動(dòng)物組織胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)：試驗(yàn)一 顯微鏡的正確使用、細(xì)胞和上皮組織

實(shí)驗(yàn)一顯微鏡的正確使用、細(xì)胞和上皮組織實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：熟悉顯微鏡的使用方法了解石蠟切片制作過程了解細(xì)胞在光鏡下的形態(tài)、大小觀察線粒體、肝糖元、高爾基體觀察各種上皮組織形態(tài)結(jié)構(gòu)實(shí)驗(yàn)須知顯微鏡是組織學(xué)實(shí)驗(yàn)課的主要儀器，又是貴重的光學(xué)儀器，應(yīng)用顯微鏡必須經(jīng)過嚴(yán)格訓(xùn)練，使用時(shí)務(wù)必嚴(yán)格按操作規(guī)程進(jìn)行，切勿隨意拆卸。應(yīng)按正確的方法，輕取輕放，用畢放回原處。發(fā)現(xiàn)問題，隨時(shí)報(bào)告，并記錄在顯微鏡旁的小本上。實(shí)驗(yàn)室中制作的組織切片是教師們幾十年辛勤勞動(dòng)的結(jié)果，因此，對(duì)切片要嚴(yán)加愛護(hù)。切片只能在每個(gè)實(shí)驗(yàn)小組中輪流觀察，不能隔桌相互傳遞，如果發(fā)生損壞，應(yīng)及時(shí)報(bào)告老師并處以罰款(每張切片20元)。每一排由一組長負(fù)責(zé)。衛(wèi)生安排（每周一組）負(fù)責(zé)電源、顯微鏡檢查；桌子、地面每節(jié)課后均需打掃。熟悉工具—光學(xué)顯微鏡目鏡物鏡載物臺(tái)光源載物臺(tái)下面的結(jié)構(gòu)，聚光器的調(diào)節(jié)聚光器標(biāo)本推進(jìn)器聚光器光闌聚光器高度調(diào)節(jié)鈕標(biāo)本夾持器，配合標(biāo)本推進(jìn)器，調(diào)節(jié)玻片的位置調(diào)節(jié)以適應(yīng)不同的瞳距屈光度調(diào)節(jié)，適應(yīng)左右眼不同視力物鏡按順時(shí)針從低倍到高倍排列分別為4倍、10倍、40倍和100倍注意：100倍的是油鏡，必須用特殊的香柏油作介質(zhì)，用后用二甲苯擦除，平時(shí)不用。調(diào)焦旋鈕內(nèi)側(cè)大旋鈕，粗調(diào)外側(cè)小旋紐，細(xì)調(diào)調(diào)焦旋鈕左右各一用右手控制標(biāo)本位置，左手調(diào)焦顯微鏡使用前后注意事項(xiàng)前右手握住鏡臂，左手平托鏡座，保持鏡體直立，嚴(yán)禁單手提取顯微鏡。檢查顯微鏡是否完好，寫登記本。中打開光源----放置切片----調(diào)整組織切片位置調(diào)整焦距----低倍鏡觀察----高倍鏡觀察后旋暗并關(guān)閉電源；下降載物臺(tái)，取下組織切片，放回切片盒；物鏡復(fù)位，罩上防塵罩；檢查顯微鏡是否完好。10%福馬林24小時(shí)

70%酒精1.5小時(shí)

80%酒精1.5小時(shí)

95%酒精1小時(shí)

95%酒精1小時(shí)

95%酒精1.5小時(shí)無水酒精1.5小時(shí)無水酒精1.5小時(shí)二甲苯0.5小時(shí)二甲苯0.5小時(shí)石蠟（56-58度）1.0小時(shí)60度石蠟（56-58度）1.0小時(shí)60度石蠟（56-58度）1.0小時(shí)60度石蠟切片制作過程介紹脫水固定透明透蠟包埋固定脫水透明脫水，常用不同濃度的乙醇透明，用二甲苯，甲苯，脫水(不同濃度的乙醇)透明(二甲苯)固定（波恩氏液）透蠟

