng)固相萃取小柱凈化，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，內(nèi)標(biāo)法定量。5試劑和材料5.1乙腈（CH3CN）：色譜純。5.2正己烷（C6H14）：色譜純。5.3甲醇（CH3OH）：色譜純（同時作為流動相B）。5.4甲酸銨（CH5NO2）：色譜純。5.5硫酸（H2SO4ρ=1.83g/mL。5.6五氯酚標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（CAS87-86-5）。純度≥96%5.713C6-五氯酚（CAS85380-74-1）：純度≥96%。5.880%乙腈溶液：乙腈（5.1）和水按體積比8：2混合。5.910%硫酸溶液：硫酸（5.3）和水按體積比1：9混合。5.105mmol/L甲酸銨溶液：同時作為流動相A。稱取0.315g甲酸銨，加入水溶解于燒杯中，用水定容到1000mL容量瓶，混合均勻，現(xiàn)配現(xiàn)用。2T/ZNZ234—20235.11五氯酚標(biāo)準(zhǔn)儲備液（以五氯酚計，10.0μg/mL）：取五氯酚（5.5）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)適量（相當(dāng)于五氯酚1mg用甲醇溶解并定容至100mL棕色容量瓶中，混勻，將溶液轉(zhuǎn)移至棕色玻璃儲存瓶中，-18℃下避光保存，有效期6個月。5.12五氯酚標(biāo)準(zhǔn)工作液（以五氯酚計，100ng/mL）：準(zhǔn)確量取1mL五氯酚標(biāo)準(zhǔn)儲備液（5.10），置于100mL棕色容量瓶中，用甲醇定容，混勻，將溶液轉(zhuǎn)移至棕色玻璃儲存瓶中，-18℃下避光保存，有效期3個月。5.13五氯酚內(nèi)標(biāo)工作溶液（以13C6-五氯酚計，1μg/mL）：準(zhǔn)確稱取10mg13C6-五氯酚（5.6），用甲醇溶解并定容至100mL棕色容量瓶中，混勻成1mg/mL母液。量取適當(dāng)體積母液，用甲醇逐級稀釋至1μg/mL五氯酚內(nèi)標(biāo)溶液，-18℃下避光保存，有效期3個月。5.14固相萃取小柱：EMR-Lipid小柱（3cc，300mg），或者使用性能相當(dāng)固相萃取柱。5.15親水性聚四氟乙烯濾膜：0.22μm。6儀器和設(shè)備6.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電子噴霧離子源。6.2電子天平：感量0.01g和0.1mg。6.3離心機：轉(zhuǎn)速不低于5000r/min。6.4旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。6.5渦旋振蕩儀：最大轉(zhuǎn)速3000r/min。6.6固相萃取裝置。6.7微量移液器。6.8采泥器。6.9冷凍干燥機：冷凍溫度≤-50°C，真空度＜20Pa。6.10雞心瓶：50mL。7樣品采集、制備及保存7.1按照SC/T9102.1、SC/T9102.2和SC/T9102.3規(guī)定的方法采集樣品，棕色玻璃瓶儲存水樣，樣品無需過膜，將500mL采樣瓶完全注滿，避光室溫保存，7天內(nèi)分析完成。7.2底泥先在-20°C預(yù)冷凍24h，經(jīng)冷凍干燥機（-50°C，真空度＜20Pa，冷凍干燥10h）冷凍干燥后，剔除石塊和植物體，用研缽研磨后過100目篩網(wǎng)，常溫避光干燥保存，1個月內(nèi)完成分析。8測定步驟8.1樣品萃取及凈化8.1.1水樣處理準(zhǔn)確移取50mL水樣樣品于100mL離心管，加入五氯酚內(nèi)標(biāo)溶液（5.13）200μL，加入1mL10%硫酸溶液（5.9），加入正己烷（5.2）20mL，振搖5min，5000r/min離心5min。取一半上清液到玻璃雞心瓶中，待凈化。8.1.2底泥處理3T/ZNZ234—2023稱取5.00g的底泥樣品，準(zhǔn)確到0.01g，加入五氯酚內(nèi)標(biāo)溶液（5.13）100μL，加入10mL硫酸溶液（5.9），旋渦后加入20mL正己烷（5.2）溶液，振搖5min，5000r/min離心5min，再用20mL正己烷重復(fù)提取一次，移取全部上清液到玻璃雞心瓶中，待凈化。8.2凈化在40°C下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，向雞心瓶中加入2mL的乙腈溶液（5.8），漩渦復(fù)溶，在自然重力下過EMR-Lipid小柱，收集全部濾出液，經(jīng)過0.22μm親水性聚四氟乙烯濾膜過濾，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。