雞新城疫診斷技術與綜合防控措施

近年來，我國使用新城疫疫苗的覆蓋率較高，本病的發(fā)生逐漸減少，特別是以高發(fā)病率、高死亡率的典型性新城疫疫情的影響逐漸減弱，但低發(fā)病率、低死亡率、高淘汰率的非典型性新城疫卻不斷發(fā)生。由于非典型性新城疫的臨床特點和病理變化與典型性新城疫有很大不同，容易被誤診為其他疾病，且病雞體內(nèi)的抗體常高于log28，使雞新城疫的防控面臨新的挑戰(zhàn)。1病原學新城疫病毒是副黏病毒科、副黏病毒屬的成員，是單股RNA病毒，病毒粒子為蝌蚪樣或大小不規(guī)則的圓形，直徑在100～500nm，由核衣殼、囊膜組成，囊膜外有放射性的突起。新城疫病毒可編碼6種結(jié)構(gòu)蛋白（分別為NP、P、M、F、HN和L6），其中NP蛋白可參與病毒基因組的復制，結(jié)構(gòu)蛋白M、F以及HN可參與囊膜的合成，F(xiàn)N和N蛋白主要附著于病毒的囊膜外，M蛋白主要在囊膜內(nèi)，HN和F蛋白與病毒的致病性有密切關系。新城疫病毒在雞胚絨毛尿囊膜、尿囊腔中可生長繁殖，在36～72h內(nèi)導致雞胚死亡，死亡的胚體有嚴重出血；新城疫病毒能夠在多種動物的培養(yǎng)基內(nèi)生長繁殖，且均能導致動物細胞產(chǎn)生病變反應。新城疫病毒能夠在動物尸體、土壤中存活30d，在0℃的組織、尿液中可存活1年以上，室溫條件或溫度更高時，病毒的存活時間較短。日光直射、干燥以及常見的消毒藥品如乙醚、氯仿等均可較快的將新城疫病毒殺滅。新城疫病毒可按照致病力的不同分為三種類型，分別為緩發(fā)型（僅有輕微致病力）、中發(fā)型（具有中等致病力）以及強毒型（具有高致病力）。目前大部分地區(qū)發(fā)生的新城疫均屬于緩發(fā)型或中發(fā)型病毒引起的。使用緩發(fā)型毒株制作的疫苗產(chǎn)生的免疫保護力較弱，保護期短，需要重復免疫才能達到良好的效果。而中發(fā)型毒株在制作疫苗時可以刺激機體產(chǎn)生更強、更持久的抵抗力，但有可能會引起部分雞死亡，故部分國家不采用這種疫苗免疫。2流行病學2.1易感動物新城疫病毒能夠感染多種禽類，包括雞、鴿子、火雞、鵪鶉、野鴨、烏鴉、孔雀等，其中雞的易感性最強，任何日齡、品種及性別均能感染，且日齡越小的雛雞越易感。2.2傳染源及傳播途徑患病動物和帶毒動物是主要的傳染源，新城疫病毒可通過消化道、呼吸道、眼結(jié)膜、創(chuàng)傷的皮膚以及交配等多種方式傳播，患病動物和帶毒動物被感染后24h會通過口腔、鼻腔分泌物向體外排毒，污染周圍的空氣、水源、飼料、用具等。2.3季節(jié)性本病全年均可發(fā)生，無明顯的季節(jié)性，但由于新城疫病毒在低溫環(huán)境下存活的時間更長，因此在氣溫較低或氣候多變的季節(jié)更易發(fā)病。3診斷技術3.1初步診斷可根據(jù)病雞的臨床癥狀和剖檢特征，結(jié)合流行病學特點可初步診斷，但由于雞新城疫的部分臨床癥狀與禽霍亂、雞傳染性喉氣管炎等呼吸系統(tǒng)疾病較為類似，因此應當注重鑒別診斷。按照病雞的臨床癥狀不同可將雞新城疫分為最急性型、急性型、慢性型以及非典型新城疫。自然感染條件下本病的潛伏期為4～5d。3.1.1最急性型多發(fā)生在疫情暴發(fā)初期，病雞突然發(fā)病，無任何癥狀而突然死亡，主要以雛雞發(fā)病為主，死亡率可達90%，成年雞感染后不易突然死亡。3.1.2急性型病雞的呼吸系統(tǒng)癥狀明顯，流鼻涕，流淚，張口呼吸，咳嗽，呼吸紊亂，因呼吸困難會有“咯咯”的喘鳴聲，聽診有明顯的濕鑼音，雞冠、肉髯發(fā)紺；體溫升高至44℃左右，昏睡，不愿活動，兩翅下垂，垂頭縮頸；喙旁有大量的黏液，嗉囊內(nèi)有液體，如果將病雞倒提，口腔和鼻腔內(nèi)會流出大量液體，有酸臭氣味，也有的病雞可通過甩頭的方式甩出口腔、鼻腔內(nèi)的分泌物。病雞出現(xiàn)下痢，排出的糞便為黃綠色或黃白色，有時伴有血液，后期糞便可為蛋清樣。