DB42∕T 2242-2024 水產(chǎn)品中羧甲基賴氨酸的測(cè)定液相色譜法

DB42/T2242—2024水產(chǎn)品中羧甲基賴氨酸的測(cè)定液相色譜法湖北省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I前言 III 1 13術(shù)語(yǔ)和定義 14原理 1 1 2 3 39精密度 4 5附錄A(規(guī)范性)水產(chǎn)品的試樣制備 6附錄B(資料性)羧甲基賴氨酸衍生物高效液相色譜圖 7本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定1水產(chǎn)品中羧甲基賴氨酸的測(cè)定液相色譜法5.1.1三氯甲烷(CHC13,CAS號(hào)：67-66-3):分析純。5.1.3鹽酸(HCl,CAS號(hào)：7647-01-0):分析純。5.1.4氫氧化鈉(NaOH,CAS號(hào)：1310-73-2):分析純。5.1.5磷酸二氫鈉(NaH2PO4,CAS號(hào)：7558-80-7):分析純。5.1.6硼氫化鈉(NaBH4,CAS號(hào)：16940-66-2):分析純。5.1.7鄰苯二甲醛(C8H602,CAS號(hào)：643-79-8):分析純。5.1.83-巰基丙酸(C3H602S,CAS號(hào)：107-5.1.9甲醇(CH30H,CAS號(hào)：67-56-1):色譜純。5.1.10乙腈(CH3CN,CAS號(hào)：75-05-8):色譜純。25.1.11甲酸(HCOOH,CAS號(hào)：64-18-6)5.1.12硼酸(H3B03,CAS號(hào)：11113-50-1):分析純。5.1.14水(H20,CAS號(hào)：7732-18-5):為符合GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。5.2.16mol/L鹽酸溶液：取50mL鹽酸(見(jiàn)5.1.3),用水溶解并定容至100mL。5.2.20.1mol/L鹽酸溶液：取1.67mL鹽酸(見(jiàn)5.2.1),用水溶解并定容至100mL。5.2.30.1mol/L氫氧化鈉溶液：稱取2.00g氫氧化鈉(見(jiàn)5.1.4),用水溶解并定容至500mL。5.2.40.01mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.8):稱取0.12g磷酸二氫鈉(見(jiàn)5.1.5),加水溶解并稀釋至100mL,用0.1moL/L的氫氧化鈉(見(jiàn)5.2.3)調(diào)pH至7.8。5.2.50.1mol/L硼酸鈉緩沖液(pH10.2):稱取0.49g硼酸(見(jiàn)5.1.12)和0.19g十水合四硼酸鈉(見(jiàn)5.1.13),用水溶解并定容至100mL,用0.1moL/L氫氧化鈉溶液(見(jiàn)5.2.3)調(diào)pH至10.2。5.2.62mol/L硼氫化鈉溶液：稱取7.57g硼氫化鈉(見(jiàn)5.1.6),用0.1mol/L氫氧化鈉溶液(見(jiàn)5.2.3)溶解并定容至100mL。5.2.7衍生化試劑：取80mg鄰苯二甲醛(見(jiàn)5.1.7),加入7.0mL0.1mol/L硼酸鈉緩沖溶液(見(jiàn)5.2.8丙酮-三氯甲烷溶液(3+1,體積比):取300mL丙酮(見(jiàn)5.1.2)和100mL三5.2.9水-乙腈-甲醇溶液(10+45+45,體積比):取450mL乙腈(見(jiàn)5.1.10)、450mL甲醇(見(jiàn)5.1.9)5.2.10甲醇-0.1%甲酸水溶液：取500mL甲醇(見(jiàn)5.1.9),加入0.5mL甲酸(見(jiàn)5.1.11),混勻。5.3標(biāo)準(zhǔn)品5.4.2羧甲基賴氨酸標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(1.0mg/L):準(zhǔn)確量取羧甲基賴氨酸5.5材料3DB42/T2242—20246.7烘箱(可控溫)。在蛋白沉淀中加入1.6mL硼酸鈉緩沖液(見(jiàn)5.2.5)、400μL硼氫化鈉溶液(見(jiàn)5.2.6),靜置8h。8.1.4凈化中，氮吹至干后用1mL0.1mol/L鹽酸溶液(見(jiàn)5.2.2)復(fù)溶，待衍生。4DB42/T2242—20248.3.2流動(dòng)相：A,0.01mol/L的磷酸鹽緩沖溶液(見(jiàn)5.2.4);B,水-乙腈-甲醇溶液(見(jiàn)5.2.9),梯度洗脫條件見(jiàn)表1。8.3.3流速：1.0mL/min。8.3.4柱溫：30℃。8.3.5熒光檢測(cè)器：激發(fā)波長(zhǎng)340nm,發(fā)射波長(zhǎng)450nm。表1梯度洗脫參考條件時(shí)間/min02200228.4定量測(cè)定在上述色譜工作條件下，標(biāo)準(zhǔn)工作溶液與試樣的衍生物交替進(jìn)樣，采用標(biāo)準(zhǔn)工作溶液?jiǎn)吸c(diǎn)或多點(diǎn)校正，外標(biāo)法定量。試樣溶液中待測(cè)物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器測(cè)定的線性范圍內(nèi)，當(dāng)試樣的上機(jī)液濃度超過(guò)線性范圍時(shí)，需根據(jù)測(cè)定濃度，稀釋后進(jìn)行重新測(cè)定。典型的羧甲基賴氨酸衍生物的高效液相色譜圖參見(jiàn)附錄B。8.5數(shù)據(jù)處理試樣中羧甲基賴氨酸的含量w,以質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示，單位為毫克每千克(mg/kg),按公式(1)計(jì)算。C標(biāo)準(zhǔn)溶液中羧甲基賴氨酸衍生物的濃度，單位為毫克每升(mg/L); 試樣溶液中羧甲基賴氨酸衍生物的峰面積：A標(biāo)準(zhǔn)溶液中羧甲基賴氨酸衍生物的峰面積；V水解后試樣溶液的體積，單位為毫升(mL);V分取水解后試樣用于固相萃取的溶液體積，單位為毫升(mL);V?——試樣溶液的復(fù)溶體積，單位為毫升(mL);m——樣品稱樣量，單位為克(g);以兩個(gè)平行樣品測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值報(bào)告結(jié)果，結(jié)果保留2位有效數(shù)字。含量超過(guò)1mg/kg時(shí)，保留3位有效數(shù)字。9精密度在重復(fù)條