高中生物 第一部分 微生物的利用 實(shí)驗(yàn)2 分離以尿素為氮源的微生物學(xué)案 浙科版選修1

實(shí)驗(yàn)2分離以尿素為氮源的微生物

［學(xué)考報(bào)告］

知識(shí)內(nèi)容考試屬性考情解讀

1.進(jìn)行微生物分離。使用含有尿素的培養(yǎng)基，

采用涂布分離法，分離有麻酶的細(xì)菌。

2.使用酚紅指示劑檢測(cè)以尿素為氮源的細(xì)菌

的存在。

分離以尿素為氮源的微生物加試

3.說(shuō)明分離以尿素為氮源的細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)原

理。

4.舉例說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)分離出來(lái)的細(xì)菌不一定都

是以尿素為氮源的細(xì)菌

預(yù)習(xí)導(dǎo)學(xué)，&砥信?)

JIAOCAIDAODU

教材導(dǎo)讀---------勁--------

一、以尿素為氮源的微生物

1.尿素

又稱胭，是蛋白質(zhì)降解的產(chǎn)物。在人和其他哺乳動(dòng)物如家畜的尿中都含有尿素，植物不

能直接吸收尿素，因此大量尿素的存在將對(duì)環(huán)境造成污染。

2.以尿素為氮源的微生物

這些細(xì)菌可以尿素為氮源，是因?yàn)槠浜兴久?通過(guò)隆解尿素作為其生長(zhǎng)的氮源。其利

用尿素的反應(yīng)式為：(NHz)zC=0+HzO2N%+COz。

3.分離以尿素為氮源的微生物所依據(jù)的原理

在氮源只有尿素時(shí),這些微生物能利用尿素獲得氮源而存活；而其他微生物卻不能利用

尿素,最終因?yàn)槿狈Φ炊劳觥?/p>

二、從土壤中分離出以尿素為氮源的微生物實(shí)驗(yàn)

1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

(1)使用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基分離含有麻酶的細(xì)菌。

(2)通過(guò)指示劑顏色的變化檢知酶(服酶)所催化的化學(xué)反應(yīng)(培養(yǎng)基pH的變化)。

(3)統(tǒng)計(jì)被檢測(cè)的土壤中含有的以尿素為氮源的微生物的數(shù)量。

2.實(shí)驗(yàn)原理

(1)用選擇培養(yǎng)基(培養(yǎng)基類型)可分離出以尿素為氮源的微生物。

(2)在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌產(chǎn)生的胭酶將培養(yǎng)基中的尿素分解成氨，使培

養(yǎng)基變堿，pH牙遹，酚紅指示劑變紅。

(3)根據(jù)培養(yǎng)基中的菌落數(shù),可統(tǒng)計(jì)土壤樣品中含有的這種微生物的數(shù)量。

3.實(shí)驗(yàn)步驟

⑴倒平板：在60℃左右時(shí)，將兩只三角瓶中已滅菌的LB固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)

基，在酒精燈旁分別倒入兩個(gè)培養(yǎng)皿中,在水平的超凈臺(tái)上搖勻，平放至凝固。

(2)制備細(xì)菌懸浮液

將土樣1g,在無(wú)菌條件下加到有99mL無(wú)菌水的三角瓶中，振蕩10min,制成10-2

稀釋液；從該稀釋液中取0.5mL懸液加到4.5mL無(wú)菌水的三角瓶中，經(jīng)振蕩就制成10-3

稀釋液；再?gòu)?0-稀釋液中取o.5mL懸液加到4.5mL無(wú)菌水的三角瓶中，經(jīng)振蕩就制成

IO7稀釋液；依此法可依次制備出IO-、io』……土壤稀釋液。

(3)用稀釋涂布分離法分離細(xì)菌

取ICE'和10一的土壤稀釋液各0.1mL,分別加到有LB培養(yǎng)基和尿素培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿

中，再將保存在70%酒精中的玻璃刮刀放在酒精燈火焰上灼燒,待刮刀上火焰熄滅后,在遭

精燈火焰旁打開培養(yǎng)皿,將菌液涂布到整個(gè)平面上。

(4)培養(yǎng)：將培養(yǎng)皿倒置,在37℃恒溫箱中培養(yǎng)24?48倒

(5)觀察、計(jì)數(shù)菌落：比較LB培養(yǎng)基與尿素培養(yǎng)基上的菌落數(shù)。

-反--饋--檢--測(cè)--FANKUIJIANCHE

1.為什么要用瓊脂糖代替瓊脂配制固體培養(yǎng)基?

提示：瓊脂是未被純化的混合物，內(nèi)含一定的含氮化合物，用瓊脂糖替代瓊脂后，微生

物只能以尿素為唯一氮源，利于對(duì)細(xì)菌的篩選。

2.有版酶的細(xì)菌在生態(tài)穩(wěn)態(tài)上起什么作用？

提示：如果土壤中有許多尿素，在自然界較高溫度下會(huì)被水解，水解后的氨使土壤變成

堿性，與其他陰離子形成化合物則會(huì)使土壤板結(jié)。有胭酶的細(xì)菌使植物廢棄物和動(dòng)物尸體降

解，并利用所形成的氨，有利于自然界的氮循環(huán)。

3.有JR酶的細(xì)菌菌落周圍為什么有著色的環(huán)帶出現(xiàn)?

提示：此細(xì)菌能分解尿素產(chǎn)生氨，氨為堿性，酚紅指示劑在堿性下為紅色，標(biāo)志著存在

JR酶水解尿素的作用，紅色區(qū)域大小代表服酶活性強(qiáng)弱和含量的多少。

4.與全營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基上的菌落數(shù)比較，為什么尿素培養(yǎng)基上只有少數(shù)菌落?