8.3儀器參考條件8.3.1液相色譜參考條件液相色譜參數(shù)設(shè)置應(yīng)滿足以下條件：a)色譜柱：C18，2.6μm，2.1mm×50mm（內(nèi)徑或相當(dāng)者；b)流動相：5mmol/L甲酸銨溶液(5.10)，甲醇(5.3)，梯度洗脫條件見表1；c)柱溫：40°C；d)進(jìn)樣量：2μL；表1液相色譜的梯度洗脫條件5mmol/L甲酸銨溶液8.3.2質(zhì)譜參考條件質(zhì)譜參考條件：a）離子源：電噴霧離子源；b）掃描模式：電噴霧電離負(fù)離子模式（ESI-）；c）監(jiān)測方式：多重反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；d）電噴霧電壓（IS）：4500V；e）離子源溫度（TEM）：550℃;f）氣簾氣壓力（CUR）：35psi；g）霧化氣壓力（GS1）：40psi；h）輔助氣壓力（GS2）：50psi；i）碰撞氣流速（CAD）：Medium。j）質(zhì)譜參數(shù)見表2。4T/ZNZ234—2023表2五氯酚及13C6-五氯酚的定性離子、定量離子、去簇電壓及碰撞能量8.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取標(biāo)準(zhǔn)工作液（5.12）和內(nèi)標(biāo)工作液（5.13）適量，經(jīng)氮氣吹干后，用80%乙腈水溶液配制成五氯酚濃度為0.1ng/mL、0.5ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL系列標(biāo)準(zhǔn)工作液（13C6-五氯酚內(nèi)標(biāo)濃度為50ng/mL）。分別以五氯酚濃度為橫坐標(biāo)（x），五氯酚的峰面積和內(nèi)標(biāo)13C6-五氯酚峰面積比值為縱坐標(biāo)（y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。8.5測定8.5.1定性測定在相同實驗條件下，樣品中待測物質(zhì)的保留時間與基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的保留時間的偏差在±2.5%之內(nèi)，且樣品中各組分定性離子的相對豐度與濃度接近的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中對應(yīng)的定性離子的相對豐度進(jìn)行比較，偏差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判定為樣品中存在對應(yīng)的待測物。表3定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差>50±20±25±30±508.5.2定量測定取試樣溶液和標(biāo)準(zhǔn)工作液，作多點校準(zhǔn)，五氯酚以13C6-五氯酚為內(nèi)標(biāo)，以色譜峰峰面積定量，內(nèi)標(biāo) 法計算。標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣溶液中目標(biāo)藥物的特征離子質(zhì)量色譜峰峰面積均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍之內(nèi)。標(biāo)準(zhǔn)溶液特征離子質(zhì)量色譜圖見附錄A。8.6空白實驗除不加試樣外，均按測定條件和步驟執(zhí)行。9結(jié)果計算和表述9.1水體樣品結(jié)果計算按式（1）計算水體樣品中五氯酚殘留量。5T/ZNZ234—2023式中：X1—水體樣品中五氯酚殘留量，單位為納克每升（ng/Lc0—試劑空白結(jié)果，單位為納克每毫升（ng/mL）；c1—從標(biāo)準(zhǔn)曲線上得到的樣液中五氯酚的含量，單位為納克每毫升（ng/mL）；V1—樣品的最終定容體積，單位為毫升（mLV2—水體樣品的取樣體積，單位為毫升（mL）。9.2底泥樣品結(jié)果計算按式（2）計算底泥樣品中五氯酚殘留量。2=（2）式中：X2—底泥樣品中五氯酚殘留量，單位為微克每千克(μg/kgc0—試劑空白結(jié)果，單位為納克每毫升（ng/mL）；c2—從標(biāo)準(zhǔn)曲線上得到的樣液中五氯酚的含量，單位為納克每毫升（ng/mLV3—樣品的最終定容體積，單位為毫升（mL）；m—底泥樣品取樣質(zhì)量，單位為克（g）。9.3結(jié)果表述測定結(jié)果保留小數(shù)點后一位。10檢測方法靈敏度、精密度、準(zhǔn)確度10.1檢出限和定量限本方法水體樣品中五氯酚的檢出限為0.3ng/L，定量限為1.0ng