照片大二上分子醫(yī)學(xué)實驗

?？捎糜跇悠返闹苽洹⒓兌辱b定、分子量測定等。（AGEμg（TEMED）TEMED催化下，過硫酸銨可使丙烯酰胺單體的雙鍵SDSSDS和巰基乙醇后，巰基乙醇可使蛋白質(zhì)分子中的二硫鍵還原；SDS能使蛋白質(zhì)的非共價鍵（氫鍵、疏水鍵）SDS復(fù)合物。由于SDS帶有大量負(fù)電荷，當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合時，所帶的負(fù)電荷的量大大超過蛋白SDS與蛋白質(zhì)結(jié)合后，還引起了蛋白質(zhì)構(gòu)象的改變。蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物在水溶液中的SDS復(fù)合物的短軸長度都一樣，而長軸則隨蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量的大小成正比地變化。這樣的蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物在凝膠中的遷移蛋白轉(zhuǎn)膜組裝順序（三明治制作轉(zhuǎn)膜夾黑色面（負(fù)極）－（正極（1）SDS-12（1）SDS-12％分離膠濃度，10ml30%凝膠貯液10%SDS10%0.6空氣，是膠面平整30分鐘凝膠完全聚合，用滴管吸去分離膠膠面的水封層，并用無TEMED要在注膠前再加4.5％分離膠濃度，5ml 30%凝膠貯液10%SDS10%30%凝膠貯液10%SDS10%3.00.3TEMED的加入量，混勻后用細(xì)長頭的滴管將凝膠溶液加到以聚合10μl與“5×樣品溶解液”40μl混合（做兩份樣品100℃沸2~3min，取出冷至室溫。15～20mA,待樣品進入2小時。1小時。另一塊凝膠板中的凝膠用于轉(zhuǎn)膜。染色完畢，傾出染色液，加入脫色液。20～30min換一次脫色液，2～3次后可初步觀3張緩沖液浸濕的濾紙上，蓋上經(jīng)甲醇激活（15-30sec）PVDF膜（切多余的膜及紙，與凝膠一樣大?。?張緩沖液浸濕的濾紙，排氣泡。33用塑料夾夾緊，放入轉(zhuǎn)移電泳儀，電泳槽擱置冰上，恒壓1小時。 PVDFTBST1h牛血樣品樣品樣品樣品牛血在上圖中，X？（cm）marker到起始線之間的距離，L（cm）123、凝膠濃度的選擇：根據(jù)待測樣品估計的相對分子量，選擇凝膠濃度。Mr25000~2000005%的凝膠；Mr10000~70000的蛋白質(zhì)選用終15%的凝膠；在此范圍內(nèi)樣品的相對分子量的對數(shù)與遷移率呈直線關(guān)系。4SDS的作用下解離在上圖中，X？（cm）marker到起始線之間的距離，L（cm）123、凝膠濃度的選擇：根據(jù)待測樣品估計的相對分子量，選擇凝膠濃度。Mr25000~2000005%的凝膠；Mr10000~70000的蛋白質(zhì)選用終15%的凝膠；在此范圍內(nèi)樣品的相對分子量的對數(shù)與遷移率呈直線關(guān)系。4SDS的作用下解離Mr及分子中肽鏈