提示：說(shuō)明能利用尿素的細(xì)菌只占少數(shù)。

師生互動(dòng)?核心突破

主題1常用的微生物分離純化方法

要點(diǎn)講解YAODIANJIANGJIE

1.稀釋涂布平板法

(1)液體稀釋法：將待分離的樣品經(jīng)過(guò)大量稀釋后，取稀釋液均勻地涂布在培養(yǎng)皿中的

培養(yǎng)基表面，培養(yǎng)后就可能得到單個(gè)菌落。該法是將已熔化并冷卻至約60℃(減少冷凝水)

的瓊脂培養(yǎng)基，先倒入無(wú)菌培養(yǎng)皿中，制成無(wú)菌平板。待充分冷卻凝固后，將一定量(約0.1

inL)的某一稀釋度的樣品懸液滴加在平板表面，再用玻璃三角刮刀涂布，使菌液均勻分散在

整個(gè)平板表面，倒置恒溫箱中培養(yǎng)。

(2)涂布平板法：可省去含菌樣品懸液的稀釋，直接吸取經(jīng)振蕩分散的樣品懸浮液1滴

加入1號(hào)瓊脂平板上，用一支玻璃刮刀均勻涂布，用此涂棒再連續(xù)涂布2號(hào)、3號(hào)、4號(hào)平

板(連續(xù)涂布起逐漸稀釋作用，涂布平板數(shù)視樣品濃度而定)，翻轉(zhuǎn)此刮刀再涂布5號(hào)、6號(hào)

平板，經(jīng)適溫倒置培養(yǎng)后挑取單個(gè)菌落。

2.平板劃線分離法

將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中制成平板，用接種環(huán)蘸取少量待分離的菌液，在培養(yǎng)

基表面平行或分區(qū)劃線如下圖，然后將培養(yǎng)皿放入恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物

往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成純種的單個(gè)菌落。幾種劃

線方法如圖：

◎特別提醒(1)倒平板時(shí)，按稀釋涂布平板法倒平板，并用記號(hào)筆標(biāo)明培養(yǎng)基名稱、

編號(hào)和實(shí)驗(yàn)日期。

(2)劃線時(shí)在近火焰處，左手拿皿底，右手拿接種環(huán)，挑取上述的土壤懸液一環(huán)在平板

上劃線。劃線的方法很多，但無(wú)論采用哪種方法，其目的都是通過(guò)劃線將樣品在平板上進(jìn)行

稀釋，使之形成單個(gè)菌落。

3.利用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行分離

不同的微生物對(duì)不同的試劑、染料、抗生素等具有不同的抵抗能力，利用這些特點(diǎn)可配

制出適合某種微生物生長(zhǎng)而限制其他微生物生長(zhǎng)的選擇培養(yǎng)基。用這種培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)微生物

就可以達(dá)到純種分離的目的。此實(shí)驗(yàn)用到的選擇培養(yǎng)基必須含有碳源、尿素、無(wú)機(jī)鹽、水、

酚紅。

。特別提醒(1)判斷培養(yǎng)基制備是否合格的方法是將接種的培養(yǎng)基和未接種的培養(yǎng)

基同時(shí)放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)24?48h,觀察未接種的培養(yǎng)基上是否有菌落生長(zhǎng)。如果

未接種的培養(yǎng)基上無(wú)菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。

(2)判斷選擇培養(yǎng)基是否起選擇作用，可將LB全營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基分別接種，同

時(shí)放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)24?48h,觀察兩種培養(yǎng)基上菌落數(shù)目的多少。如果選擇培養(yǎng)基

上的菌落數(shù)遠(yuǎn)少于LB全營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基上的菌落數(shù)，則證明選擇培養(yǎng)基確實(shí)起到了選擇作用。

4.菌絲尖端切割

菌絲尖端切割適于絲狀真菌。用無(wú)菌的解剖刀切取位于菌落邊緣的菌絲的尖端，將它們

移到合適的培養(yǎng)基上培養(yǎng)后，就能得到新菌落。

命題突破MINGTlTUPO

-------------------------------------------------------------------------------------V-------------

1.苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì)，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠

產(chǎn)生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲得了只能降解利

用苯酚的細(xì)菌菌株，篩選的主要步驟如圖所示，①為土壤樣品。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()

A.圖中②培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應(yīng)加入苯酚作為碳源

B.如果要測(cè)定②中活細(xì)菌數(shù)量，常采用稀釋涂布平板法

C.若圖中④為對(duì)照實(shí)驗(yàn)，則其中應(yīng)以苯酚作為唯一碳源

D.使用平板劃線法可以在⑥上獲得單菌落

答案：C

2.微生物與人類關(guān)系密切。雖然有些微生物能使動(dòng)植物患病，但多數(shù)微生物對(duì)人類是

有益的。請(qǐng)回答有關(guān)微生物及其應(yīng)用的問(wèn)題：

(1)培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基配方中一般含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽。從土壤中分離分解

尿素的細(xì)菌時(shí)，培養(yǎng)基中加的唯一氮源為，這種培養(yǎng)基稱為培養(yǎng)基。

(2)在制備固體培養(yǎng)基的倒平板操作時(shí)，平板冷凝后，為什么要將平板倒置？

(3)分離微生物的方法很多,最常用的是平板劃線法和法。

解析：分離微生物的培養(yǎng)基稱為選擇培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基中添加尿素為唯一氮源可分離分

解尿素的細(xì)菌；制作固體培養(yǎng)基的倒平板操作時(shí)，平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后

的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可

以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染；分離微生物最常用的方法是平板劃線法和稀釋

涂布平板法。為保證無(wú)菌操作，整個(gè)操作過(guò)程要在酒精燈的火焰旁進(jìn)行。

答案：(1)尿素選擇

(2)皿蓋上會(huì)凝有水珠，防止水珠落入培養(yǎng)皿造成污染，還可使培養(yǎng)基表面的水分更好

揮發(fā)

