分解纖維素的微生物的分離

分解纖維素的微生物的分離㈠纖維素與纖維素酶1.纖維素

纖維素是一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是含量最豐富的多糖類(lèi)物質(zhì)。一、基礎(chǔ)知識(shí)

植物的根、莖、葉等器官都含有大量的纖維素。其中棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物。

土壤中某些微生物能夠產(chǎn)生纖維素酶,把纖維素分解為葡萄糖，后再利用。

纖維素是地球上含量最豐富的多糖類(lèi)物質(zhì)，植物每年產(chǎn)生的纖維素超過(guò)70億噸，其中40%-60%能被土壤中能產(chǎn)生纖維素酶的微生物所利用，不會(huì)大量積累。

在草食性動(dòng)物等的消化道內(nèi)，也共生有分解纖維素的微生物，其原理也是產(chǎn)生纖維素酶而分解纖維素，而人沒(méi)有分解纖維素的能力。

人類(lèi)可應(yīng)用分解纖維素的微生物將秸稈等廢棄物轉(zhuǎn)變成酒精，用纖維素酶處理服裝面料等。2.纖維素酶

纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即C1酶(外切酶)、CX酶(內(nèi)切酶)和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。纖維二糖C1酶、Cx酶葡萄糖苷酶葡萄糖纖維素①取二支20mL的試管實(shí)驗(yàn)：纖維素酶分解纖維素的實(shí)驗(yàn)②各加入一張濾紙條③各加入pH4.8，物質(zhì)量為0.1mol/L的醋酸－醋酸鈉緩沖液11ml和10ml甲乙④在乙試管中加入1mL纖維素酶⑤兩支試管固定在錐形瓶中，放在140r/min的搖床上振蕩1h⑥結(jié)果：乙試管的濾紙條消失

討論：乙試管的濾紙條為什么會(huì)消失？甲試管的作用是什么？提示：本實(shí)驗(yàn)的自變量是纖維素酶的有無(wú)，自變量的操縱方法是：在一支試管中添加適量（1mL）的纖維素酶溶液，在另一支試管不添加纖維素酶，但需加入等量的緩沖液，不能加入蒸餾水，否則會(huì)影響溶液的pH。實(shí)驗(yàn)分析：P27的小實(shí)驗(yàn)是如何構(gòu)成對(duì)照的？剛果紅染色法

剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物，而不與纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。

（二）纖維素分解菌的篩選

當(dāng)我們?cè)诤欣w維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅時(shí)，剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅-纖維素的復(fù)合物就無(wú)法形成，培養(yǎng)基中就會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，這樣我們就可以通過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌。二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

請(qǐng)你根據(jù)實(shí)驗(yàn)流程圖和提供的三個(gè)資料以及“操作提示”，在思考有關(guān)問(wèn)題的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)出一個(gè)詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案。土壤取樣選擇培養(yǎng)梯度稀釋

將樣品涂布在鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上

篩選產(chǎn)生透明圈的菌落①分布環(huán)境1、土壤取樣：富含纖維素的環(huán)境中操作步驟

生物與環(huán)境的互相依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中纖維素分解菌的含量相對(duì)提高，因此從這種土壤中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境。②原因③實(shí)例：樹(shù)林中多年落葉形成的腐殖土，多年積累的枯枝敗葉等。④討論:如果找不到合適的環(huán)境，可以將濾紙埋在土壤中，將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認(rèn)為濾紙應(yīng)該埋在土壤中多深？

將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對(duì)集中，實(shí)際上是人工設(shè)置纖維素分解菌生存的適宜環(huán)境。一般應(yīng)將濾紙埋于深約10cm左右的土壤中。2、選擇培養(yǎng)