部分病例會出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，翅部、腿部麻痹，嚴重影響其行動，出現(xiàn)跛行、站立不穩(wěn)，有的會出現(xiàn)頭頸后仰、頭頸向側(cè)方扭轉(zhuǎn)，呈共濟失調(diào)。3.1.3慢性型在患病初期該型病例與急性型類似，但隨著時間的延長，癥狀逐漸減輕，呼吸系統(tǒng)癥狀逐漸消失，僅保留神經(jīng)癥狀，翅部、腿部麻痹，運動失調(diào)，頭頸后仰或頭頸向一側(cè)扭轉(zhuǎn)。有的也會出現(xiàn)全身癱瘓、一側(cè)癱瘓等，病死率約為15%～45%。3.1.4非典型性相較于前三個類型，非典型新城疫的癥狀較為緩和，大多數(shù)病例沒有明顯的臨床表現(xiàn)，僅表現(xiàn)出精神不振，翅膀下垂，羽毛凌亂，采食量和飲水量均降低，小日齡的雛雞可能會表現(xiàn)出部分臨床癥狀，如張口伸頸呼吸，口腔、鼻腔中有大量黏液，排綠色稀糞等。隨著病程的發(fā)展，少數(shù)患病雞有站立不穩(wěn)，歪頭，“觀星狀”等神經(jīng)系統(tǒng)癥狀。產(chǎn)蛋雞患病時產(chǎn)蛋率下降40%～70%，一段時間后會慢慢回升，但軟殼率、小蛋率明顯提高，種蛋的受精率和孵化率也會受到影響，此型多發(fā)于免疫雞群。3.1.5剖檢特征全身的漿膜、黏膜出現(xiàn)出血，特別是肌胃、腺胃和賁門處存在多處潰瘍性壞死灶，并伴有出血；心冠脂肪、心外膜有菜花樣病變，可見針尖大小的出血點；呼吸道、消化道充血、腫脹，腸道外側(cè)有大小不一的紫紅色腸淋巴濾泡，小腸粘膜有纖維素性、出血性壞死灶，直腸、泄殖腔粘膜出血。3.2實驗室診斷3.2.1病原學診斷（1）病料處理對病死雞可直接無菌采集肝臟、脾臟、肺臟等器官作為病料，經(jīng)3次凍融后加入PBS溶液研磨，研磨物置于4℃低溫離心15min后取上清（轉(zhuǎn)速為10000r/min），將上清移至無菌離心管內(nèi)，添加10000IU/mL的青霉素和10g/L的鏈霉素，37℃下感作1h后將液體用0.22μm濾膜過濾。（2）病毒分離鑒定將過濾好的樣本接種于10日齡SPF雞胚尿囊腔內(nèi)，每個雞胚接種0.2mL，接種后將蛋置于孵化箱內(nèi)，間隔6h照蛋1次，將24h后發(fā)生死亡的雞胚置于4℃下保存過夜，收集雞胚尿囊液，并觀察雞胚的情況。（3）結(jié)果判定當胚體出現(xiàn)頭、翅、頸、胸等多處出血，尿囊液為清亮狀態(tài)，同時用病料涂片染色鏡檢，未發(fā)現(xiàn)病原體，幾種常見的培養(yǎng)基上無細菌生長，則可判定為新城疫病毒，同時可使用血清學診斷驗證。3.2.2血清學診斷（1）病料處理可用血清或雞蛋作為檢測的病料，血清樣品是無菌采集患病雞血液或病死雞心房內(nèi)凝血塊后進行血清的分離，合格的血清應當新鮮、無雜質(zhì)、無腐敗、不容血，呈微黃色的清亮液體。由于采血可能會造成雞只應激，因此可使用卵黃抗體檢測的方法代替血清效價檢測。（2）血凝與血凝抑制試驗血凝試驗：在96孔板的第一排和第二排分別加入50μL的生理鹽水和50μL紅細胞，將50μL待檢樣品加入生理鹽水第2孔內(nèi)，混勻后吸出50μL加入第2孔，直至稀釋到第12孔。再在各孔內(nèi)加入1%的雞紅細胞，震蕩2min，室溫下靜置10～30min。血凝抑制試驗：在96孔板的第一、二、三排的各孔中加入50μL生理鹽水，在第一排的第1孔內(nèi)加入50μL待檢血清，混勻后吸出50μL加入第2孔，直至稀釋到第12孔，稀釋完成后像第一、二排各孔內(nèi)加入4個單位血凝素50μL，震蕩2min混勻，室溫下靜置20min，再在各孔內(nèi)加入1%的雞紅細胞，震蕩2min，室溫下靜置10～30min。