(3)稀釋涂布平板

主題2從土壤中分離出以尿素為氮源的微生物實(shí)驗(yàn)的相關(guān)分析

----要---點(diǎn)---講---解----------------Y-A-O--D-IA-N--J-IA-N.G-JI-E----

L從合適的土壤中采集微生物

(1)沒(méi)硬化，腐殖質(zhì)豐富的土壤含有較多的以尿素為氮源的微生物。

(2)采土樣最好的土層是5?25cm。

(3)采土樣地點(diǎn)選好后，用小鏟子去除5cm表土，取離地面5?15cm處的土樣10?25

克，盛于預(yù)先滅菌的牛皮紙袋中扎緊，并標(biāo)明時(shí)間、地點(diǎn)和環(huán)境等情況，以備查看。

2.實(shí)驗(yàn)原理

尿素—*NH3

中性堿性

酚紅顏色：黃色紅色

酚紅在酸性環(huán)境中呈黃色，在堿性環(huán)境中為紅色，變色范圍是pH為6.4?8.2。

3.酚紅指示劑鑒定尿素分解菌的原理

尿素分解菌向胞外分泌JR酶，產(chǎn)生的JR酶向周圍擴(kuò)散，使培養(yǎng)基中的尿素水解，尿素分

解后產(chǎn)生氨，氨為堿性，使培養(yǎng)基變堿，酚紅在酸性環(huán)境中為黃色，在堿性環(huán)境里變?yōu)榧t色,

于是酚紅由黃變紅。培養(yǎng)基中的酸堿指示劑產(chǎn)生顏色變化，標(biāo)志著存在JR酶水解尿素的作用，

從而證明這一菌株可以以尿素為氮源。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，紅色區(qū)域的面積越來(lái)越大。紅

色環(huán)狀區(qū)域的大小代表版酶活性的強(qiáng)弱和含量的多少。紅色區(qū)域越大，表明菌株利用尿素的

能力越強(qiáng)。由此，根據(jù)培養(yǎng)基紅色的深淺，可判斷不同土壤中選擇出的微生物對(duì)尿素分解能

力的高低。

4.所用培養(yǎng)基的特點(diǎn)

(1)瓊脂在制作固體培養(yǎng)基時(shí)起凝固劑的作用，但它卻是一種未被純化的混合物，里面

有一定量的含氮化合物。在本實(shí)驗(yàn)中所使用的尿素培養(yǎng)基要求提供氮元素的物質(zhì)只有尿素，

用這種培養(yǎng)基才能分離得到含)R酶的細(xì)菌。所以要將瓊脂純化，去除那些含氮化合物，這樣

經(jīng)純化得到的瓊脂糖就可以代替瓊脂做凝固劑且不會(huì)帶來(lái)含氮化合物對(duì)本實(shí)驗(yàn)的干擾。

(2)本實(shí)驗(yàn)的微生物分離與大腸桿菌的分離的區(qū)別

實(shí)驗(yàn)名稱分離方法分離的內(nèi)容分離結(jié)果

劃線分從同種菌種中分離得到在劃線的末端出現(xiàn)大腸

大腸桿菌培養(yǎng)和分離

離法同種菌的單菌落桿菌單菌落

從土壤浸出液里所存在

分離以尿素為氮源的微涂布分只出現(xiàn)含有服酶的細(xì)菌

的各種細(xì)菌中只將含有

生物離法菌落

月尿酶的細(xì)菌分離出來(lái)

(3)全營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基與尿素培養(yǎng)基上的菌落在數(shù)量和類型上的區(qū)另I

全營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基屬于基礎(chǔ)培養(yǎng)基，而尿素培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。全營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基上的菌落

數(shù)量和種類都明顯多于尿素培養(yǎng)基上的。因?yàn)槿珷I(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中的氮源是蛋白陳，很多細(xì)菌都

能利用它，而尿素培養(yǎng)基中的氮源只有尿素，只有含胭酶的細(xì)菌才能利用它。

5.統(tǒng)計(jì)微生物數(shù)量的方法

測(cè)定微生物細(xì)胞數(shù)量的方法很多，主要有稀釋涂布平板法(又稱平板菌落計(jì)數(shù)法)、顯微

鏡直接計(jì)數(shù)法、光電比濁法、最大可能數(shù)(MPN)法、膜過(guò)濾法等。常規(guī)的計(jì)數(shù)方法是稀釋涂

布平板法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)法。

(1)稀釋涂布平板法

①過(guò)程：將待測(cè)含菌樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋，使其中的微生物充分分散成單個(gè)細(xì)胞，然后取一

定量的稀釋樣品液，接種到平板上。

②計(jì)數(shù)：經(jīng)過(guò)一定時(shí)間培養(yǎng)后，由每個(gè)單細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而形成肉眼可見的單菌落，即一

個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)活菌，最后統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣量，換算出

單位樣品中所含的活菌數(shù)。

③優(yōu)缺點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)是可以獲得活菌數(shù)的信息。缺點(diǎn)是該計(jì)數(shù)法操作過(guò)程較繁，需要培養(yǎng)一

定時(shí)間才有結(jié)果，且測(cè)定結(jié)果易受多種因素的影響。

④注意事項(xiàng)：a.用此法計(jì)數(shù)時(shí)，一般選擇菌落數(shù)在30?300的平板計(jì)數(shù)，同時(shí)做一系列

