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DB34DB34/T2905—2017辣椒疫霉菌檢測鑒定方法MethodfordetectionandidentificationofPhytophthoracapsici2017-06-30發(fā)布2017-07-30實(shí)施安徽省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。1征及其所引致病害的癥狀參見附錄A。將上述某一種基礎(chǔ)培養(yǎng)基與去離子水按1:9比例稀釋，在121℃下高壓蒸汽滅菌20將某一種基礎(chǔ)培養(yǎng)基冷卻至50℃~60℃時(shí)，按每升培養(yǎng)基需青霉素50mg、五氯硝基苯50mg、2將新鮮病組織表面用自來水沖洗干凈，稍涼干，從病健交接部位將病組織塊，沿培養(yǎng)皿周緣直接置于選擇性培養(yǎng)基平板上，在培養(yǎng)箱中25℃~28℃條件下培養(yǎng)2d～3d，待觀察培養(yǎng)4d左右的菌落形態(tài)，并沿菌落邊緣挑取少量菌絲，置于顯微鏡下觀察菌絲的形態(tài)：如選取與取樣作物相同品種的健康植株或組織5株（個(gè)），先在接種部位用接種針扎幾個(gè)小孔，再切取經(jīng)純培養(yǎng)的分離物菌絲塊回接到創(chuàng)傷部位，也可用濃度為5×103個(gè)/mL的游動(dòng)孢子懸浮液接種，接種后均需用浸水棉球保濕2d～3d，在25℃~28℃的條件下培養(yǎng)5d左右，觀測是否發(fā)病、病害3以5’-GTCTTGTACCCTATCATGGCG-3’和5’-CGCCACAGCAGGAAAAGCATT-3’為特異性引物，每25μL經(jīng)形態(tài)學(xué)觀測，與對照菌株和附錄A描述的形態(tài)相似的分離物可初步確診為辣椒疫霉；經(jīng)PCR擴(kuò)增，能擴(kuò)增出與對照菌株相同的560bp單一明亮條帶4菌絲形態(tài)簡單，無隔、多核、多分枝，粗3μm～10μm。孢囊梗不規(guī)則分枝或傘形分枝，細(xì)長，），≥5μm，但也有部分孢子囊乳突較?。绘咦幽一繄A形或漸尖；孢μm，平均長度＞20μm；孢子囊成熟后直接萌發(fā)或釋放游動(dòng)孢子，球形或不規(guī)則形異宗配合，配對培養(yǎng)易產(chǎn)生大量球形藏卵器，直徑20μm為棍棒狀，少數(shù)為圓錐形。雄器球形或圓筒形，圍生，無色，（10μm～20μm）×（9μm～14μm）。其鑒別特征為：乳突明顯，脫落孢子囊具長51.將菌絲進(jìn)行低溫冷凍干燥處理(﹥24h保存在-20℃

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