（3）結(jié)果判定血凝試驗中，第二排為紅細胞對照組，全部完全沉降，再觀察第一排的凝集情況，以能夠使等量紅細胞發(fā)生完全凝集的病毒最高稀釋倍數(shù)作為病毒的血凝價。在血凝抑制試驗中，第二排為抗原對照，紅細胞全部發(fā)生凝集，第三排為紅細胞對照組，紅細胞全部沉降，再觀察第一排的凝集情況，以待檢血清能夠完全抑制病毒凝集紅細胞的最高稀釋倍數(shù)作為血清的HAI效價。3.2.3分子生物學診斷主要用于檢驗雞新城疫病毒的分子生物學方法為PCR法，此外，也可使用RNA指紋圖譜法、核酸探針法等其他方法進行檢測，但該方法對檢測設備和操作人員的要求較高，基層實踐中尚未得到推廣。4綜合防治目前尚沒有治療雞新城疫的特效方法，因此應當堅持“預防為主，防大于治”的原則綜合防控本病。4.1做好免疫接種免疫接種是預防雞新城疫的主要方法之一，當雞群的免疫效價在log24以上時，即使用較強毒力的毒株攻擊雞群也能夠不發(fā)病，但不能保證其生產(chǎn)性能不受影響，但當免疫效價大于log28時，則能夠保證產(chǎn)蛋雞感染強毒后既不死亡也不影響產(chǎn)蛋性能。應當根據(jù)各養(yǎng)殖場的實際情況制定免疫程序，可參照如下程序：7日齡雛雞用弱毒疫苗進行滴鼻首免，疫苗在使用前用蒸餾水稀釋10～20倍，每只雛雞接種0.3mL；24～26日齡時使用弱毒疫苗進行點眼二免，每只雞接種0.5mL；2月齡以上的雞可使用Ⅰ系苗（中等毒力苗，適合已經(jīng)接種2次弱毒力疫苗的雛雞使用）進行3免，疫苗使用前用蒸餾水稀釋100倍，在雞只翅膀內(nèi)側(cè)進行刺種，接種后3d即可形成可靠的抵抗力，免疫保護期約為2年。4.2加強飼養(yǎng)管理新城疫病毒雖然只有1個血清型，但有9個基因型，各個國家和地區(qū)都通過免疫接種的方式對本病進行預防，致使新城疫病毒的毒株不斷出現(xiàn)變異，試驗證明，新城疫野毒株間的HN蛋白氨基酸序列的同源度可達98.15%±1.65%，但與傳統(tǒng)疫苗毒株（如LaSotaClone30）的同源性僅有88.65%±1.25%，差距比較巨大，因此疫苗有可能已經(jīng)不能起到很好的預防疾病的作用。這就需要各個養(yǎng)殖場通過不斷加強飼養(yǎng)管理來控制新城疫疫情的發(fā)生。4.2.1飼料的配制在飼料的配制方面應當保證營養(yǎng)的充足和全面，特別是維生素和礦物質(zhì)元素的添加，營養(yǎng)全面的日糧能夠很好的避免雞群產(chǎn)生應激反應，有效提升雞群的抗病力。4.2.2注重環(huán)境控制雞場內(nèi)應當做好環(huán)境控制，及時的清理糞便，至少每日清理1次，保持雞舍的干凈、整潔，在保證舍內(nèi)溫濕度的同時加強通風，避免有毒有害氣體在舍內(nèi)的蓄積。清理出的糞便不得隨意堆放，應運送至統(tǒng)一處理地點進行無害化處理。4.2.3嚴格執(zhí)行消毒程序養(yǎng)殖場應當制定消毒程序并嚴格執(zhí)行，生活區(qū)和生產(chǎn)區(qū)應當有有效的隔離，養(yǎng)殖場采取封閉式管理，無特殊情況外來車輛和人員不得隨意入場，工作人員入場前應當更換工作服，并進行嚴格消毒，車輛進入時必須經(jīng)過消毒池，保證消毒效果。雞舍內(nèi)每日使用高錳酸鉀溶液進行消毒，養(yǎng)殖過程中應遵循“全進全出”的原則，轉(zhuǎn)入雞苗前要對環(huán)境進行徹底的清掃和消毒，并空置一段時間后方可使用。4.3疫情處理（1）當發(fā)現(xiàn)雞新城疫疑似病例時，應立刻對養(yǎng)殖場進行封鎖，并上報有主管部門，禁止對場內(nèi)的雞群轉(zhuǎn)場、出售。要對養(yǎng)殖場進行全面、徹底的消毒，控制疾病的蔓延和傳播。對治療無效死亡的患病雞及其接觸過的用具、飼料、墊草等均應進行無害化處理，常用的方法包括深埋和焚燒。（2）對未發(fā)病雞應立刻使用弱毒活疫苗進行緊急接種，對日齡較大的雞可刺種或肌肉注射Ⅰ系苗，但注射時應當仔細核對接種