濃度梯度實(shí)驗(yàn)，探究合適的稀釋度。對(duì)分解尿素的微生物計(jì)數(shù)時(shí)，一般制備成10一2、10一、

10-\10一5土壤稀釋液。氏實(shí)際上，由于待測(cè)樣品不易完全分散成單個(gè)細(xì)胞，故所形成的菌

落并非都是單菌落，有一部分是由2個(gè)以上的細(xì)胞長(zhǎng)成的，因此平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果會(huì)比實(shí)

際值偏低?，F(xiàn)在已采用菌落形成單位(cfu)來(lái)表示樣品的活菌含量。

(2)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法

①方法：測(cè)定酵母細(xì)胞數(shù)或霉菌抱子數(shù)常采用在顯微鏡下直接進(jìn)行計(jì)數(shù)的方法，該計(jì)數(shù)

方法被廣泛應(yīng)用于酒精、啤酒和白酒等的工業(yè)化生產(chǎn)中。該法是將酵母菌或霉菌抱子懸液，

放在血球計(jì)數(shù)器載玻片與蓋玻片之間的計(jì)數(shù)室中，在顯微鏡下直接進(jìn)行計(jì)數(shù)，是一種常用的

微生物計(jì)數(shù)方法。

②缺點(diǎn)：a.不能區(qū)分死菌與活菌；b.不適于對(duì)運(yùn)動(dòng)的細(xì)菌計(jì)數(shù)；c.需要相對(duì)高的細(xì)菌濃

度；d.個(gè)體小的細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察。

(3)光電比濁計(jì)數(shù)法

光電比濁計(jì)數(shù)法是采用光電比色計(jì)或分光光度計(jì)，測(cè)定菌懸液的光密度或透光度，其優(yōu)

點(diǎn)是簡(jiǎn)便迅速，可以連續(xù)測(cè)定，適合于自動(dòng)控制。但該法除了受菌體濃度影響外，還受細(xì)胞

形態(tài)、大小、培養(yǎng)液成分及所采用光波長(zhǎng)等因素的影響。

6.快速檢測(cè)微生物的方法

(1)原理：根據(jù)微生物特殊的生理特性或利用某些代謝產(chǎn)物的生化反應(yīng)來(lái)設(shè)計(jì)特殊的分

離培養(yǎng)基，通過(guò)觀察微生物在選擇性培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀況或生化反應(yīng)如透明圈、變色圈、抑

菌圈等進(jìn)行分離。

(2)變色圈法：在平板中加入指示劑或顯色劑，使所需微生物能被快速鑒別出來(lái)。產(chǎn)生

有機(jī)酸或胺等堿性物質(zhì)的微生物，通常采用pH值指示劑可檢測(cè)出來(lái)。

命題突破MINGTlTUPO

1.下面是分離分解尿素的細(xì)菌所用的培養(yǎng)基配方:

KH2P0I1.4g

Na2HP042.1g

MgS04?7H200.2g

葡萄糖10.0g

尿素1.0g

瓊脂糖15.0g

自來(lái)水定容至1000mL

請(qǐng)根據(jù)以上配方，回答下列問(wèn)題：

(1)該培養(yǎng)基含有微生物所需要的類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。其中最主要的碳源是

氮源是O

(2)該培養(yǎng)基按物理性質(zhì)劃分是培養(yǎng)基；按培養(yǎng)基的作用劃分是選擇培養(yǎng)基,

該培養(yǎng)基具有選擇作用的原因是_________________________________________________

⑶在該培養(yǎng)基中，可通過(guò)檢測(cè)pH的變化來(lái)判斷尿素是否被分解，依據(jù)的原理

(4)若用該培養(yǎng)基來(lái)鑒定某種細(xì)菌是否能夠分解尿素，可在培養(yǎng)基中加入指示

劑，尿素被分解后指示劑變紅色。

解析：該培養(yǎng)基含有碳源(葡萄糖)、氮源(尿素)、水、無(wú)機(jī)鹽4類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；該培養(yǎng)基

以尿素為唯一氮源，屬于選擇培養(yǎng)基，選擇培養(yǎng)分解尿素的菌；由于培養(yǎng)基中含有瓊脂糖，

又屬于固體培養(yǎng)基；在細(xì)菌分解尿素的過(guò)程中，細(xì)菌合成的版酶將尿素分解成氨，氨會(huì)使培

養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，pH升高，培養(yǎng)基中加入的酚紅指示劑在堿性環(huán)境中變紅。

答案：(1)4葡萄糖尿素

(2)固體該培養(yǎng)基中，唯一的氮源是尿素，只有能分解尿素的微生物才能在該培養(yǎng)基

上生長(zhǎng)和繁殖

(3)在細(xì)菌分解尿素的過(guò)程中，細(xì)菌合成的胭酶將尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性

增強(qiáng)，pH升高

(4)酚紅

2.現(xiàn)從土壤中分離以尿素為氮源的細(xì)菌，實(shí)驗(yàn)過(guò)程如下圖所示：

三第一I土壤建而-I稀釋|-I接種|一|培養(yǎng)、觀察

請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

(1)欲從土壤中分離出能分解尿素的細(xì)菌，將土壤用進(jìn)行一系列的梯度稀釋，

同一濃度的土壤稀釋液應(yīng)至少涂布個(gè)平板，通常以每個(gè)培養(yǎng)皿中有個(gè)以內(nèi)

的單菌落的那一組稀釋倍數(shù)為最合適。

(2)接種后的培養(yǎng)皿于37。。的恒溫箱中培養(yǎng)。若培養(yǎng)基中存在含月尿酶的細(xì)菌,

其菌落周圍會(huì)出現(xiàn),這是由于尿素被分解產(chǎn)生氨氣，與該培養(yǎng)基中的

產(chǎn)生的顏色變化，從而證明這一菌株能以尿素為氮源。

(3)分離能利用尿素的細(xì)菌時(shí)所用的培養(yǎng)基成分上最主要的特點(diǎn)是

(4)下列操作需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行的是(多選)()

