2025年高考生物一輪復(fù)習(xí)（人教版）配套課件 第十單元 第57課時 微生物的培養(yǎng)技術(shù)與應(yīng)用

第57課時微生物的培養(yǎng)技術(shù)與應(yīng)用1.通過配制培養(yǎng)基、滅菌、接種和培養(yǎng)等實驗操作獲得純化的酵母菌菌落。2.分離土壤中分解尿素的細(xì)菌，并進(jìn)行計數(shù)。課標(biāo)要求考情分析1.微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)2023·全國乙·T37

2022·天津·T3

2021·天津·T12.微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)2023·山東·T15

2023·廣東·T10

2023·北京·T16

2022·全國甲·T37

2022·全國乙·T37

2022·廣東·T21

2021·江蘇·T18內(nèi)容索引考點一微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)考點二微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)課時精練考點一微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)1.培養(yǎng)基的配制(1)培養(yǎng)基的概念、用途和類型①概念：人們按照微生物對

的不同需求，配制出的供其____________的營養(yǎng)基質(zhì)。②用途：用以

微生物或積累其

。營養(yǎng)物質(zhì)生長繁殖培養(yǎng)、分離、鑒定、保存代謝物③培養(yǎng)基的種類(按物理性質(zhì)分)培養(yǎng)基種類培養(yǎng)基特點作用_____培養(yǎng)基加凝固劑，如_____微生物的分離與鑒定，活菌計數(shù)，保藏菌種半固體培養(yǎng)基容器放倒不致流出，劇烈震動則破散觀察微生物的運動、分類鑒定_____培養(yǎng)基不加凝固劑常用于工業(yè)生產(chǎn)、微生物的擴(kuò)大培養(yǎng)固體瓊脂液體(2)培養(yǎng)基的配方①主要營養(yǎng)物質(zhì)：水、

、氮源、

。②其他條件：pH、

和氧氣。如表：碳源無機(jī)鹽特殊營養(yǎng)物質(zhì)微生物乳酸桿菌霉菌細(xì)菌厭氧微生物特殊需求添加______一般pH調(diào)至____一般pH調(diào)至__________________維生素酸性無氧或弱堿性中性2.無菌技術(shù)(1)目的：獲得

的微生物培養(yǎng)物。(2)關(guān)鍵：防止

污染。純凈雜菌(3)消毒與滅菌的比較項目消毒滅菌作用強(qiáng)度較為_____的理化因素______的理化因素作用程度殺死物體表面或內(nèi)部______微生物殺死物體內(nèi)外_____的微生物芽孢和孢子一般不能殺滅能殺滅適用對象實驗操作的空間、操作者的衣著和雙手微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等常用方法______消毒法、_____消毒法等_____滅菌法、_____滅菌法、_____滅菌法等溫和一部分強(qiáng)烈所有煮沸巴氏濕熱干熱灼燒(4)注意事項①實驗操作時，應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與

接觸。②為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應(yīng)在超凈工作臺上并在_____________附近進(jìn)行。周圍的物品酒精燈火焰3.微生物的純培養(yǎng)概念辨析固體培養(yǎng)基一定形態(tài)結(jié)構(gòu)4.純培養(yǎng)的過程(以酵母菌為例)：包括__________________________________等步驟。(1)制備培養(yǎng)基倒平板注意事項：a.溫度：50℃左右；b.操作：在

附近；c.冷凝后平板倒置。

配制培養(yǎng)基、滅菌、接種、分離和培養(yǎng)濕熱滅菌法酒精燈火焰提醒平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，將平板倒置，既可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，又可以避免培養(yǎng)基中的水分過快揮發(fā)。(2)接種和分離酵母菌①平板劃線法的原理：通過

在固體培養(yǎng)基表面

的操作，將聚集的菌種逐步

到培養(yǎng)基的表面。經(jīng)數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離得到

。接種環(huán)連續(xù)劃線稀釋分散單菌落②平板劃線法的操作步驟(3)培養(yǎng)酵母菌將接種后的平板和一個

的平板倒置，放入28℃左右的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48h。未接種(1)培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽，有時還需要加入一些特殊的物質(zhì)(

)(2)倒平板時，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上(

)提示倒平板時，用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，將錐形瓶中的培養(yǎng)基(10～20mL)倒入培養(yǎng)皿，立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋，不能打開皿蓋?！獭?3)為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落(

)提示接種環(huán)灼燒滅菌后，應(yīng)冷卻后再挑取菌落，以免高溫殺死菌種?！?4)對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和滅菌(