增加纖維素分解菌的濃度，以確保能夠從樣品中分離所需要的微生物。

①目的：②制備選擇培養(yǎng)基：③操作：

將土樣加入裝有30ml選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中，將錐形瓶固定在搖床上，在一定溫度下震蕩培養(yǎng)1～2天，直至培養(yǎng)液變渾濁。也可重復(fù)選擇培養(yǎng)。培養(yǎng)基成分分析培養(yǎng)基組成提供主要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)纖維素粉5g碳源（能源）NaNO31g氮源、無(wú)機(jī)鹽KCl0.5gNa2HPO4·7H2O1.2gKH2PO40.9gMgSO4·7H2O0.5g無(wú)機(jī)鹽酵母膏0.5g生長(zhǎng)因子、碳源、氮源水解酵素0.5g氮素、生長(zhǎng)因子溶解后，蒸餾水定容至1000mL水提示：自變量為培養(yǎng)基的種類(lèi)，即普通培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基?？捎门Ｈ飧嗟鞍纂伺囵B(yǎng)基與之對(duì)照,或者將纖維素改為葡萄糖。A、旁欄中的配方是液體培養(yǎng)基還是固體培養(yǎng)基？為什么？

是液體培養(yǎng)基，原因是配方中無(wú)凝固劑（瓊脂）B、這個(gè)培養(yǎng)基對(duì)微生物是否具有選擇作用？如果具有，是如何進(jìn)行選擇的？有選擇作用，本配方中纖維素作為主要碳源，只有能分解纖維素的微生物可以大量繁殖。C、你能否設(shè)計(jì)一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，說(shuō)明選擇培養(yǎng)基的作用

說(shuō)明：分析“纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基配方”可知，該配方中的酵母膏也能夠提供少量的碳源，因此其他微生物也能在該培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖。只不過(guò)，由于酵母膏的含量極少，因此，只有以纖維素為碳源的微生物才能大量繁殖。

在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮”的作用。為什么選擇培養(yǎng)能夠“濃縮”所需的微生物？比較項(xiàng)目分解尿素的細(xì)菌纖維素分解菌選擇培養(yǎng)基原理培養(yǎng)基類(lèi)型目的鑒定培養(yǎng)基原理現(xiàn)象方法將細(xì)菌涂布在只有尿素做氮源的選擇培養(yǎng)基上將細(xì)菌涂布在只有纖維素粉做碳源的選擇培養(yǎng)基上固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基篩選菌株選擇培養(yǎng)酚酞遇氨顯紅色剛果紅顯色法思考：本實(shí)驗(yàn)的流程與課題2中的實(shí)驗(yàn)流程有哪些異同？

本實(shí)驗(yàn)流程與課題2的流程的區(qū)別如下。課題2是將土樣制成的菌懸液直接涂布在以尿素為唯一氮源的選擇性培養(yǎng)基上，直接分離得到菌落。本課題通過(guò)選擇培養(yǎng)，使纖維素分解菌得到增殖后，再將菌液涂布在選擇培養(yǎng)基上。其他步驟基本一致。按照課題1的稀釋操作方法，將選擇培養(yǎng)后的培養(yǎng)基進(jìn)行等比稀釋101～107倍。3.梯度稀釋1011021031041051064.將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上（1）制備鑒別培養(yǎng)基:（2）涂布平板：將稀釋度為104～106的菌懸液各取0.1ml涂布到平板培養(yǎng)基上，30℃倒置培養(yǎng)。培養(yǎng)基組成提供的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)CMC-Na5~10g碳源酵母膏1g碳源、氮源、生長(zhǎng)因子KH2PO40.25g無(wú)機(jī)鹽土豆汁100mL碳源、生長(zhǎng)因子瓊脂15g凝固劑上述物質(zhì)溶解后，加蒸餾水定容至1000mL氫元素、氧元素鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基(水溶性羧甲基纖維素鈉)方法一：先

，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)。方法二：在

時(shí)就加入剛果紅。培養(yǎng)微生物倒平板5.剛果紅染色法

挑選產(chǎn)生透明圈的菌落，一般即為分解纖維素的菌落。這兩種方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)與不足？染色法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)方法一方法二顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用操作繁瑣剛果紅會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜操作簡(jiǎn)便不存在菌落混雜問(wèn)題有些微生物能降解色素，形成明顯的透明圈。從而形成假陽(yáng)性反應(yīng)比較項(xiàng)目分解尿素的細(xì)菌纖維素分解菌選擇培養(yǎng)原理培養(yǎng)基類(lèi)型目的鑒定培養(yǎng)基原理現(xiàn)象方法在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成了氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，pH升高。在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，如果pH升高指示劑會(huì)變紅剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶催化分解后紅色復(fù)合物無(wú)法形成，培養(yǎng)基上就會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈觀察菌落周?chē)欠裼兄沫h(huán)帶出現(xiàn)來(lái)鑒定尿素分解菌觀察菌落周?chē)欠癯霈F(xiàn)透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌脲酶檢測(cè)法剛果紅染色法方法一中NaCl溶液的作用？思考：