A.稱取葡萄糖、瓊脂糖等培養(yǎng)基成分

B.倒平板

C.涂布平板

D.微生物的培養(yǎng)

⑸與LB全營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基上的菌落數(shù)相比，尿素培養(yǎng)基上只有少數(shù)菌落的原因是

解析：(1)涂布分離法必須先用無(wú)菌水對(duì)土樣進(jìn)行一系列的梯度稀釋，通常以每個(gè)培養(yǎng)

皿中有20個(gè)以內(nèi)的單菌落的那一組稀釋倍數(shù)為最合適。(2)接種后需倒置培養(yǎng)皿恒溫培養(yǎng)。

含有胭酶的細(xì)菌能夠?qū)⒛蛩胤纸?，產(chǎn)生的氨氣使培養(yǎng)基呈堿性，導(dǎo)致培養(yǎng)基中的酚紅指示劑

呈紅色。(3)分離能利用尿素的細(xì)菌時(shí)所用的培養(yǎng)基應(yīng)以尿素為唯一氮源的固體培養(yǎng)基。(4)

進(jìn)行微生物培養(yǎng)和分離時(shí)，倒平板、涂布平板均需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，以防雜菌污染。

(5)尿素培養(yǎng)基只以尿素為氮源，在尿素培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖的只能是少數(shù)能夠合成JR酶可利

用尿素的細(xì)菌。

答案：(1)無(wú)菌水320

(2)倒置紅色環(huán)帶酚紅指示劑

(3)以尿素作為唯一氮源的(固體)培養(yǎng)基(4)BC

(5)土壤中能利用尿素的細(xì)菌在土壤菌群中只占極少數(shù)量

知能演練'◎⑥的演即時(shí)訓(xùn)練?體驗(yàn)成功.

一、選擇題

1.土壤中有些微生物能利用尿素是因?yàn)椋ǎ?/p>

A.其體內(nèi)含有胭酶

B.其體內(nèi)含有氨（NL）酶

C.它能將CO2合成為有機(jī)物

D.它們不需要氮源

解析：選A。能利用尿素的微生物就是因?yàn)轶w內(nèi)含有胭酶，可降解尿素為其生長(zhǎng)繁殖提

供氮源。

2.從土壤中分離以尿素為氮源的微生物時(shí)，所用的LB培養(yǎng)基由以下哪一組成分構(gòu)成

（）

A.蛋白膝、NaCK水、酵母提取物、瓊脂

B.蛋白陳、NaCK水、瓊脂糖

C.蛋白膝、NaCK水、酵母提取物、瓊脂糖

D.葡萄糖、NaCl、水、酵母提取物、瓊脂

解析：選C。LB培養(yǎng)基必須含五大營(yíng)養(yǎng)元素：碳源、氮源、水、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子。由

于是固體培養(yǎng)基還必須有凝固劑，為與尿素培養(yǎng)基作對(duì)比，所用凝固劑不能帶來(lái)氮源干擾，

因此只能選擇相對(duì)更為純凈的瓊脂糖了。

3.用10』稀釋度的細(xì)菌懸液分別涂布于LB、尿素培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后的結(jié)果，以下敘述

正確的是（）

A.LB培養(yǎng)基上未出現(xiàn)任何菌落

B.尿素培養(yǎng)基上出現(xiàn)的菌落數(shù)量和種類都多于LB培養(yǎng)基上的

C.尿素培養(yǎng)基上出現(xiàn)的菌落數(shù)量和種類都少于LB培養(yǎng)基上的

D.尿素培養(yǎng)基上是不可能出現(xiàn)菌落的

解析：選C。LB培養(yǎng)基為完全培養(yǎng)基，會(huì)出現(xiàn)大量菌落。尿素培養(yǎng)基上只有能以尿素做

氮源的微生物能存活，因此其上的菌落數(shù)量和種類都將會(huì)減少。尿素培養(yǎng)基上出現(xiàn)的菌落就

是能利用尿素的那些微生物菌落。

4.在做分離分解尿素的細(xì)菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，A同學(xué)從對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為的培養(yǎng)基上篩選出大

約150個(gè)菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約50個(gè)菌落。A同學(xué)的結(jié)果產(chǎn)生原因可能有（）

①由于土樣不同②由于培養(yǎng)基污染③由于操作失誤④沒(méi)有設(shè)置對(duì)照

A.①②③B.②③④

C.①③④D.①②④

解析：選A。該同學(xué)可能取的土樣不同，可取其他同學(xué)的土樣進(jìn)行培養(yǎng)，同時(shí)將未接種

的培養(yǎng)基同時(shí)培養(yǎng)，如果結(jié)果不是大約50個(gè)菌落，可能是培養(yǎng)基污染或操作有誤；如果結(jié)

果和其他同學(xué)數(shù)據(jù)相同，且未接種的培養(yǎng)基沒(méi)有菌落生成，說(shuō)明是土樣不同。

5.能合成胭酶的微生物所需的碳源和氮源分別是（）

A.二氧化碳和氮?dú)釨.葡萄糖和氨

C.二氧化碳和尿素D.葡萄糖和尿素

解析：選D。能合成胭酶的微生物主要是分解尿素的細(xì)菌，其碳源為葡萄糖，氮源為尿

素。

6.某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為的培養(yǎng)基中測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均值為234,那么每克樣