)提示對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒?！涟l(fā)酵生產(chǎn)啤酒的過程中，雜菌產(chǎn)生的微量副產(chǎn)物是啤酒“上頭”的原因之一，可采用平板劃線法對酵母菌進(jìn)行純化。如圖是平板劃線操作的示意圖，據(jù)圖回答下列問題：(1)用圖中字母和箭頭表示平板劃線操作的正確步驟：_______________________。d→b→f→a→e→c→h→g(2)在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？提示需要；劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者。(3)在第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？提示劃線后，線條末端菌種的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使菌種的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個微生物繁殖而來的菌落。(4)接種結(jié)束后，為什么要將一個未接種的培養(yǎng)基和一個已接種的培養(yǎng)基放在一起培養(yǎng)，未接種的培養(yǎng)基表面如果有菌落生長，說明了什么？提示培養(yǎng)未接種的培養(yǎng)基的作用是對照，未接種的培養(yǎng)基經(jīng)過培養(yǎng)后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的；若有菌落生長，說明培養(yǎng)基滅菌不徹底，或培養(yǎng)基被污染了，需要重新制備。考向一微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)1.(2022·湖北，4)滅菌、消毒、無菌操作是生物學(xué)實驗中常見的操作。下列敘述正確的是A.動、植物細(xì)胞DNA的提取必須在無菌條件下進(jìn)行B.微生物、動物細(xì)胞培養(yǎng)基中需添加一定量的抗生素以防止污染C.為防止蛋白質(zhì)變性，不能用濕熱滅菌法對牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌D.可用濕熱滅菌法對實驗中所使用的微量離心管、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等進(jìn)行滅菌√12動、植物細(xì)胞DNA的提取不需要在無菌條件下進(jìn)行，A錯誤；動物細(xì)胞培養(yǎng)基中需添加一定量的抗生素以防止污染，保證無菌環(huán)境，但微生物的培養(yǎng)不能加入抗生素，因為抗生素會殺死某些微生物，B錯誤；一般用濕熱滅菌法對牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，防止雜菌污染，C錯誤。122.(2020·江蘇，19)為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上劃線接種纖維素降解細(xì)菌，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。下列敘述正確的是A.倒平板后需間歇晃動，以保證表面平整B.圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細(xì)菌數(shù)量均太多，應(yīng)從

Ⅲ區(qū)挑取單菌落C.該實驗結(jié)果因單菌落太多，不能達(dá)到菌

種純化的目的D.菌落周圍的纖維素被降解后，可被剛果紅染成紅色12√溫度降低后，培養(yǎng)基易凝固，因此倒平板后要及時輕輕晃動，以保持均一性，A錯誤；由題圖可知，隨著劃線次數(shù)增多，細(xì)菌密度逐漸減小，Ⅲ區(qū)開始出現(xiàn)單菌落，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落，B正確；菌落是由單個微生物細(xì)胞或多個同種細(xì)胞繁殖到一定程度后形成的，能得到單菌落即可以達(dá)到菌種純化的目的，C錯誤；剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物，菌落周圍的纖維素被降解后紅色消失，出現(xiàn)透明圈，D錯誤。12返回考點二微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)1.區(qū)分選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基種類特點用途舉例選擇培養(yǎng)基允許______________________，同時_________________________________從眾多微生物中分離所需的微生物以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基分離得到尿素分解菌鑒別培養(yǎng)基根據(jù)微生物的代謝特點在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品，進(jìn)而產(chǎn)生特定的顏色或其他變化鑒別不同種類的微生物用伊紅—亞甲藍(lán)培養(yǎng)基鑒別大腸桿菌特定種類的微生物生長抑制或阻止其他種類微生物生長提醒常見選擇培養(yǎng)基舉例：(1)缺少氮源的培養(yǎng)基可以篩選能利用大氣中N2的微生物。(2)含青霉素的培養(yǎng)基可淘汰細(xì)菌，篩選出真菌。(3)無有機(jī)碳源的培養(yǎng)基可篩選出自養(yǎng)微生物。2.微生物的選擇培養(yǎng)和數(shù)量測定(1)稀釋涂布平板法步驟①系列稀釋操作：該操作常用在將細(xì)胞接種到培養(yǎng)基之前，通過液體稀釋的方法分散細(xì)胞，隨著稀釋程度的增大，單位體積中的微生物細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)胞得以分散。操作步驟：②涂布平板操作步驟培養(yǎng)基酒精冷卻菌液(2)微生物的數(shù)量測定方法①顯微鏡直接計數(shù)法提醒顯微鏡直接計數(shù)法本身不能區(qū)分細(xì)菌的死活，但是通過一定的輔助處理，可以實現(xiàn)活菌計數(shù)，如在計數(shù)前用臺盼藍(lán)染液進(jìn)行染色，可以通過統(tǒng)計無色細(xì)胞的個數(shù)來對活菌進(jìn)行計數(shù)。②間接計數(shù)法——活菌計數(shù)法(即稀釋涂布平板法)a.原理：當(dāng)樣品的稀釋度