包埋

透蠟，在溫箱內(nèi)進(jìn)行，溫度高于石蠟熔點(diǎn)透蠟后，將組織置于盛蠟的小容器中，冷卻后成蠟塊包埋后的蠟塊和切片機(jī)蠟塊和蠟塊中間的組織夾持蠟塊刀架搖柄蠟塊也可固定在木塊上。切出微米厚度的蠟片，蠟片往往連續(xù)成條用毛筆轉(zhuǎn)移到載玻片上，烤片貼牢后可以染色蘇木精-伊紅染色法

(hematoxylin-eosinstainingmethod)

染色的步驟組織脫蠟（二甲苯1）10-15分鐘組織脫蠟（二甲苯2）3-5分鐘組織進(jìn)入100%酒精2-3分鐘組織進(jìn)入95%酒精2-3分鐘組織進(jìn)入70%酒精2-3分鐘自來水洗0.5-1分鐘自來水洗0.5-1分鐘組織進(jìn)入蘇木精染色10-15分鐘自來水洗0.5-1分鐘0.5%鹽酸酒精分色10-20秒自來水洗10-30分鐘組織進(jìn)入70%酒精2-3分鐘進(jìn)入伊紅染色3-5分鐘進(jìn)入95%酒精1-3分鐘進(jìn)入95%酒精2-3分鐘進(jìn)入100%酒精2-3分鐘進(jìn)入1005酒精2-5分鐘進(jìn)入二甲苯（1）5分鐘-10小時(shí)進(jìn)入二甲苯（2）30分鐘用中性樹膠封固顯微鏡觀察原則

-------從低倍到高倍細(xì)胞（Cell）細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)與細(xì)胞形態(tài)肝細(xì)胞(H-E染色)肌細(xì)胞血細(xì)胞神經(jīng)細(xì)胞細(xì)跑器線粒體：蠑螈肝（鐵礬蘇木精染色)高爾基復(fù)合體：豬脊神經(jīng)節(jié)（鍍銀法)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)：多極神經(jīng)元的尼氏體細(xì)胞的光鏡觀察此圖片上首先區(qū)分出細(xì)胞核然后區(qū)分出細(xì)胞形狀線粒體繪圖線粒體（mitochondrion）腎（鐵蘇木精染色）細(xì)胞核中間黑色圓點(diǎn)為核仁線粒體為細(xì)胞質(zhì)中的小黑點(diǎn)核仁：合成RNA，組裝核糖體大小亞基的前體高爾基體功能：參與細(xì)胞的分泌活動(dòng)，加工、濃縮、包裝和運(yùn)輸肝糖元過碘酸希夫反應(yīng)（PAS反應(yīng)）

多糖過碘酸氧化醛Schiff試劑紫紅色沉淀肝細(xì)胞細(xì)胞核肝糖元有絲分裂（mitosis）細(xì)胞的繁殖有絲分裂：(馬蛔蟲子宮切片、鐵蘇木精染色)倒置顯微鏡

（Invertedmicroscope

）熒光顯微鏡

（fluorescencemicroscope）透射電子顯微鏡

(transmissionelectronmicroscope,TEM)掃描電子顯微鏡技術(shù)

（scanningelectronmicroscope,SEM）單層扁平上皮（腸系膜，鍍銀法）細(xì)胞核，不被染色細(xì)胞邊界，被銀染成黑色血管內(nèi)皮，單層扁平細(xì)胞核，扁圓單層扁平上皮（血管內(nèi)皮，HE染色）單層立方上皮（腎，HE染色）單層立方上皮（甲狀腺）甲狀腺上皮細(xì)胞細(xì)胞核單層柱狀上皮（腸絨毛）小腸絨毛杯狀細(xì)胞（gobletcell）假復(fù)層柱狀纖毛上皮

（pseudostratifiedcolumnarciliatedepithelium

）氣管壁氣管軟骨氣管上皮，假復(fù)層柱狀纖毛上皮細(xì)胞核，形態(tài)各異，看上去多層變移上皮（膀胱）

（transitionalepithelium）復(fù)層扁平上皮

（stratifiedsquamousepithelium

）表層細(xì)胞扁平中間細(xì)胞多邊形