OLC1在喉鱗狀細胞癌中的表達及其臨床意義

OLC1在喉鱗狀細胞癌中的表達及其臨床意義目的檢測OLC1在喉鱗狀細胞癌組織中的表達及其臨床意義。方法應用免疫組織化學方法檢測48例喉鱗狀細胞癌組織中OLC1的表達情況，并分析OLC1與喉鱗狀細胞癌臨床病理特征及預后的關(guān)系。結(jié)果OLC1在喉鱗狀細胞癌組織中的陽性表達率明顯高于癌旁組織。OLC1蛋白在喉鱗狀細胞癌組織中的陽性表達與患者的年齡、性別、腫瘤分型無關(guān)，而與組織學分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期正相關(guān)。結(jié)論OLC1高表達可能與喉鱗狀細胞癌發(fā)展的惡性進程有關(guān)，提示喉鱗狀細胞癌患者預后不良。標簽：喉鱗狀細胞癌；OLC1；臨床意義喉鱗狀細胞癌是頭頸部常見的惡性腫瘤之一，近年來流行病學資料顯示喉鱗狀細胞癌的發(fā)病率在我國呈上升趨勢，患者發(fā)病年齡呈年輕化趨勢。雖然外科手術(shù)治療及術(shù)后化療使病人的術(shù)后生存率有了較大提高，然而總體預后仍不容樂觀。喉鱗狀細胞癌具有高侵襲性，其發(fā)生、發(fā)展是一個多基因多階段的演進過程。OLC1（overexpressedinlungcancer）基因是我國學者在肺癌組織中通過高發(fā)量實驗篩選出的一個肺癌相關(guān)新基因，研究發(fā)現(xiàn)OLC1具有癌基因的屬性，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。本研究采用免疫組織化學方法檢測OLC1蛋白在喉鱗狀細胞癌中的表達，探討OLC1在喉癌鱗狀細胞發(fā)生、發(fā)展中的作用及臨床意義。1資料與方法1.1臨床病例選取贛南醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院2011年1月～2013年12月間行喉鱗狀細胞癌根治術(shù)且隨訪資料完整的48例病例，術(shù)前均未進行放、化療及免疫治療，且術(shù)后均在本院根據(jù)NCCN指南進行放療。其生存期從手術(shù)之日起開始計算，終止日期為死亡期或末次隨訪日期2014年12月15日。男43例、女5例、年齡46～75歲、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19例、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移29例。48例喉鱗狀細胞癌組織中組織學分級：高分化例9，中分化31例，低分化8例。根據(jù)國際抗癌協(xié)會TNM分期方案分為Ⅰ期10例、Ⅱ期8例、Ⅲ期20例、Ⅳ期8例。另外隨機選取遠離腫瘤（﹥1cm）的腫瘤旁正常組織（鏡下無癌）20例作對照組。1.2方法1.2.1檢測方法所有患者的手術(shù)標本離體后迅速投入10%中性甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，分別行HE染色及免疫組化染色。所有病例均由兩位病理醫(yī)師確診。主要試劑OLC1兔抗人多克隆抗體，稀釋比例為1：2000，武漢三鷹生物技術(shù)有限公司；采用免疫組織化學法，實驗步驟嚴格按照實驗說明書進行，每批實驗均設(shè)對照組。1.2.2結(jié)果判定分別由2名高年資的病理科主治醫(yī)師進行獨立閱片，根據(jù)其評分的平均值采用VOLM雙評分法進行判定。①按陽性細胞百分率評分：光鏡10×20倍下，隨機選擇5個染色均勻視野，陽性細胞百分率≤25%為1分，陽性細胞百分率26%～50%為2分，陽性細胞百分率>50%為3分；②按染色強度評分：無顯色為0分，黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。將上述兩項得分相加：0～2分判為+，3～4分判為++，5～6分判為+++。++和+++為陽性表達，+為陰性表達。1.2.3統(tǒng)計學方法應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件，組間比較采用χ2檢驗，P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。2結(jié)果2.1OLC1蛋白在喉鱗狀細胞癌組織和癌旁組織中的表達OLC1蛋白染色陽性定位于細胞漿，棕黃色粗顆粒狀。OLC1蛋白在癌旁組織中呈陰性表達，在喉鱗狀細胞癌組織呈陽性表達（圖1），超過70%的喉鱗狀細胞癌細胞有不同程度OLC1表達，40.8%的腫瘤呈中等程度表達，31%的腫瘤呈強陽性表達，見圖1。