時，培養(yǎng)基表面生長的一個

，來源于樣品稀釋液中的

。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。b.計數(shù)原則：為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)為

的平板進(jìn)行計數(shù)。足夠高單菌落一個活菌30～300c.誤差分析：用此種方法統(tǒng)計的菌落數(shù)目往往比活菌的實際數(shù)目

(填“高”或“低”)，因為_________________________________________________________。低當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落3.土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)的實驗操作(1)實驗原理脲酶尿素(2)實驗流程3～830～300稀釋涂布平板30～37菌落數(shù)目穩(wěn)定(3)實驗結(jié)果分析與評價對照的培養(yǎng)皿中對照的培養(yǎng)皿中少于30～300(1)利用稀釋涂布平板法統(tǒng)計菌落數(shù)目時，統(tǒng)計的菌落數(shù)就是活菌的實際數(shù)(

)提示當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的是一個菌落，故稀釋涂布平板法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目少?！?2)統(tǒng)計菌落數(shù)目時為保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)目最多的平板進(jìn)行統(tǒng)計(

)提示統(tǒng)計菌落數(shù)目時為保證結(jié)果準(zhǔn)確，在同一稀釋度下，應(yīng)至少對3個平板進(jìn)行重復(fù)計數(shù)，然后求出平均值?！?3)利用稀釋涂布平板法和平板劃線法均可實現(xiàn)細(xì)菌的分離和計數(shù)(

)提示利用稀釋涂布平板法和平板劃線法均可實現(xiàn)細(xì)菌的分離，但平板劃線法不能用于微生物的計數(shù)?！?4)利用顯微鏡直接計數(shù)法統(tǒng)計的細(xì)菌數(shù)量就是活菌的數(shù)量(

)提示顯微鏡直接計數(shù)法不能區(qū)分細(xì)菌的死活，因此統(tǒng)計的結(jié)果一般是活菌數(shù)和死菌數(shù)的總和?！猎诎l(fā)酵生產(chǎn)啤酒過程中，要隨時檢測培養(yǎng)液中的酵母菌數(shù)量、產(chǎn)物濃度等，以了解發(fā)酵進(jìn)程。甲、乙、丙三位同學(xué)用稀釋涂布平板法測定同一培養(yǎng)液的酵母菌數(shù)。在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下三種統(tǒng)計結(jié)果。(1)甲同學(xué)在該濃度下涂布了一個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)為230，該同學(xué)的統(tǒng)計結(jié)果是否真實可靠？為什么？提示不可靠；為增加實驗的說服力與準(zhǔn)確性，應(yīng)設(shè)置重復(fù)實驗，在同一稀釋度下至少涂布3個平板，統(tǒng)計結(jié)果后計算平均值。(2)乙同學(xué)在該濃度下涂布了3個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別為21、212、256，該同學(xué)將21舍去，然后取平均值。該同學(xué)對實驗結(jié)果的處理是否合理？為什么？提示不合理；微生物計數(shù)時，如果實驗中出現(xiàn)重復(fù)實驗的結(jié)果差別很大的情況，應(yīng)分析實驗過程中可能的影響因素，找出差異的原因，而不能簡單地將結(jié)果舍棄后進(jìn)行計數(shù)。(3)在稀釋涂布平板法中，為何需至少涂布3個平板？提示作為重復(fù)實驗，統(tǒng)計時取平均值，以減少偶然因素對實驗結(jié)果的影響，增強(qiáng)實驗結(jié)果的說服力。(4)為什么要選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果？提示盡量縮小統(tǒng)計的菌落數(shù)與實際活菌數(shù)的差值，因為繁殖慢的菌體開始看不出明顯的菌落特征。(5)丙同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均值為234個(涂布平板時所用稀釋液的體積為0.1mL)，那么稀釋倍數(shù)為106的試管中細(xì)菌的濃度是

