DB63∕T 2288-2024 青稞品種鑒定技術(shù)規(guī)程 SNP分子標(biāo)記法

DB63青海省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I李俊仁、包天忠、趙璨、王健斌、陳同睿、1青稞品種鑒定技術(shù)規(guī)程SNP分子標(biāo)記法本文件規(guī)定了青稞（HordeumvalgareL.var.nudumHook.f.）品種鑒定SNP分子標(biāo)記方法的術(shù)語和GB4404.1糧食作物種子第1GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)GB/T30988多酚類植物基因組DNA提取純2在實(shí)驗(yàn)室中從送檢樣品中分離出來的部分樣品，供檢驗(yàn)項(xiàng)4縮略語DNA：脫氧核糖核酸（DeoxyriboNucleicAcKASP：競爭性等位基因特異性PCR（KompetitiveAlPCR：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChainReacSNP：單核苷酸多態(tài)性（SingleNucleotidePoly9操作程序9.1樣品準(zhǔn)備按照GB/T3543.5的規(guī)定，送檢樣品質(zhì)量應(yīng)符合GB4404.1糧食作物種子第1部分：禾谷類中對大麥種子純度的要求。試驗(yàn)樣品的分樣應(yīng)符合GB發(fā)芽的籽粒數(shù)須大于等于50粒。植株長至三葉一心時(shí)，按單株采取葉片9.2DNA樣品制備備的DNA樣品數(shù)量須大于等于50個(gè)單株；單提、單檢。試驗(yàn)樣品DNA純度、濃度測試應(yīng)符合GB/T309883b)依試驗(yàn)樣品量，按照表1配制KASP基因分型混合液。配制前所有試劑均應(yīng)渦旋振5118c)使用微量移液器將9.3SNP分型操作流程2）中的KASe)KASP反應(yīng)在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀上進(jìn)行，程序設(shè)置見表2。1123再按照9.3SNP分型操作流程6）進(jìn)行熒光數(shù)據(jù)的讀取。45A.1主要儀器設(shè)備實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀、電子恒溫不銹鋼水浴鍋、電子天平（精度0.01g、0.0001g各一臺）、A.2主要試劑乙二胺四乙酸二納、三羥甲基氨基甲烷、鹽酸、氫氧化鈉、氯化鈉、十六烷基三甲基溴化銨、β-6溶液配制B.1.10.5mol/L乙二胺四乙酸二納鹽（EDTApH8.0）溶液定容至50ml。在103.4kPa（121℃)條件下滅B.1.21mol/L三羥甲基氨基甲烷鹽酸（Tris-HClpH8稱取6.06g的Tris，加40ml的超純水，充分溶解。用1.8mL~2.2mL的濃HCl（36%~38%）調(diào)節(jié)pH至8.0，定容至50ml。滅菌溫度和時(shí)間同B.1.依次加入十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）8g、氯化鈉32.7g、10mLTris（見B.1.2）和4mLEDTA溶液（pH8.0見B.1.1再加入超純水，充分溶解后，用超純水定容至400mL。滅菌溫度和時(shí)間同B.1.1，取10mL1mol/LTris-HCl溶液（pH8.0見B.1.2）和2mL0.5mol/LE（見B.1.1），加入超純水，混合均勻，定容至100ml。分裝后滅菌，滅菌溫度和時(shí)間同B.1.1，室溫保7ⅠⅠPrimer_Allele[HEX]:GTTGⅠPrimer_Common:CGCTGGCAGCTCCAGGⅠⅠPrimer_Allele[HEX]:ⅠⅠⅡPrimer_Allele[HEX]:2H_2ⅡPrimer_Common:TCGTGCACGCCAAGⅡ84H_2ⅡⅡⅡPrimer_Allele[HEX]:Ⅱ2H_3Ⅱ3H_3Ⅱ4H_3Ⅱ6H_3Ⅱ7H_3ⅡⅡⅡPrimer_Allele[HEX]:2H_5ⅡPrimer_Common:CCGAAGAGCTCGGCGTⅡ9ⅡPrimer_Common:CAGGAⅡPrimer_Common:TGCTGTCCAGTTTTC6H_5Ⅱ6H_6ⅡPrimer_Common:GAAGAAGCGGCCCAAGCAⅡPrimer_Common:GAAAGTCTTCGCAAAAAGTCCG1H_12H_12H_22H_32H_53H_13H_23H_34H_1TRCTMAKCTGGTTGARCYCAKGTGGTTKARCYCAKGTGGTTKTRCYCAKGTGRTCGARCYCAKCTGGTTKARCTCAKGTGRTTGTRCYCAKSYGGTTGTRCYMAKCCGRTTGTRCYMAKSTGGTTKTRYYCAKCCGGTTGTRCYCAKGTGGTCGARCYMAKGTGGTTKTRCYCAKCCGGYCGTRCTMAGCCGGCCGTRCYCAKCCGRCCGTRCTCAKCCGGTCKTRCTCAKCCGGTCGTACTMAKCTGGTTGTRCYMAKCCGRTTGTRCTCAKCTGGTTGARCYMAKCTGRYTGTACTCAGCTGRCTGTACTCAKCTGGTTG4H_24H_34H_45H_16H_16H_26H_36H_46H_56H_67H_17H_27H_3CARGGAGCYGGGKTCAGGRARCYGRRGTCAGGRAGCYGRGTTCAGGGAGCCGGGGTCAGGGARCYGRGTTCARGGARCYGRGKTCAGGGAGYYRGGTTCAGGGAGCCGGRTTCAGGGAGCYGGGKTCAGGGAGCYGRGKTCAGGGAGCYGRGTTCAGGRAGYYGGRGTCARGRAGCYGGGKTCARGGAGCYGRGGTCARGRARCYGGGKTCMGGGAGCYGGGGTCAGGGAGCYGRGKTCAGGGARTYGGGKTCAGGGAGC