DB34∕T 3737-2020 大豆品種耐旱性與耐熱性評價體系技術(shù)規(guī)程　

DB34/T3737—2020大豆品種耐旱性與耐熱性評價體系技術(shù)規(guī)程本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定工每盆裝土和沙8kg～9kg。播前用1%次氯酸鈉浸泡大豆種子1min～2min,純水沖洗3～5次，于2后的土壤含水量范圍為15.0%～20.0%,以形成有效的干旱脅迫效應(yīng)，對照土壤含水量控制在處理前按正常田間管理，于大豆始花期(R1期)每天上午10:00至下午16:00連續(xù)7天塑料大圍為40.0℃~45.0℃(通過升降塑料薄膜的覆蓋高度調(diào)控處理溫度),棚內(nèi)濕度控制在50.0%～75.0%利用鄰甲氧基苯酚(愈創(chuàng)木酚)顯色法檢測分析(參見附錄D)。大豆收獲期間，每種材料(處理和對照)考察10個單株的株高(cm)、單株莢數(shù)(個)、單株粒數(shù)(粒)、單株粒重(g)、百粒重(g)、籽粒飽滿度(飽滿/皺縮)等產(chǎn)量組分及性狀。36田間管理6.1在進(jìn)行大豆品種耐旱性與耐熱性鑒定期間，要及時防治病、蟲、草和鳥害，防止倒伏等不利情況6.2防止病蟲草害使用農(nóng)藥等藥品按GB/T8321(所有部分)的規(guī)定執(zhí)行。7耐旱性和耐熱性評價體系分級標(biāo)準(zhǔn)7.1耐旱性評價體系標(biāo)準(zhǔn)時運(yùn)用隸屬函數(shù)值對各主成分得分值進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，獲得一個大豆響應(yīng)干旱脅迫進(jìn)行聚類分析(SPSS19.0)。7.1.2大豆響應(yīng)干旱脅迫綜合值(D)按公式(1)計(jì)算：Pi——主成分分析中每個主成分的特征值。表1大豆抗旱性評價體系分級標(biāo)準(zhǔn)聚類分析結(jié)果抗旱性等級耐旱型IV級較耐旱型III級中間型II級較敏感型D<0.20(或植株枯死)I級敏感型7.2耐熱性評價體系標(biāo)準(zhǔn)7.2.1以花粉活力作為主要指標(biāo)，結(jié)合相關(guān)滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)、保護(hù)酶活性和產(chǎn)量組分等生理指主成分分析(SPSS19.0),同時運(yùn)用隸屬函數(shù)值對各主成分得分值進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，從而獲得一個大豆響47.2.2大豆響應(yīng)熱脅迫綜合值(H)按公式(2)計(jì)算：nnU(xi)——通過隸屬函數(shù)方法分析在主成Pi——主成分分析中每個主成分的特征值。表2大豆耐熱性評價體系分級標(biāo)準(zhǔn)聚類分析結(jié)果耐熱型IV級III級中間型II級I級敏感型5(資料性)將處理組和對照組葉片用去離子水沖洗2次，再用潔凈濾紙吸凈表面水分。用6mm～8mm打孔器避開主脈打取葉圓片(或切割成大小一致的葉塊),每組葉片打取葉圓片30片，分裝在3支潔凈的刻度試管中，每管放10片。在有葉片的各管中加入10mL的去離子水，并將大于試管口徑的塑真空泵抽氣10min(也可直接將葉圓片放入注射器內(nèi)，吸取而的去離子水，堵住注射器口進(jìn)行抽氣)上試管置室溫下保持1h,其間要多次搖動試管，或者將試管放在振蕩器中振蕩1h。1h后將各試管以殺死植物組織。取出試管后用自來水冷卻至室溫，并在室溫下平衡10min,搖勻，用電導(dǎo)儀測其終電導(dǎo)值(S?)。按公式(A.1)計(jì)算相對電導(dǎo)率：RC——相對電導(dǎo)率(%);6(資料性)相對含水量檢測分析首先對脅迫處理后與對照樣本葉片稱鮮重(葉片鮮重FW),之后將其放入盛水的培養(yǎng)皿中(水量占培養(yǎng)皿2/3),浸泡24h后用吸水紙將其葉面水擦干，稱其飽和鮮重(SFW),FW與SFW均在室溫下測定，溫度25℃,濕度60%～70%,之后將所有樣品放入烘箱，105℃殺青30min,再置于80℃烘干24h(烘干至恒重),冷卻至室溫后稱其干重(DW)。按公式(B.1)計(jì)算相對含水量：RWC(%)=(FW-DW)÷(SFW-DW)×100%…………(B.1)FW——葉片鮮重(g);SFW——飽和鮮重(g);7DB34/T3737(資料性)超氧化物歧化酶(SOD)活性按每克(葉片鮮重FW)大豆新鮮葉片加入3mL0.05mol/LpH7.8磷酸鈉緩沖液，加入少量石英砂，于冰浴中的研缽內(nèi)研磨成勻漿，定容至5mL刻度離心管中，于8500r/min(10000g)冷凍離心30min,上清液即為SOD酶粗提液。每個處理取8個洗凈干燥好的微燒杯編號，按計(jì)算好的量加入各試劑及酶液，反應(yīng)系統(tǒng)總體積為3mL。其中4-8號杯中磷酸鈉緩沖液量和酶液量可根據(jù)試驗(yàn)材料中酶液濃度及酶活力進(jìn)行調(diào)整(如酶液濃度大、活性強(qiáng)時，酶用量適當(dāng)減少)。各試劑全部加入后，充分混勻，取1號微燒杯置于暗處，作為空白對照，比色時調(diào)零用。其余7個微燒杯均放在溫度為25℃。光強(qiáng)為4500Lux的光照箱內(nèi)(安裝有3根20W的日光燈管)照光15min。然后立即遮光終止反應(yīng)。在560nm波長下以1號杯液調(diào)零，測定各杯液光密度并記錄結(jié)果。以2、3號杯液光密度的平均值作為抑制NBT光還原率100%,根據(jù)其他各杯液的光密度分別計(jì)算出不同酶液量的各反應(yīng)系統(tǒng)中抑制按公式(C.1)計(jì)算超氧化物歧化酶活性：A[U/(g(FW)/h)]=(V×1000×60)÷(B×W×t)…A——酶活力(酶活力單位：U/(g(FW)/h));V——酶提取液總體積(mL);B——一個酶活力單位的酶液量(uL);W——樣品鮮重(g);t——反應(yīng)時間(min);1000——換算系數(shù)，即1ml=1000uL;60——換算系數(shù)，即1h=60min。8取處理組與對照組大豆植株葉片1g(葉片鮮重FW),剪碎置于研缽中，加5mL0.1ml/LTris-HCl緩沖液(pH8.5),研磨成勻漿，以4000r/min離心5min,倒出上清液，必要時殘?jiān)儆?mL緩酶活性過高可稀釋),再加入反應(yīng)混合液3mL,立即開啟秒表記錄時間：而向另一比色杯中加人0.2P=過氧化物酶(POD)活性(U/(g·m0.01——Aa?om每下降0.01為1個酶活單位(U);t——反應(yīng)時間(min)。94000r/min,離心15min,上清液即為過氧化氫酶的粗酶液。分別取3支10mL試管中，其中2支為樣品測定管(S?,S?),1支為空白管(S?)(將酶液煮死),按順序分別加入0.2mL粗酶液、pH磷酸緩沖液1.5mL和