個/mL。每克樣品中的細(xì)菌數(shù)是

個。2.34×1032.34×109考向二目標(biāo)微生物的篩選與鑒定3.(2023·廣東，10)研究者擬從堆肥中取樣并篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌。根據(jù)堆肥溫度變化曲線(如圖)和選擇培養(yǎng)基篩選原理來判斷，下列最可能篩選到目標(biāo)菌的條件組合是A.a點時取樣、尿素氮源培養(yǎng)基B.b點時取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基C.b點時取樣、蛋白胨氮源培養(yǎng)基D.c點時取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基34√56研究目的是篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌，因此目標(biāo)菌既要耐高溫，又要能夠高效降解角蛋白，所以應(yīng)在c點時取樣，并且用角蛋白氮源培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)，D符合題意。34564.(2022·江蘇，3)下列是某同學(xué)分離高產(chǎn)脲酶菌的實驗設(shè)計，不合理的是A.選擇農(nóng)田或公園土壤作為樣品分離目的菌株B.在選擇培養(yǎng)基中需添加尿素作為唯一氮源C.適當(dāng)稀釋樣品是為了在平板上形成單菌落D.可分解酚紅指示劑使其褪色的菌株是產(chǎn)脲酶菌34√56農(nóng)田或公園土壤中含有較多的產(chǎn)脲酶的微生物，A正確；為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，配制的培養(yǎng)基應(yīng)選擇尿素作為唯一氮源，能合成脲酶的微生物在該培養(yǎng)基上能生長，B正確；當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，C正確；在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的pH升高，酚紅指示劑將變紅，因此在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，能對分離的菌種做進(jìn)一步鑒定，D錯誤。3456考向三微生物的分離與計數(shù)5.(2024·湖北高三調(diào)研)研究者從溫泉中篩選出能高效產(chǎn)生耐高溫淀粉酶的嗜熱細(xì)菌的過程如圖1所示。將得到的嗜熱細(xì)菌懸液轉(zhuǎn)接到特定固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到若干菌落后用碘液作顯色處理，結(jié)果如圖2所示。下列說法錯誤的是A.過程①②一般都取1mL菌液轉(zhuǎn)移B.試管甲、乙都通過無菌水稀釋C.圖2中周圍不顯藍(lán)色的菌落含有

所需菌種D.過程①②屬于稀釋涂布平板法，能對分離得到的微生物進(jìn)行計數(shù)34√56過程①為稀釋過程，一般都取1mL菌液轉(zhuǎn)移，過程②為涂布平板過程，一般取0.1mL菌液進(jìn)行涂布，A錯誤；圖2中周圍不顯藍(lán)色的菌落產(chǎn)生的淀粉酶可以在高溫下分解淀粉，所以周圍不顯藍(lán)色的菌落含有所需菌種，C正確。34566.(2020·江蘇，31)產(chǎn)脂肪酶酵母可用于含油廢水處理。為篩選產(chǎn)脂肪酶酵母菌株，科研人員開展了相關(guān)研究。請回答下列問題：(1)常規(guī)微生物實驗中，下列物品及其滅菌方法錯誤的是_____(填編號)。34編號①②③④物品培養(yǎng)基接種環(huán)培養(yǎng)皿涂布器滅菌方法高壓蒸汽火焰灼燒干熱臭氧④56(2)稱取1.0g某土壤樣品，轉(zhuǎn)入99mL無菌水中，制備成菌懸液，經(jīng)__________后，獲得細(xì)胞密度不同的菌懸液。分別取0.1mL菌懸液涂布在固體培養(yǎng)基上，其中10倍稀釋的菌懸液培養(yǎng)后平均長出了46個酵母菌落，則該樣本中每克土壤約含酵母菌___________________個。34等比稀釋4.6×105(或460000)5634利用稀釋涂布平板法統(tǒng)計活菌數(shù)目時，需要將制備的菌懸液進(jìn)行等比稀釋，以獲得細(xì)胞密度不同的菌懸液，一般來說，菌落數(shù)為30～300的平板最適于計數(shù)。0.1mL菌懸液中含有46個酵母菌落，則1mL菌懸液中含有460個酵母菌落；1.0g土壤樣品首先稀釋100倍，然后稀釋10倍，共稀釋了1000倍，因此樣本中每克土壤約含酵母菌460×1000＝4.6×105(個)。56(3)為了進(jìn)一步提高酵母菌產(chǎn)酶能力，對分離所得的菌株，采用射線輻照進(jìn)行______育種。將輻照處理后的酵母菌涂布在以______為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時間后，按照菌落直徑大小進(jìn)行初篩，選擇直徑______的菌落，純化后獲得A、B兩突變菌株。34誘變脂肪較大5634采用射線輻照引起酵母菌基因突變，此種方法屬于誘變育種。檢查誘變酵母菌產(chǎn)脂肪酶的能力，需要把酵母菌接種到以脂肪為唯一碳源的培養(yǎng)基上，按照產(chǎn)生菌落直徑大小進(jìn)行初步篩選，直徑大的說明產(chǎn)酶能力強(qiáng)，利用的脂肪(碳源)多，直徑小的說明產(chǎn)酶能力弱，利用的脂肪(碳源)少。56(4)在處理含油廢水的同時，可獲得單細(xì)胞蛋白，實現(xiàn)污染物資源化。為評價A、B兩菌株的相關(guān)性能，進(jìn)行了培養(yǎng)研究，結(jié)果如圖。據(jù)圖分析，應(yīng)選擇菌株___進(jìn)行后續(xù)相關(guān)研究，理由是___________________________________________________________________。34B