2.2OLC1蛋白與喉鱗狀細胞癌臨床病理因素的關(guān)系OLC1蛋白在喉癌組織中的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、病理分級有關(guān)（P均<0.05），與臨床分型、腫瘤大小、年齡和性別無關(guān)，見表1。3討論OLC1基因是我國學者在肺癌組織中通過高通量實驗篩選出的一個肺癌相關(guān)新基因。OLC1的全長cDNA長度為2383bp，其編碼一條長度為360氨基酸的多肽，含有DUF292和Proline-rieh兩個保守結(jié)構(gòu)域。Yuan等研究發(fā)現(xiàn)OLC1基因在肺鱗狀細胞癌中的表達量要顯著高于正常肺泡上皮細胞，隨后的研究發(fā)現(xiàn)OLC1不僅在肺鱗狀細胞癌中過度表達，在肺腺癌及小細胞肺癌中也呈過度表達，而且在肺鱗狀細胞癌發(fā)生的早期，OLC1的表達量就已經(jīng)升高；穩(wěn)定高表達OLC1的NIH/3T3細胞能在裸鼠皮下形成腫瘤，說明OLC1具有癌基因的屬性；若沉默OLC1的表達能引起肺癌細胞系H520和H1299生長變緩，集落形成減少和細胞凋亡發(fā)生；通過構(gòu)建OLC1穩(wěn)定高/低表達的食管鱗癌細胞系，研究細胞表型的改變，發(fā)現(xiàn)OLC1過表達可以促進細胞增殖、抑制凋亡，而OLC1被敲除之后可得到相反的結(jié)果[1，2]。對OLC1的生物學功能進一步研究發(fā)現(xiàn)，OLC1能在報告基因水平激活腫瘤細胞中NF-kappaB通路。在人食管鱗癌細胞研究中發(fā)現(xiàn)，OLC1過表達可下調(diào)BRCA1的表達，從而引起其下游靶基因Bcl-2的活化，進而抑制凋亡蛋白酶Caspase-3的激活，最終抑制細胞凋亡的發(fā)生[3，4]。在乳腺癌與卵巢癌的研究中發(fā)現(xiàn)OLC1的過表達提示乳腺癌與卵巢癌患者預后不良[5，6]。但目前對于OLC1在喉鱗狀細胞癌中的作用研究尚少。本研究發(fā)現(xiàn)OLC1在喉鱗狀細胞癌組織中的陽性表達率明顯高于癌旁組織，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，Ⅲ～Ⅳ期者高于Ⅰ～Ⅱ期，低分化者高于高分化者和中分化者。提示在喉癌的發(fā)生發(fā)展過程中，OLC1可能起重要作用。隨著OLC1蛋白表達的增強，喉鱗狀細胞癌細胞侵襲性和轉(zhuǎn)移能力明顯增強，表明OLC1在喉鱗狀細胞癌的發(fā)生、發(fā)展、惡性進展、侵襲轉(zhuǎn)移中起重要作用，這可能與一些相關(guān)的抑癌基因作用被抑制，致癌通路的異常激活及腫瘤轉(zhuǎn)移因子作用增強有關(guān)?？傊?，喉鱗狀細胞癌組織中OLC1蛋白呈高表達，通過測定OLC1蛋白的表達量及研究其與臨床病理特征之間的關(guān)系，可進一步深入了解相關(guān)調(diào)節(jié)機制有助于人們更好地了解喉鱗狀細胞發(fā)生發(fā)展的分子機制，有望為其診斷、治療技術(shù)的進一步發(fā)展奠定理論基礎(chǔ)。圖1OLC1在低分化喉鱗狀細胞癌組織呈強陽性表達SP法參考文獻：[1]YuanJ，MaJ，ZhengH，ShiT，etal.OverexpressionofOLC1，cigarettesmoke，andhumanlungtumorigenesis[J].JNatlCancerInst，2008，100（22）：1592-1605.[2]楊龍海，肖汀，譚金晶，等.OLC1蛋白在非小細胞肺癌患者外周血血漿中的水平及其臨床意義[J].中華腫瘤雜志，2014，36（5）：362-365.[3]陳瑋.OLC1的泛素化降解機制研究以及β-catenin在人食管鱗癌中的表達和預后分析[D].中國優(yōu)秀碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫，2011，（04）.[4]李瀟.OLC1過表達對人食管鱗癌細胞的生物學作用及其分子機制研究[D].中國優(yōu)秀碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫，2008，（02）.[5]Ou-YangQH，DuanZX，JinZ，etal.OLC1isoverexpressedinbreastcanceranditsexpressioncorrelateswithpoorpatientsurvival[J].TumourBiol.2014，35（9）：8823-7.[6]Jiac，