品中的菌落數(shù)是（涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.1mL）（）

A.2.34X108B.2.34X109

C.234D.23.4

解析：選B。每克樣品中的菌落數(shù)=（C+中XM=（234+0.1）X106=2.34X101

7.可以鑒定出分解尿素的細(xì)菌的方法是（）

A.以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑

B.以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入二苯胺試劑

C.以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入蘇丹III試劑

D.以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入雙縮JR試劑

解析：選A。酚紅指示劑是靈敏性高的堿性指示劑，分解尿素的細(xì)菌合成的麻酶將尿素

分解成氨，使pH升高，使酚紅指示劑變紅。

8.進(jìn)行系列稀釋時(shí)，按怎樣的順序進(jìn)行（）

A.稀釋倍數(shù)遞增B.稀釋倍數(shù)遞減

C.不論稀釋度大小D.A、B兩者都可

解析：選A。將菌液進(jìn)行系列梯度稀釋，在稀釋倍數(shù)足夠高的菌液里，聚集在一起的微

生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。

9.有關(guān)倒平板的操作錯(cuò)誤的是（）

A.將滅過(guò)菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上

B.使打開的錐形瓶瓶口迅速通過(guò)火焰

C.將培養(yǎng)皿打開，培養(yǎng)皿蓋倒放在桌子上

D.等待平板冷卻凝固后需要倒過(guò)來(lái)放置

解析：選C。在倒平板時(shí)，左手將皿蓋打開一條縫隙，不能將培養(yǎng)皿完全打開，以免雜

菌污染。

10.將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基都放入37℃恒溫箱的目的是（）

A.對(duì)比觀察培養(yǎng)基有沒(méi)有被微生物利用

B.對(duì)比分析培養(yǎng)基上是否生有雜菌

C.沒(méi)必要放入未接種的培養(yǎng)基

D.為了下次接種時(shí)再使用

解析：選B。將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基都放入37℃恒溫箱的目的是檢

測(cè)培養(yǎng)基是否被雜菌污染，即制備是否合格。

1L如圖為“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)中樣品稀釋示意圖。據(jù)圖分析

正確的是（）

—a168個(gè)菌落

f175個(gè)菌落

-167個(gè)菌落

A.3號(hào)試管的稀釋倍數(shù)為IO,倍

B.4號(hào)試管中稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)得到的菌落平均數(shù)恰好為5號(hào)試管的10倍

C.5號(hào)試管的結(jié)果表明每克土壤中的菌株數(shù)為1.7X109個(gè)

D.該實(shí)驗(yàn)方法統(tǒng)計(jì)得到的結(jié)果往往會(huì)比實(shí)際活菌數(shù)目要高

答案：C

12.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法是（）

①涂布平板法②重量法③直接計(jì)數(shù)法④比濁法⑤生理指標(biāo)法⑥膜過(guò)濾法

A.①②③⑥B.③④⑤⑥

C.②③④⑥D(zhuǎn).①③④⑥

解析：選D。微生物計(jì)數(shù)法主要有顯微鏡直接計(jì)數(shù)法、平板菌落計(jì)數(shù)法、光電比濁法、

最大可能數(shù)（MPN）法、膜過(guò)濾法等。

13.分離以尿素為氮源的細(xì)菌和分離大腸桿菌都使用了LB培養(yǎng)基，其成分（）

A.前者含瓊脂，后者不含瓊脂和瓊脂糖

B.兩者都含有瓊脂

C.前者含有瓊脂糖，后者不含瓊脂糖但含瓊脂

D.兩者都不含瓊脂和瓊脂糖

解析：選C。瓊脂和瓊脂糖都起凝固劑的作用，用于制備固體培養(yǎng)基。但瓊脂為混合物,

含少量含氮化合物，瓊脂加以純化，去除含氮化合物就成為瓊脂糖。分離大腸桿菌和含麻酶

的細(xì)菌用的都是固體培養(yǎng)基，因此都必須含有凝固劑：瓊脂或瓊脂糖。但是，由于瓊脂為混

合物，其中含一定量的含氮化合物，因此不能用于分離以尿素為氮源的細(xì)菌。瓊脂糖為瓊脂

的純化物，不含含氮化合物，可用于分離以尿素為氮源的細(xì)菌。

14.下列說(shuō)法不正確的是（）

A.科學(xué)家從70?80℃熱泉中分離得到耐高溫的看利NA聚合酶

B.統(tǒng)計(jì)某一稀釋度的5個(gè)平板的菌落數(shù)依次為此、M2、M3、M八Ms,以Ms作為該樣品菌

落數(shù)的估計(jì)值

C.設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)

結(jié)果的可信度

D.同其他生物環(huán)境相比，土壤中的微生物數(shù)量最大，種類最多

解析：選B。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)應(yīng)注意選擇菌落數(shù)在30?300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，且至少涂布3

個(gè)平板作為重復(fù)組，重復(fù)組的結(jié)果不能相差太多，然后取平均值進(jìn)行計(jì)算。

15.通過(guò)選擇培養(yǎng)基可以從混雜的微生物群體中分離出所需的微生物。在缺乏氮源的培

養(yǎng)基上大部分微生物無(wú)法生長(zhǎng)；在培養(yǎng)基中加入青霉素可以抑制細(xì)菌和放線菌；在培養(yǎng)基中

加入10%的酚類可以抑制細(xì)菌和霉菌。利用上述方法不能從混雜的微生物群體中分離出

（）

A.大腸桿菌B.霉菌

C.放線菌D.固氮細(xì)菌

解析：選A。缺乏氮源的培養(yǎng)基可以選擇出固氮細(xì)菌；在培養(yǎng)基中加入青霉素，可以選

擇出霉菌；在培養(yǎng)基中加入10%的酚類可以選擇出放線菌。

16.在農(nóng)田土壤的表層自生固氮菌較多。將用表層土制成的稀泥漿接種到特制的培養(yǎng)基

上培養(yǎng)，可將自生固氮菌與其他細(xì)菌分開，對(duì)培養(yǎng)基的要求是（）

①加抗生素②不加抗生素③加氮素④不加氮素⑤加葡萄糖⑥不加葡萄糖

⑦37°C恒溫箱中培養(yǎng)⑧28?30℃溫度下培養(yǎng)