該菌株增殖速度快，單細(xì)胞蛋白產(chǎn)量高；降解脂肪能力強(qiáng)，凈化效果好5634通過分析題圖可知，相同時間內(nèi)，菌株B細(xì)胞密度大，說明該菌株增殖速度快，單細(xì)胞蛋白產(chǎn)量高；相同時間內(nèi)，菌株B利用的脂肪多，脂肪剩余量少，說明該菌株降解脂肪的能力強(qiáng)，凈化效果好。561.(選擇性必修3P10)培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括

等。2.(選擇性必修3P11)無菌技術(shù)的選擇：對于一些不耐高溫的液體，如牛奶，可使用

法；用

消毒水源；培養(yǎng)基一般采用

法進(jìn)行滅菌；培養(yǎng)皿可以采用

法滅菌；接種環(huán)可以采用________法滅菌。水、無機(jī)鹽、碳源、氮源巴氏消毒濕熱滅菌氯氣干熱滅菌灼燒滅菌3.(選擇性必修3P13)平板劃線操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了________________________________________；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了________________________________________________________________________________________________，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到單菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能___________________________________________________________。避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端殺死及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者4.(選擇性必修3P16)選擇培養(yǎng)基是指________________________________________________________________________________________。5.(選擇性必修3P19)檢測培養(yǎng)物中是否有雜菌污染的方法是____________________________________________________。判斷選擇培養(yǎng)基是否起到篩選作用的方法是____________________________________________________________________________________________________。

在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基同時培養(yǎng)滅菌后的未接種的培養(yǎng)基，觀察是否有菌落產(chǎn)生配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對照，觀察選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)是否遠(yuǎn)少于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目6.(2023·新課標(biāo)，35節(jié)選)從豆科植物的根瘤中分離根瘤菌進(jìn)行培養(yǎng)，可以獲得純培養(yǎng)物，此實驗中的純培養(yǎng)物是

。7.(2021·廣東，21節(jié)選)基于菌株H嗜鹽、酸堿耐受能力強(qiáng)等特性，研究人員設(shè)計了一種不需要滅菌的發(fā)酵系統(tǒng)，其培養(yǎng)基鹽濃度設(shè)為60g/L，pH為10，菌株H可正常持續(xù)發(fā)酵60d以上。該系統(tǒng)不需要滅菌的原因是_______________________________________________________________________________________________________(答出兩點即可)。由根瘤菌繁殖形成的單菌落鹽濃度為60g/L的條件下，其他雜菌因失水過多而死亡；pH為10的條件下，其他雜菌的酶變性失活，生長繁殖受抑制8.(2023·全國乙，37節(jié)選)在粉碎的秸稈中接種菌T，培養(yǎng)一段時間后發(fā)現(xiàn)菌T能夠?qū)⒔斩捴械睦w維素大量分解，其原因是

。9.(2022·河北，23節(jié)選)枯草芽孢桿菌為好氧微生物，液體培養(yǎng)時應(yīng)采用

(填“靜置”或“搖床震蕩”)培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中抽樣檢測活菌數(shù)量時，應(yīng)采用