漂洗作用，洗去與纖維素結(jié)合不牢的剛果紅，以免出現(xiàn)的透明圈不夠清晰。用這方法可以判斷酶活力的大小，實(shí)際上剛果紅是結(jié)合到培養(yǎng)基的多糖底物，但分解纖維素的細(xì)菌可以產(chǎn)生纖維素酶，能分解這個(gè)多糖底物成為單糖，這樣剛果紅就不能結(jié)合上去了，氯化鈉溶液就可以使結(jié)合不牢的剛果紅洗去，這樣就留下大大小小的透明圈，大的透明圈當(dāng)然分解纖維素的能就強(qiáng)！

在產(chǎn)生明顯的透明圈的菌落，挑取并接種到纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基上，在300C－370C培養(yǎng)，可獲得純化培養(yǎng)。6、純化培養(yǎng)四、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)

1.培養(yǎng)基的制作是否合格以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落

對(duì)照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過(guò)程中沒(méi)有菌落生長(zhǎng)則說(shuō)明培養(yǎng)基制作合格。如果觀察到產(chǎn)生透明圈的菌落，則說(shuō)明可能獲得了分解纖維素的微生物。

2.分離的結(jié)果是否一致

由于在土壤中細(xì)菌的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于真菌和放線菌的數(shù)量，因此最容易分離得到的是細(xì)菌。但由于所取土樣的環(huán)境不同，不同同學(xué)也可能得到真菌和放線菌等不同的分離結(jié)果。

為了確定分離得到的是纖維素分解菌，還需要進(jìn)行_____________實(shí)驗(yàn)，纖維素酶的發(fā)酵方法有______發(fā)酵和______發(fā)酵。纖維素酶測(cè)定方法是對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素所產(chǎn)生的________含量進(jìn)行定量測(cè)定。發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶

液體

固體

葡萄糖

五、課題延伸分解纖維素的微生物的分離纖維素酶種類(lèi)、作用、催化活力剛果紅染色篩選原理實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)土壤取樣選擇培養(yǎng)涂布培養(yǎng)純化培養(yǎng)前置染色法后置染色法富含纖維素土壤增大分解菌含量染色鑒別分離出分解菌課堂總結(jié)高考真題(2011新課標(biāo)全國(guó)I卷)有些細(xì)菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同學(xué)欲從污染的土壤中篩選出高效降解原油的菌株。回答問(wèn)題：⑴在篩選過(guò)程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以

為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，從功能上講，該培養(yǎng)基屬于

培養(yǎng)基。⑵純化菌種時(shí)，為了得到單菌落，常采用的接種方法有兩種，即

和

。

⑶為了篩選出高效菌株，可比較單菌落周?chē)该魅Φ拇笮。该魅Υ笳f(shuō)明該菌株的降解能力

。⑷通常情況下，在微生物培養(yǎng)過(guò)程中實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、

和

。無(wú)菌技術(shù)要求試驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈

附近進(jìn)行，以避免周?chē)h(huán)境中微生物的污染。原油

選擇平板劃線法

稀釋涂布平板法強(qiáng)干熱滅菌高壓蒸汽滅菌火焰(2016新課標(biāo)全國(guó)I卷)[生物——選修1：生物技術(shù)實(shí)踐]（15分）

空氣中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小組欲用平板收集教室空氣中的微生物，以了解教室內(nèi)不同高度空氣中微生物的分布情況。實(shí)驗(yàn)步驟如下：①配置培養(yǎng)基（成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O）;

②制作無(wú)菌平板；

③設(shè)置空白對(duì)照組和若干實(shí)驗(yàn)組，進(jìn)行相關(guān)操作；

④將各組平板置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)一段時(shí)間，統(tǒng)計(jì)各組平板上菌落的平均數(shù)。