A.①③⑤⑦B.②④⑥⑧

C.②④⑤⑧D.①④⑥⑦

解析：選C。自生固氮菌生長(zhǎng)繁殖的適宜溫度是28?30℃,能夠?qū)o(wú)機(jī)氮源合成有機(jī)

氮，不需要加氮源。細(xì)菌對(duì)抗生素敏感。固氮菌是異養(yǎng)生物，需要加葡萄糖。

17.能夠測(cè)定樣品活菌數(shù)的方法是（）

A.稀釋涂布平板法B.直接計(jì)數(shù)法

C.重量法D.比濁法

解析：選A。利用稀釋涂布平板法能夠在不影響生活的情況下將細(xì)菌個(gè)體從固體培養(yǎng)基

上分離出來(lái)，并可以繁殖形成菌落，可根據(jù)菌落數(shù)測(cè)定出樣品活菌數(shù)。

18.在做土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)時(shí)，甲組實(shí)驗(yàn)用氮源只含尿素的培養(yǎng)

基，乙組實(shí)驗(yàn)用氮源除尿素外還含硝酸鹽的培養(yǎng)基，其他成分都相同，在相同條件下操作，

培養(yǎng)與觀察，則乙組實(shí)驗(yàn)屬于（）

A.空白對(duì)照B.標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照

C.相互對(duì)照D.條件對(duì)照

解析：選D。乙組和甲組實(shí)驗(yàn)僅是培養(yǎng)條件不同，所以為條件對(duì)照。

19.下列是關(guān)于“檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)”實(shí)驗(yàn)操作的敘述，其中錯(cuò)誤的是（）

A.用蒸儲(chǔ)水配制牛肉膏蛋白腺培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板

B.取10'、1。5、1。6倍的土壤稀釋液和無(wú)菌水各0.1mL,分別涂布于各組平板上

C.將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組平板倒置，37℃恒溫培養(yǎng)24?48小時(shí)

D.確定對(duì)照組無(wú)菌后，選擇菌落數(shù)在300以上的實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)

解析：選D。選擇菌落數(shù)在30?300的一組平板為代表進(jìn)行計(jì)數(shù)，所以D不對(duì)。

20.用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為IO,的培養(yǎng)基

中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確的是（）

A.涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230

B.涂布了兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是215和260,取平均值238

C.涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、240和250,取平均值163

D.涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、240和250,取平均值233

解析：選D。在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要涂布至少3個(gè)平板，作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的

說(shuō)服力與準(zhǔn)確性，所以A、B不正確。C項(xiàng)雖涂布了3個(gè)平板，但是，其中1個(gè)平板的計(jì)數(shù)

結(jié)果與另兩個(gè)相差太遠(yuǎn)，說(shuō)明在操作過(guò)程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，因此，不能簡(jiǎn)單地將3個(gè)平板

的計(jì)數(shù)值用來(lái)求平均值。

二、非選擇題

21.某些土壤細(xì)菌可將尿素分解成CO?和N%,供植物吸收和利用。回答下列問(wèn)題：

（1）有些細(xì)菌能分解尿素，有些細(xì)菌則不能，原因是前者能產(chǎn)生__________________。

能分解尿素的細(xì)菌不能以尿素的分解產(chǎn)物CO?作為碳源，原因是

但可用葡萄糖作為碳源，進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是

（答出兩點(diǎn)即可）。

（2）為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，在配制培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)選擇（填“尿

素”“陽(yáng)NOs”或“尿素+NH4N03"）作為氮源，不選擇其他兩組的原因是

⑶用來(lái)篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有KH2PO,和Na2HP04,其作用有

（答出兩點(diǎn)即可）。

解析：（1）土壤中的某些細(xì)菌之所以能夠分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡墚a(chǎn)生服酶。尿素分解

菌是異養(yǎng)生物，不能利用C0?來(lái)合成有機(jī)物，必須利用現(xiàn)成的有機(jī)物（如葡萄糖）作為碳源；

葡萄糖通過(guò)呼吸作用被分解時(shí)，能為細(xì)胞生命活動(dòng)提供能量，同時(shí)，葡萄糖還可以轉(zhuǎn)化成脂

肪、某些氨基酸等物質(zhì)，所以進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄糖能為其他有機(jī)物的合成提供原料。（2）

選擇培養(yǎng)基是只允許特定種類的微生物(目的微生物)生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物

生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。本實(shí)驗(yàn)的目的菌是可分解尿素的細(xì)菌，因此，配制的培養(yǎng)基應(yīng)只允許尿素分

解菌生長(zhǎng)，NHM)3可以作為所有細(xì)菌的氮源，培養(yǎng)基中如含有NHN)3,將不能起到篩選作用。

(3)KH2P0」和N&HPO”能為細(xì)菌生長(zhǎng)提供鉀鹽、鈉鹽和磷酸鹽，而壓P07/HP0廠可以使培養(yǎng)基中

pH保持相對(duì)穩(wěn)定。

答案：(1)麻酶分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)生物，不能利用C02來(lái)合成有機(jī)物為細(xì)胞生

命活動(dòng)提供能量，為其他有機(jī)物的合成提供原料

(2)尿素其他兩組都含有NH4N03,能分解尿素的細(xì)菌和不能分解尿素的細(xì)菌都能利用

NH4N03,不能起到篩選作用

(3)為細(xì)菌生長(zhǎng)提供無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)，作為緩沖劑保持細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中pH穩(wěn)定

22.某化工廠的污水池中，含有一種有害的、難于降解的有機(jī)化合物A。研究人員用化

合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基，成功地篩選到能高效降解化合物A的細(xì)