(填“稀釋涂布平板法”或“顯微鏡直接計數(shù)法”)，其原因是__________________________________________________________________________________________________________________。菌T能夠分泌纖維素酶搖床震蕩稀釋涂布平板法用稀釋涂布平板法在培養(yǎng)基上看到的每一個菌落都來自一個活細(xì)胞，而顯微鏡直接計數(shù)法會將死亡的枯草芽孢桿菌也計算在內(nèi)10.(2022·全國乙，37節(jié)選)若以制糖廢液作為碳源，為進(jìn)一步確定生產(chǎn)S的最適碳源濃度，某同學(xué)進(jìn)行了相關(guān)實驗。請簡要寫出實驗思路：_____________________________________________________________________________________________________________________。返回設(shè)計一系列不同濃度的制糖廢液分別培養(yǎng)菌株C，測定不同濃度制糖廢液中S產(chǎn)量，尋找S產(chǎn)量最大的碳源濃度，確定最適碳源濃度課時精練一、選擇題1.(2024·重慶高三聯(lián)考)熔噴布的主要成分是聚丙烯，會對環(huán)境造成污染。某科研小組從土壤中分離到一種能分解聚丙烯的細(xì)菌。下列說法正確的是A.配制固體培養(yǎng)基時，需要在無菌的環(huán)境中進(jìn)行B.制備培養(yǎng)基時需要先將培養(yǎng)基的pH調(diào)節(jié)至中性或弱堿性C.從土壤中分離能分解聚丙烯的細(xì)菌，可采用平板劃線法進(jìn)行分離與計數(shù)D.純化培養(yǎng)時，在培養(yǎng)皿皿蓋做標(biāo)記后倒置在恒溫培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)123456789101112√配制固體培養(yǎng)基時，不需要在無菌的環(huán)境中進(jìn)行，因為培養(yǎng)基配制好之后會進(jìn)行滅菌，A錯誤；平板劃線法只能對微生物進(jìn)行分離，不能計數(shù)，C錯誤；純化培養(yǎng)時，在培養(yǎng)皿皿底做標(biāo)記后倒置在恒溫培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)，這樣方便觀察，D錯誤。1234567891011122.(2023·淮安高三模擬)如圖為實驗室中酵母菌純培養(yǎng)過程的部分操作步驟，下列說法正確的是123456789101112A.微生物的純培養(yǎng)物就是指不含代謝廢物的微生物培養(yǎng)物B.步驟①中，用手觸摸估計培養(yǎng)基冷卻至室溫后開始倒平板C.步驟①使用的培養(yǎng)基制備過程是先調(diào)pH再滅菌D.③到④過程中，每次劃線后都需要灼燒接種環(huán)并蘸取菌液√由單一個體繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物，A錯誤；步驟①中，用手觸摸估計培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時，開始倒平板，B錯誤；③到④過程中，每次劃線后對接種環(huán)進(jìn)行灼燒處理，是為了殺死接種環(huán)上殘留的菌種，使劃線時接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，不需要重新蘸取菌液，D錯誤。1234567891011123.(2021·山東，14)解脂菌能利用分泌的脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸會使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{(lán)色。將不能直接吸收脂肪的甲、乙兩種菌分別等量接種在醇溶青瓊脂平板上培養(yǎng)。甲菌菌落周圍呈現(xiàn)深藍(lán)色，乙菌菌落周圍不變色，下列說法錯誤的是A.甲菌屬于解脂菌B.實驗中所用培養(yǎng)基以脂肪為唯一碳源C.可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進(jìn)行對比D.該平板可用來比較解脂菌分泌脂肪酶的能力√123456789101112乙菌菌落周圍沒有出現(xiàn)深藍(lán)色，說明乙菌不能產(chǎn)生脂肪酶，不能利用脂肪為其供能，但乙菌可以在培養(yǎng)基上生存，說明該培養(yǎng)基不是以脂肪為唯一碳源，B錯誤。1234567891011124.(2023·山東，15)平板接種常用在微生物培養(yǎng)中。下列說法正確的是A.不含氮源的平板不能用于微生物培養(yǎng)B.平板涂布時涂布器使用前必須進(jìn)行消毒C.接種后未長出菌落的培養(yǎng)基可以直接丟棄D.利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物12345678910√1112不含氮源的平板可用于固氮菌的培養(yǎng)，A錯誤；平板涂布時涂布器使用前必須先浸在酒精中，然后在火焰上灼燒滅菌，這種操作屬于滅菌，B錯誤；使用后的培養(yǎng)基即使未長出菌落也要在丟棄前進(jìn)行滅菌處理，不能直接丟棄，以免污染環(huán)境，C錯誤；脲酶可以催化尿素分解，在以尿素為唯一氮源的平板上，能合成脲酶的微生物可以分解尿素進(jìn)行生長繁殖，D正確。1234567891011125.(2024·咸陽高三調(diào)研)為加速我國北方冬春季秸稈原位還田的腐化過程，研究人員以凍牛糞為材料篩選出耐低溫(10℃)的纖維素降解菌。下列相關(guān)敘述正確的是A.選用凍牛糞為材料與其富含纖維素及含耐低溫微生物有關(guān)B.初篩菌種前，要利用固體培養(yǎng)基在37℃條件下擴(kuò)大培養(yǎng)目標(biāo)菌種C.用于篩選的培養(yǎng)基是加入剛果紅染料的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基D.應(yīng)選擇菌落直徑與周圍透明圈直徑比值大的菌落進(jìn)行純化√123456789101112篩選耐低溫的纖維素降解菌需要到其所生活的環(huán)境中尋找，凍牛糞中富含纖維素和耐低溫微生物，所以選用凍牛糞為材料可篩選出耐低溫的纖維素降解菌，A正確；初篩菌種前，要利用液體培養(yǎng)基在10℃條件下擴(kuò)大培養(yǎng)目標(biāo)菌種，B錯誤；用于篩選的培養(yǎng)基是以纖維素為唯一碳源的固體培養(yǎng)基，加入剛果紅染料起鑒別作用，C錯誤；菌落直徑與透明圈直徑比值越小，分解纖維素的能力越強(qiáng)，應(yīng)選擇菌落直徑與周圍透明圈直徑比值小的菌落進(jìn)行純化，D錯誤。1234567891011126.(2024·湖北宜荊荊恩四市高三聯(lián)考)營養(yǎng)缺陷型菌株是突變后某些酶被破壞，導(dǎo)致代謝過程中某些合成反應(yīng)不能進(jìn)行的菌株。如圖是科研人員利用影印法(用無菌絨布輕蓋在已長好菌落的原培養(yǎng)基上，然后不轉(zhuǎn)動任何角度，“復(fù)印”至新的培養(yǎng)基上)初檢某種氨基酸缺陷型菌株的過程。下列相關(guān)說法錯誤的是123456789101112A.①過程接種方法為稀釋涂布平板法，

