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文檔簡介

RNA電泳理想結(jié)果RNA電泳理想結(jié)果實(shí)驗(yàn)六PCR反應(yīng)

PCR的過程：高溫變性：將反應(yīng)體系置于高溫下變性，使雙鏈DNA解鏈為兩單鏈一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

了解PCR的基本原理，掌握PCR的基本操作技術(shù)。二、實(shí)驗(yàn)原理PCR技術(shù)是通過模擬體內(nèi)DNA復(fù)制的方式，在體外選擇性地將DNA的某個(gè)特殊區(qū)域擴(kuò)增出來的技術(shù)。低溫退火：引物與模板鏈結(jié)合，形成部分雙鏈DNA中溫延伸：TaqDNA聚合酶使引物從5′端向3′端延伸，4種dNTP摻入合成新的DNA互補(bǔ)鏈反復(fù)進(jìn)行這種變性、退火和聚合反應(yīng)循環(huán)，可使兩端引物限定范圍內(nèi)的DNA序列以指數(shù)形式擴(kuò)增。五、實(shí)驗(yàn)步驟1、PCR反應(yīng)混合液的配制(50μl)10xPCRbuffer5μldNTPmixture4μl前向引物P12μl反向引物P22μl模板DNA0.1μlrTaq酶0.5μl

所有試劑按量仔細(xì)添加后，輕輕混勻，稍離心后即可，為了防止反應(yīng)混合液蒸發(fā)，最后添加20μl礦物油。

去離子水36.4μl2、PCR儀的參數(shù)設(shè)置

94℃4min94℃30sec62℃30sec72℃20sec72℃5min3、瓊脂糖凝膠電泳檢測

40cycles

反應(yīng)結(jié)束后，取5μlPCR產(chǎn)品，加入1μl6xloadingbuffer，混勻后點(diǎn)樣，電泳15m

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