回答下列問(wèn)題:

（1）該培養(yǎng)基中微生物所需的氮來(lái)源于_________________。若要完成步驟②，該培養(yǎng)基中的成分X通常是_________________。

牛肉膏、蛋白胨瓊脂

①配置培養(yǎng)基（成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O）;

②制作無(wú)菌平板；

③設(shè)置空白對(duì)照組和若干實(shí)驗(yàn)組，進(jìn)行相關(guān)操作；

④將各組平板置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)一段時(shí)間，統(tǒng)計(jì)各組平板上菌落的平均數(shù)。

回答下列問(wèn)題:

（1）該培養(yǎng)基中微生物所需的氮來(lái)源于_________________。若要完成步驟②，該培養(yǎng)基中的成分X通常是_________________。

（2）步驟③中，實(shí)驗(yàn)組的操作是_________________。

（3）若在某次調(diào)查中，某一實(shí)驗(yàn)組平板上菌落平均數(shù)為36個(gè)/平板，而空白對(duì)照組的一個(gè)平板上出現(xiàn)了6個(gè)菌落，這種結(jié)果說(shuō)明在此次調(diào)查中出現(xiàn)了_____________現(xiàn)象。若將30（即36-6）個(gè)/平板作為本組菌落數(shù)的平均值，該做法_______________（填“正確”或“不正確”）。

將各實(shí)驗(yàn)組平板分別放置在教室不同高度的位置上，開(kāi)蓋暴露一段時(shí)間污染不正確牛肉膏、蛋白胨瓊脂（2015新課標(biāo)卷Ⅰ，39，15分）39.[生物——選修1：生物技術(shù)實(shí)踐已知微生物A可以產(chǎn)生油脂，微生物B可以產(chǎn)生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生產(chǎn)。回答有關(guān)問(wèn)題：（1）顯微觀察時(shí)，微生物A菌體中的油脂通常可用于

染色。微生物A產(chǎn)生的油脂不易揮發(fā)，可選用

（填“萃取法”或“水蒸氣蒸餾法”）從菌體中提取。（2）為了從自然界中獲得能產(chǎn)生脂肪酶的微生物B的單菌落，可從含有油料作物種子腐爛物的土壤中取樣，并應(yīng)選用以

為唯一碳源的固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。（3）若要測(cè)定培養(yǎng)液中微生物B的菌體數(shù)，可在顯微鏡下用

直接計(jì)數(shù)；若要測(cè)定其活菌數(shù)量，可選用

法進(jìn)行計(jì)數(shù)。（4）為了確定微生物B產(chǎn)生的脂肪酶的最適溫度，某同學(xué)測(cè)得相同時(shí)間內(nèi)，在35℃、40℃、45℃溫度下降解10g油脂所需酶量依次為4mg、1mg、6mg，則上述三個(gè)溫度中，

℃條件下該酶活力最小。為了進(jìn)一步確定該酶的最適溫度，應(yīng)圍繞

℃設(shè)計(jì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

蘇丹Ⅲ（或蘇丹Ⅳ）萃取法油脂血細(xì)胞計(jì)數(shù)板稀釋涂布平板4540（2014課標(biāo)Ⅰ卷）39.[生物——選修1：生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)]（15分）植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解。回答下列問(wèn)題:（1）分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶是由3種組分組成的復(fù)合酶，其中的葡萄糖苷酶可將

分解成

。（2）在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅（CR）時(shí)，CR可與纖維素形成

色復(fù)合物。用含有CR的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時(shí)，培養(yǎng)基上會(huì)出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的

。

纖維二糖

葡萄糖紅

透明圈（3）為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學(xué)設(shè)計(jì)了甲、乙兩種培養(yǎng)基（成分見(jiàn)下表）：注：“+”表示有，“－”表示無(wú)。據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲

（填“能”或“不能”）用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是

；培養(yǎng)基乙

（填“能”或“不能”）用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是

；酵母膏無(wú)機(jī)鹽淀粉纖維素粉瓊脂CR溶液水培養(yǎng)基甲++++-++培養(yǎng)基乙+++-+++不能液體培養(yǎng)基不能用于分離單菌落不能乙培養(yǎng)基中沒(méi)有纖維素，不會(huì)形成CR-纖維素紅色復(fù)合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌(2016四川卷)10.（12分）圖甲是從土壤中篩選產(chǎn)脲酶細(xì)菌的過(guò)程，圖乙是脲酶基因轉(zhuǎn)錄的mRNA部分序列（1）圖中選擇培養(yǎng)基應(yīng)以

為唯一氮源；鑒別培養(yǎng)基還需添加

作指示劑，產(chǎn)脲酶細(xì)菌在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)一段時(shí)間后，其菌落周?chē)闹甘緞⒆兂?/p>

色。（2）在5個(gè)細(xì)菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數(shù)為105

的土壤樣品液0.1mL，培養(yǎng)一段時(shí)間后，平板上長(zhǎng)出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191。該過(guò)程采取的接種方法是

，每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為

×108個(gè)；與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法相比，此計(jì)數(shù)方法測(cè)得的細(xì)菌數(shù)較

。

尿素酚紅紅稀釋涂布平板法1.75少（3）現(xiàn)有一菌株的脲酶由于基因突變而失活，突變后基因轉(zhuǎn)錄的mRNA在圖乙箭頭所示位置增加了70個(gè)核苷酸，使圖乙序列中出現(xiàn)終止密碼（終止密碼有UAG、UGA和UAA）。突變基因轉(zhuǎn)錄的mRNA中，終止密碼為

，突變基因表達(dá)的蛋白質(zhì)含

個(gè)氨基酸。UGA115(2016全國(guó)卷III)39．某同學(xué)用新鮮的泡菜濾液為實(shí)驗(yàn)材料純化乳酸菌。分離純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣?；卮鹣铝袉?wèn)題：（1）分離純化乳酸菌時(shí)，首先需要用_________________對(duì)泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)M(jìn)行梯度稀釋的理由是_________________。（2）推測(cè)在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用有_________________和_________________。分離純化時(shí)應(yīng)挑選出_________________的菌落作為候選菌。（3）乳酸菌在-20℃長(zhǎng)期保存時(shí)，菌液中常需要加入一定量的_________________（填“蒸餾水”、“甘油”或“碳酸鈣”）。無(wú)菌水在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的乳酸菌將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落中和乳酸菌代謝過(guò)程中產(chǎn)生的乳酸

鑒別能產(chǎn)生乳酸的乳酸菌產(chǎn)生透明圈甘油（2014課標(biāo)Ⅱ卷）39．[生物——選修1：生物技術(shù)實(shí)踐]（15分）為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測(cè)定了該河流水樣中的細(xì)菌含量，并進(jìn)行了細(xì)菌的分離等工作?；卮鹣铝袉?wèn)題：（1）該小組采用

法檢測(cè)水樣中的細(xì)菌含量。在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣做的目的是

；然后，將1mL水樣稀釋100倍，在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為

。（2）該小組采用平板劃線法分離水樣中的細(xì)菌。操作時(shí)，接種環(huán)通過(guò)酒精燈火焰進(jìn)行

滅菌，在第二次及以后劃線時(shí)，總是從上一次的末端開(kāi)始劃線。這樣做的目的是

。（3）示意圖A和B中，

表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。（4）該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng)，另一部分進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液的

的含量，同時(shí)可以使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高

的利用率。稀釋涂布平板檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格3.8×107灼燒將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落B

溶解氧營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)

（2014四川卷）10.有機(jī)農(nóng)藥苯磺隆是一種除草劑，長(zhǎng)期使用會(huì)污染環(huán)境。研究發(fā)現(xiàn)，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分離降解苯磺隆的菌株和探索其降解機(jī)制的實(shí)驗(yàn)過(guò)程如圖甲、乙所示。（1）微生物生長(zhǎng)繁殖所需的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有碳源、水、________四類(lèi)，該實(shí)驗(yàn)所用的選擇培養(yǎng)基只能以苯磺隆作為唯一碳源，其原因是__________。（2）與微生物培養(yǎng)基相比，植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基常需添加生長(zhǎng)素和_______，這些植物激素一般需要事先單獨(dú)配置成_________保存?zhèn)溆?。?）純化菌株時(shí)，通常使用的劃線工具是________。劃線的某個(gè)平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長(zhǎng)滿(mǎn)了菌，第二劃線區(qū)域的第一條線上無(wú)菌落，其它劃線上有菌落。造成劃線無(wú)菌落可能的操作失誤有可能是________。（4）為探究苯磺隆的降解機(jī)制，將該菌種的培養(yǎng)液過(guò)濾離心，取上清液做圖乙所示實(shí)驗(yàn)。該實(shí)驗(yàn)的假設(shè)是________，該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是否合理？為什么？_______。