菌(目的菌)。實(shí)驗(yàn)的主要步驟如圖所示。請(qǐng)分析回答問(wèn)題：

污水池中振蕩培養(yǎng)若干天后，測(cè)接種

定各瓶中花合物A的含量

污泥樣品固體

|初選培養(yǎng)基

S-亨

重復(fù)多次，直至獲得目的菌

(1)培養(yǎng)基中加入化合物A的目的是篩選,這種培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基。

(2)“目的菌”生長(zhǎng)所需的氮源和碳源是來(lái)自培養(yǎng)基中的，實(shí)驗(yàn)需要振蕩培養(yǎng),

由此推測(cè)“目的菌”的代謝類型是o

(3)培養(yǎng)若干天后，應(yīng)選擇培養(yǎng)瓶中化合物A含量_______的培養(yǎng)液，接入新的培養(yǎng)液

中連續(xù)培養(yǎng)，使“目的菌”的數(shù)量________o

(4)轉(zhuǎn)為固體培養(yǎng)時(shí)，常采用的方法接種，獲得單菌落后繼續(xù)篩選。

(5)若研究“目的菌”的生長(zhǎng)規(guī)律，將單個(gè)菌落進(jìn)行液體培養(yǎng)，可采用的方法

進(jìn)行計(jì)數(shù)，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，以為縱坐標(biāo)，繪制生長(zhǎng)曲線。

(6)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用過(guò)的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行處理后，才能倒掉。

解析：加入化合物A的培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基，選擇培養(yǎng)目的菌。由于化合物A為有機(jī)

物，且要振蕩，說(shuō)明目的菌為異養(yǎng)需氧型?！澳康木鄙L(zhǎng)繁殖過(guò)程中要不斷消耗營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，

培養(yǎng)若干天后，應(yīng)選擇培養(yǎng)瓶中化合物A含量減少的培養(yǎng)液，接入新的培養(yǎng)液中連續(xù)培養(yǎng)，

使“目的菌”的數(shù)量增加。轉(zhuǎn)為固體培養(yǎng)時(shí)，常采用劃線的方法接種，獲得單菌落后繼續(xù)篩

選。若研究“目的菌”的生長(zhǎng)規(guī)律，將單個(gè)菌落進(jìn)行液體培養(yǎng)，可采用定期取樣的方法進(jìn)行

計(jì)數(shù)，繪制生長(zhǎng)曲線應(yīng)以時(shí)間為橫坐標(biāo)，以細(xì)菌數(shù)目的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后要對(duì)培養(yǎng)

基進(jìn)行滅菌，以免污染環(huán)境。

答案：(1)目的菌選擇

(2)化合物A異養(yǎng)需氧型

(3)減少增加

⑷劃線

(5)定期取樣細(xì)菌數(shù)目的對(duì)數(shù)

(6)滅菌

23.土壤中的微生物種類和數(shù)量繁多，同學(xué)們?cè)噲D探究土壤中微生物對(duì)尿素是否有分解

作用，設(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn)，并成功篩選到能高效降解尿素的細(xì)菌(目的菌)。培養(yǎng)基成分如表所

示，實(shí)驗(yàn)步驟如圖所示。請(qǐng)分析回答：

土壤

、稀釋倍數(shù)為1產(chǎn)~10,的試管,

接種

.....

含尿翥培養(yǎng)基

KH2P。41.4g

Na2HP042.1g

MgS04?7H200.2g

葡萄糖10g

尿素1g

瓊脂糖15g

將上述物質(zhì)溶解后，用蒸儲(chǔ)水定容到1000mL

(1)培養(yǎng)基中加入尿素的目的是篩選，這種培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基。

(2)“目的菌”生長(zhǎng)所需的氮源和碳源分別來(lái)自培養(yǎng)基中的和，實(shí)驗(yàn)

需要振蕩培養(yǎng)，原因是。

(3)圖中將細(xì)菌轉(zhuǎn)到固體培養(yǎng)基上時(shí)，常采用的方法接種，獲得單菌落后繼續(xù)

篩選。

(4)下列材料或用具：①培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿，②玻棒、試管、錐形瓶和吸管,

③實(shí)驗(yàn)操作者的雙手。其中需要滅菌的是：;需要消毒的是：o(填序號(hào))

解析：培養(yǎng)基中添加尿素為氮源，目的是篩選分解尿素的微生物，這種培養(yǎng)基從功能上

來(lái)說(shuō)，屬于選擇培養(yǎng)基；該培養(yǎng)基的氮源為尿素，碳源為葡萄糖。培養(yǎng)過(guò)程中震蕩的目的是

增加培養(yǎng)液中的氧氣，說(shuō)明尿素分解菌為需氧型微生物；將菌液接種到固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，

一般要采用稀釋涂布平板法或平板劃線法;培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿要進(jìn)行高壓蒸汽滅

菌，玻棒、試管、錐形瓶和吸管要用干熱滅菌，實(shí)驗(yàn)操作者的雙手用酒精消毒。

答案：(1)目的菌選擇

(2)尿素葡萄糖為目的菌提供氧氣

(3)涂布平板(劃線)

⑷①②③

24.幽門螺桿菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性潰瘍的主要致病因素。在患者體內(nèi)采集

樣本并制成菌液后，進(jìn)行分離培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)基本步驟如下：

配制培養(yǎng)基|一|滅菌、倒的一區(qū)一|培養(yǎng)|一國(guó)

請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

(1)在配制培養(yǎng)基時(shí)，要加入尿素和酚紅指示劑，這是因?yàn)镠p含有,它能以尿

素作為氮源；若有Hp,則菌落周圍會(huì)出現(xiàn)_______色環(huán)帶。

(2)下列對(duì)尿素溶液進(jìn)行滅菌的最適方法是