DB23T 3733-2024紅松無性系SSR鑒別技術(shù)規(guī)程

DB232024-8-30發(fā)布黑龍江省市場監(jiān)督管理局發(fā)布請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件起草單位：東北林業(yè)大學(xué)、佳木斯市孟家崗林場、葦河林業(yè)局青山林木種子園、寧安市渤海林木種子園、五常市寶龍店種子林場、鶴崗市林木良種本文件主要起草人：張含國、閆平玉、張磊、孫國飛、潘鳳剛、李金泉、石寶英、胡振宇、曹振宇、紅松無性系SSR鑒別技術(shù)規(guī)程試劑、溶液配制、操作程序、數(shù)據(jù)記錄與統(tǒng)計、判定規(guī)則及檔案管理下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。dNTP：deoxy-ribonucleosidetriphosphate脫氧核糖核苷三磷酸。PCR擴增儀；電泳儀（具有恒電壓、恒電流功能垂直電泳槽及配套的制膠附件；水平電泳槽及配十六烷基三乙基溴化銨；三氯甲烷；異丙醇；異戊醇；乙二胺四乙酸二鈉二水合物；三羥甲基氨基甲標準；核酸染色劑；去離子甲酰胺；溴酚藍；二苯甲青；甲叉雙丙烯酰胺；丙烯酰胺；硼酸；無水乙醇；0.5mol/LHCI溶液：25mL濃鹽酸（36%~38%加水定容至500mL。送檢樣品宜為一年生針葉，-80℃超低溫使用CTAB提取法，或適合SSR指紋技術(shù)的商業(yè)試劑盒進行DNA提取。瓊脂糖凝膠（1%）電泳檢測DNA質(zhì)量并進行濃度測定，稀釋至20ng/μL充分溶解后備用。選擇使用核心引物進行檢測，核心引物信息見附錄A.1。當(dāng)檢測出不同無性系差異位點數(shù)小于2時，選擇使用補充引物進行檢測，補充引物信息見附錄8.4.1.3灌膠拔去梳子后，使用移液器吹吸點樣孔，清除氣泡和雜質(zhì)，每一個加樣孔點入1μL混合有加樣緩沖液8.4.1.5銀染9數(shù)據(jù)記錄與統(tǒng)計9.1數(shù)據(jù)記錄將每個擴增位點的等位變異片段大小進行比較，確定樣品在該位點的等位變異；純合位點的基因型數(shù)9.2數(shù)據(jù)統(tǒng)計對送檢樣品進行分析時，直接進行無性系之間的對比，如果送檢樣品某個引物位點出現(xiàn)可見的異質(zhì)性位點上不同個體的基因型(或等位變異)及所占比例。當(dāng)對送檢樣品多個個體DNA進在各引物位點的基因型以及樣品在各引物位點的等位變異，并統(tǒng)計其在各引物位點的各種基因型（或等位差異位點數(shù)差異位點為應(yīng)建立技術(shù)檔案，內(nèi)容包括無性系來源、定植地點、無性系名稱、檢測日期、基因型數(shù)據(jù)、判定結(jié)果 小北湖007渤海省51渤海省69小北湖024小北湖007小北湖007小北湖024渤海省73渤海省92渤海省93渤海省008小北湖024渤海省51渤海省69渤海省71小北湖007小北