接種后的培養(yǎng)皿不能立即進(jìn)行倒置

培養(yǎng)B.進(jìn)行②過程的順序是先將絲絨布“復(fù)

印”至完全培養(yǎng)基上，再“復(fù)印”

至基本培養(yǎng)基上C.氨基酸缺陷型菌株應(yīng)從基本培養(yǎng)基上沒有、完全培養(yǎng)基上對應(yīng)位置有

的菌落中挑選D.統(tǒng)計菌落種類和數(shù)量時要每隔一定時間觀察統(tǒng)計一次，直到各類菌落

數(shù)目穩(wěn)定為止√123456789101112進(jìn)行②過程培養(yǎng)時，為了防止將完全培養(yǎng)基中特定營養(yǎng)成分帶入基本培養(yǎng)基，應(yīng)先將絲絨布“復(fù)印”至基本培養(yǎng)基上，再“復(fù)印”至完全培養(yǎng)基上，B錯誤。1234567891011127.(2024·長春高三調(diào)研)研究人員擬從土壤樣品中分離出高效降解甲醇的酵母菌并進(jìn)行大量培養(yǎng)，操作流程如下。下列相關(guān)敘述錯誤的是123456789101112A.為保證無菌操作，接種環(huán)使用前必須灼

燒滅菌B.平板澆注分離法適宜于厭氧型或兼性厭

氧型的微生物的分離和計數(shù)C.挑取菌落時，應(yīng)挑取多個菌落，分別測

定酵母菌細(xì)胞中甲醇的含量D.為了獲得甲醇耐受酵母菌，可通過逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度來實現(xiàn)√挑取菌落時，應(yīng)挑取多個菌落，分別測定培養(yǎng)液中甲醇的含量，C錯誤。1234567891011128.(2024·武漢高三檢測)空氣細(xì)菌總數(shù)測定主要有自然沉降法和撞擊法。自然沉降法是讓空氣中的細(xì)菌自然降至瓊脂平板表面，撞擊法是將一定量空氣以較高的流速噴射撞擊到瓊脂平板上，空氣中的細(xì)菌即留滯在瓊脂表面。關(guān)于自然沉降法和撞擊法，下列分析錯誤的是A.用于檢測空氣中細(xì)菌總數(shù)時都需對不同方位和高度的空氣進(jìn)行采樣B.撞擊法對潔凈空氣中細(xì)菌總數(shù)的測定比自然沉降法更準(zhǔn)確C.兩種方法均可使用無選擇性的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基D.用兩種方法取樣后在瓊脂平板上形成的菌落均為單菌落123456789101112√由于上述兩種方法都是對空氣中細(xì)菌總數(shù)進(jìn)行測定，在瓊脂平板上形成的菌落有多種，不一定都是單菌落，D錯誤。1234567891011129.為篩選出可高效抑制番茄枯萎病菌(一類真菌)的土壤芽孢桿菌菌株，科研人員從土壤中采集、分離、篩選芽孢桿菌菌株作為待測菌株，并采用平板對峙培養(yǎng)法觀察各待測菌株的抑菌能力。如圖為研究過程示意圖，下列敘述錯誤的是A.過程①常利用移液器取0.1mL菌液