氮源和無(wú)機(jī)鹽只有能利用苯磺隆的微生物能正常生長(zhǎng)和繁殖細(xì)胞分裂素母液接種環(huán)接種環(huán)灼燒后未冷卻目的菌株能分泌降解苯磺隆的酶

不合理，缺少空白對(duì)照（江蘇卷）30.（8分）為了獲得β-胡蘿卜素產(chǎn)品，某小組開(kāi)展了產(chǎn)β-胡蘿卜素酵母的篩選與色素提取實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：（1）實(shí)驗(yàn)用的培養(yǎng)皿常用的兩種滅菌方法是

；為了減少滅菌后器皿被污染，滅菌前應(yīng)該

。（2）為了篩選出酵母菌，培養(yǎng)基中添加了青霉素，其目的是

。（3）右圖是滅菌鍋及其局部剖面示意圖，圖中甲、乙、丙指示的依次是

。（填序號(hào)）①安全閥、放氣閥、壓力表②放氣閥、安全閥、壓力表③安全閥、放氣閥、溫度表④放氣閥、安全閥、溫度表（4）為了將分離到的菌株純化，挑取了菌落在3塊相同平板上劃線，結(jié)果其中一塊平板的各劃線區(qū)均未見(jiàn)菌生長(zhǎng)，最可能的原因是

。（5）為增加β-胡蘿卜素提取量，在研磨酵母細(xì)胞時(shí)，添加石英砂的目的是；研磨時(shí)（填“需要”或“不需要”）添加CaCO3，理由是

。 干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌用報(bào)紙包扎器皿抑制細(xì)菌（放線菌）生長(zhǎng)

①接種環(huán)溫度過(guò)高，菌種被殺死不需要

β-胡蘿卜素較耐酸（2013新課標(biāo)II卷）39.[生物——選修1：生物技術(shù)實(shí)踐]（15分）臨床使用抗生素前，有時(shí)需要做細(xì)菌耐藥實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)時(shí)，首先要從病人身上獲取少量樣本，然后按照一定的實(shí)驗(yàn)步驟操作，以確定某致病菌對(duì)不同抗生素的敏感性。回答下列問(wèn)題：（1）為了從樣本中獲取致病菌單菌落，可用

法或

法將樣本接種于固體培養(yǎng)基表面，經(jīng)過(guò)選擇培養(yǎng)、鑒別等步驟獲得。（2）取該單菌落適當(dāng)稀釋?zhuān)?/p>

法接種于固體培養(yǎng)基表面，在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，使其均勻生長(zhǎng)，布滿(mǎn)平板。（3）為了檢測(cè)該致病菌對(duì)于抗生素的敏感性，將分別含有A、B、C、D四種抗生素的濾紙片均勻至于該平板上的不同位置，培養(yǎng)一段時(shí)間后，含A的濾紙片周?chē)霈F(xiàn)透明圈，說(shuō)明該致病菌對(duì)抗生素A

；含B的濾紙片周?chē)鷽](méi)有出現(xiàn)透明圈，說(shuō)明該致病菌對(duì)抗生素B

；含C的濾紙片周?chē)耐该魅Ρ群珹的小，說(shuō)明

；含D的濾紙片周?chē)耐该魅σ脖群珹的小，且透明圈中出現(xiàn)了一個(gè)菌落，在排除雜菌污染的情況下，此菌落很可能是抗生素D的

。（4）根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，為達(dá)到抗菌目的，最好應(yīng)選用抗生素

。平板劃線稀釋涂布平板涂布敏感不敏