涂布平板B.過程②可根據(jù)芽孢桿菌菌落的形態(tài)、

顏色進(jìn)行挑選C.若甲、乙、丙三個平板的平均菌落

數(shù)為12個，則10g土樣中芽孢桿菌

約有1.2×109個D.實驗篩選出的菌株仍需進(jìn)行大田種植試驗以檢測防治效果123456789101112√若甲、乙、丙三個平板的平均菌落數(shù)為12個，平均菌落數(shù)是12個不符合30～300的菌落計數(shù)要求，C錯誤。123456789101112二、非選擇題10.大熊貓是我國特有的珍稀野生動物，每只成年大熊貓每日進(jìn)食竹子量可達(dá)12～38kg。大熊貓可利用竹子中8%的纖維素和27%的半纖維素。研究人員從大熊貓糞便和土壤中篩選纖維素分解菌。請回答下列問題：(1)纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。為篩選纖維素分解菌，將大熊貓新鮮糞便樣品稀釋液接種至以_______為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，該培養(yǎng)基從功能上分類屬于______培養(yǎng)基。123456789101112纖維素選擇在用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基中，纖維素分解菌能夠很好地生長，其他微生物則不能生長。為篩選纖維素分解菌，將大熊貓新鮮糞便樣品稀釋液接種至以纖維素為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)；培養(yǎng)基從功能上分類可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基，故該培養(yǎng)基從功能上分類屬于選擇培養(yǎng)基。123456789101112(2)配制的培養(yǎng)基必須進(jìn)行滅菌處理，目的是________________________________________________。檢測固體培養(yǎng)基滅菌效果的常用方法是________________________。123456789101112殺死培養(yǎng)基中的所有微生物(微生物和芽孢、孢子)不接種培養(yǎng)(或空白培養(yǎng))為檢測滅菌效果可對培養(yǎng)基進(jìn)行空白培養(yǎng)，即將未接種的培養(yǎng)基在適宜條件下培養(yǎng)一段時間，若在適宜條件下培養(yǎng)基中無菌落出現(xiàn)，說明培養(yǎng)基滅菌徹底，否則說明培養(yǎng)基滅菌不徹底。(3)為高效降解農(nóng)業(yè)秸稈廢棄物，研究人員利用從土壤中篩選獲得的3株纖維素分解菌，在37℃條件下進(jìn)行玉米秸稈降解實驗，結(jié)果如表所示。在該條件下纖維素酶活力最高的是菌株_____，理由是____________________________________________。123456789101112C接種C菌株后秸稈失重最多，纖維素降解率最大

菌株秸稈總重(g)秸稈殘重(g)秸稈失重(%)纖維素降解率(%)A2.001.5124.5016.14B2.001.5323.5014.92C2.001.4229.0023.32測定酶活力時可以用單位時間內(nèi)、單位體積中反應(yīng)物的減少量或產(chǎn)物的生成量來表示。由表格可知，在適宜的條件下，C菌株在相同的溫度和時間下，秸稈失重最多，纖維素降解率最大，說明該菌株的纖維素分解菌產(chǎn)生的纖維素酶活力最大。123456789101112菌株秸稈總重(g)秸稈殘重(g)秸稈失重(%)纖維素降解率(%)A2.001.5124.5016.14B2.001.5323.5014.92C2.001.4229.0023.3211.(2024·南京高三調(diào)研)生物興趣小組試圖探究牛和山羊的瘤胃中的微生物對尿素是否有分解作用，設(shè)計了以下實驗，并成功篩選到能降解尿素的細(xì)菌(目的菌)。培養(yǎng)基成分如表所示，實驗步驟如圖所示。請分析回答問題：123456789101112KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10g尿素1g瓊脂15g溶解后蒸餾水定容到1000mL(1)本實驗所使用的培養(yǎng)基按功能來分應(yīng)為_____培養(yǎng)基，原理是__________________________________________________________。123456789101112只有能合成脲酶的細(xì)菌才能分解尿素，才能在該培養(yǎng)基上生長(2)用來篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有___________________________________________________________。

為細(xì)菌生長提供無機(jī)鹽、作為緩沖劑維持細(xì)胞生長過程中pH的穩(wěn)定選擇(3)實驗是否需要振蕩培養(yǎng)來提高溶氧量：_____(填“是”或“否”)，原因是______________________________________________。轉(zhuǎn)為固體培養(yǎng)時，常采用__________________________法接種，獲得單菌落后繼續(xù)篩選。123456789101112否

瘤胃中的微生物多為厭氧菌，接觸空氣后會死亡平板劃線法或稀釋涂布平板(4)若在稀釋倍數(shù)為105的三個培養(yǎng)基中，菌落數(shù)分別是156、174、183，則每克內(nèi)容物中尿素分解菌的數(shù)目為__________個。1.71×108(5)為證明分離得到的細(xì)菌是否可以分解尿素，可在培養(yǎng)基中加入________指示劑，看指示劑是否________。123456789101112酚紅變紅(6)為進(jìn)一步確定取自瘤胃中液體的適當(dāng)稀釋倍數(shù)，將接種的培養(yǎng)皿放置在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48h，觀察并統(tǒng)計具有紅色環(huán)帶的菌落數(shù)，結(jié)果見表，其中合理的稀釋倍數(shù)為__________。123456789101112106或105稀釋倍數(shù)103104105106107菌落數(shù)>500367248361812.菌落總數(shù)可作為判定食品被污染程度的標(biāo)志，也可以用于觀察細(xì)菌在食品中繁殖的動態(tài)，以便對送檢樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評估提供證據(jù)。下圖是某樣品培養(yǎng)簡化流程圖，請分析回答下列問題：123456789101112123456789101112(1)該營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基配制過程中，其基本步驟包括按照培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確計算、稱量、溶化、調(diào)節(jié)pH、_______________________法滅菌等。然后將培養(yǎng)基放入47